大腸桿菌染色體的制備_第1頁
大腸桿菌染色體的制備_第2頁
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大腸桿菌染色體的制備_第4頁
大腸桿菌染色體的制備_第5頁
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關(guān)于大腸桿菌染色體的制備第1頁，課件共9頁，創(chuàng)作于2023年2月一、實驗?zāi)康?.掌握制備大腸桿菌染色體DNA的方法2.為PCR擴(kuò)增目的基因的實驗準(zhǔn)備好模板

第2頁，課件共9頁，創(chuàng)作于2023年2月二、實驗原理

大腸桿菌染色體DNA的制備首先收集對數(shù)生長期的細(xì)胞，然后用SDS破裂細(xì)胞，破細(xì)胞后，蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶消化、酚：氯仿除去，最后用乙醇沉淀核酸，RNA經(jīng)RNA酶消化除去，最終獲得了染色體DNA。第3頁，課件共9頁，創(chuàng)作于2023年2月三、實驗準(zhǔn)備

1.菌株

大腸桿菌DH5α2.儀器

離心機(jī)

3.器皿

玻璃離心管（10mL）、移液管（10mL、5mL）、微量取樣器、燒杯、玻璃棒、試管、三角瓶

第4頁，課件共9頁，創(chuàng)作于2023年2月

4.試劑

（1）LB完全肉湯培養(yǎng)液：1%胰蛋白胨、0.5%酵母粉、0.1%NaClpH7.4。

（2）SET溶液：20%蔗糖、50mmol/LTris—HCl（pH7.6）、50mmol/LEDTA。

（3）20%SDS

（4）酚：氯仿（5）乙醇（6）RNase溶液（7）蛋白酶K20mg/ml

第5頁，課件共9頁，創(chuàng)作于2023年2月四、實驗步驟1.細(xì)胞收集已培養(yǎng)好的菌液收集于10mL的離心管中8000rpm離心5min去上清，留沉淀菌體

第6頁，課件共9頁，創(chuàng)作于2023年2月2.細(xì)胞裂解

沉淀菌體加入溶菌酶液（8mg溶菌酶/1mLSET）加1mL20%SDS，使細(xì)胞裂解

50μL20mg/mL蛋白酶，混勻5000rpm離心10min，棄沉淀

第7頁，課件共9頁，創(chuàng)作于2023年2月3.DNA分離取上清加等體積的酚：氯仿，混勻3500rpm離心10min

取上清加入2倍體積的乙醇沉淀核酸3500rpm離心10min棄上清加RNase溶液

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