聚丙烯酰胺凝膠電泳“十校聯(lián)賽”一等獎(jiǎng)

藥物分離與純化技術(shù)課程電泳技術(shù)--聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)大綱1.聚丙烯酰胺凝膠電泳概念2.聚丙烯酰胺凝膠電泳特點(diǎn)3.聚丙烯酰胺凝膠電泳分類聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)聚丙烯酰胺凝膠電泳PAGE是以丙稀酰胺為單體、亞甲基雙丙稀酰胺為交聯(lián)劑，通過自由基誘導(dǎo)聚合所形成的，具有一定網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠為載體的電泳。（一）聚丙烯酰胺凝膠電泳概念聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)

電泳過程中，樣品分子的遷移速率，除受自身電荷大小影響外，還與樣品分子的大小和形狀密切相關(guān)（即凝膠載體的分子篩效應(yīng)），具有很高的分辨率。

PAGE可用于蛋白、酶、核酸等生物分子的分離、定性、定量及少量制備，還可用于測(cè)定分子量和等電點(diǎn)。（一）聚丙烯酰胺凝膠電泳概念聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)（1）一定濃度范圍內(nèi)凝膠透明（易于電泳過程觀察監(jiān)測(cè)），且在270nm無(wú)吸收（便于蛋白及核酸電泳后的掃描檢測(cè)），有彈性，機(jī)械性能好；（2）化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不與被分離物質(zhì)起化學(xué)反應(yīng)，并在很多溶劑中不溶；（二）聚丙烯酰胺凝膠電泳特點(diǎn)聚丙烯酰胺凝膠電泳裝置及分離原理聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)（3）對(duì)pH和溫度變化穩(wěn)定，操作條件一致時(shí)，樣品分離重復(fù)性好；（4）對(duì)樣品吸附作用小，且聚合物不帶電荷，電滲作用?。唬ǘ┚郾０纺z電泳特點(diǎn)聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離血清蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)（5）凝膠孔徑大小可調(diào)控，具有可控分子篩效應(yīng)；（6）分辨率高（不連續(xù)PAGE集濃縮、分子篩和電荷效應(yīng)一體）。（二）聚丙烯酰胺凝膠電泳特點(diǎn)聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)根據(jù)是否存在濃縮效應(yīng)可分為連續(xù)PAGE和不連續(xù)PAGE。（1）連續(xù)PAGE

電泳體系中緩沖溶液pH值及凝膠濃度相同，帶電分子在電場(chǎng)的作用下主要依靠電荷和分子篩效應(yīng)實(shí)現(xiàn)分離。（三）聚丙烯酰胺凝膠電泳分類聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)（2）不連續(xù)PAGE

電泳體系中由于緩沖溶液離子成分、pH、凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性，帶電分子在電場(chǎng)中涌動(dòng)不僅有電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)，還有濃縮效應(yīng)，因此分離條帶的清楚度和分辨率均有所提高。（三）聚丙烯酰胺凝膠電泳分類垂直板電泳裝置聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)不連續(xù)PAGE系統(tǒng)的組成：①電極緩沖液：pH8.3的Tris-甘氨酸緩沖液；②樣品膠：無(wú)需專門制備，只需在樣品液中加入等體積40%的蔗糖溶液即可；（三）聚丙烯酰胺凝膠電泳分類聚丙烯酰胺電泳分離聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術(shù)不連續(xù)PAGE系統(tǒng)的組成：③濃縮膠：pH6.7Tris-HCl介質(zhì)，T=2-3%的大孔膠，無(wú)篩分效果；④分離膠：pH8.9Tris-HCl介質(zhì)，T=7.5