電泳的分離方法

藥物分離與純化技術(shù)課程電泳技術(shù)--電泳的分離方法電泳的分離方法—電泳技術(shù)大綱紙電泳2.凝膠電泳3.醋酸纖維素薄膜電泳4.等電聚焦電泳5.等速電泳6.雙向凝膠電泳7.免疫電泳電泳的分離方法—電泳技術(shù)

指用濾紙作為支持載體的電泳方法。

是最早使用的區(qū)帶電泳。紙電泳操作：將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V～1000V）進(jìn)行電泳。1.紙電泳平臥式電泳槽紙電泳電泳的分離方法—電泳技術(shù)2.凝膠電泳

由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式，被稱(chēng)為凝膠電泳。普通的凝膠電泳在板上進(jìn)行，以凝膠作為介質(zhì)。電泳的分離方法—電泳技術(shù)2.凝膠電泳

電泳中常用的凝膠:

葡聚糖、交聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖。它具有機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、透明、化學(xué)穩(wěn)定性高、無(wú)電滲作用、設(shè)備簡(jiǎn)單、樣品量小(1～100μg）、分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。瓊脂糖凝膠電泳電泳的分離方法—電泳技術(shù)3.醋酸纖維素薄膜電泳

電泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。

此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少。特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。電泳的分離方法—電泳技術(shù)4.等電聚焦電泳

是一種利用有pH值梯度的介質(zhì)，分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。適用于中、大分子量如蛋白質(zhì)、肽類(lèi)、同工酶等生物組分的分離分析。電泳的分離方法—電泳技術(shù)5.等速電泳采用兩種不同濃度的電解質(zhì)組成，一種為前導(dǎo)電解質(zhì)，充滿整個(gè)毛細(xì)管柱；另一種為尾隨電解質(zhì)，置于一端的電泳槽中。

前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分，后者則低于任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間，在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下，各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動(dòng)，實(shí)現(xiàn)分離。電泳的分離方法—電泳技術(shù)6.雙向凝膠電泳（二維電泳）第一向采用等電聚焦，根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的PI的不同，將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。

第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳，按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離。其結(jié)果呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀。雙向電泳電泳的分離方法—電泳技術(shù)7.免疫電泳：瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種方法的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開(kāi)，然后加入抗體，做雙相免疫擴(kuò)散，把已分離的各抗原成分與抗體，