DB5404T 0004-2023林芝靈芝標(biāo)準(zhǔn)綜合體 第2部分：菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20B055404市地林芝方市地林芝DBT023林芝市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB5404/T0004—2023 性引用文件 1 設(shè)施要求 1 培養(yǎng)基參考配方 2 7.2二級(jí)種和三級(jí)種 2 8.4冷卻、消毒、接種 3 8.7菌絲生長(zhǎng)速度 48.8菌種成熟標(biāo)準(zhǔn) 4 DB5404/T0004—2023前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是《林芝靈芝標(biāo)準(zhǔn)綜合體》的第2部分，《林芝靈芝標(biāo)準(zhǔn)綜合體》已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第1部分：菌種基本要求；——第2部分：菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程；——第3部分：菌袋制作規(guī)程；——第4部分：栽培技術(shù)規(guī)程；——第5部分：采收存儲(chǔ)技術(shù)規(guī)范；——第6部分：分級(jí)規(guī)范。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由林芝禹翔企業(yè)服務(wù)中心提出。本文件由林芝市市場(chǎng)監(jiān)督管理局歸口。本文件起草單位：西藏自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所、米林縣麗云藥材種植有限公司、林芝禹翔企業(yè)服務(wù)中心。本文件主要起草人：何天文、洛桑卓瑪、羅笑娟、龍莎莎、辛雙陽(yáng)、次仁卓嘎、邵強(qiáng)、次仁羅布、段金華、趙明。1DB5404/T0004—2023林芝靈芝標(biāo)準(zhǔn)綜合體第2部分：菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了林芝靈芝菌種生產(chǎn)的術(shù)語(yǔ)與定義、菌種來(lái)源、場(chǎng)地、設(shè)施要求、原材料要求、培養(yǎng)基參考配方、菌種制作、入庫(kù)等。本文件適用于林芝市靈芝菌種的培育。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T4456包裝用聚乙烯吹塑薄膜GB4789.28食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB/T12728食用菌術(shù)語(yǔ)GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求NY5099無(wú)公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求3術(shù)語(yǔ)和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。4菌種來(lái)源林芝靈芝以國(guó)家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品林芝靈芝產(chǎn)地范圍內(nèi)的林芝市巴宜區(qū)、米林縣、工布江達(dá)縣、波密縣、察隅縣、朗縣、墨脫縣共7個(gè)縣(區(qū))現(xiàn)轄行政區(qū)域?yàn)橹行模杉囊吧兹忪`芝(Ganodermaleucocontextum)馴化培育的菌種。5場(chǎng)地、設(shè)施要求應(yīng)符合NY/T528的要求。6原材料要求6.1原料6.1.1栽培袋符合GB/T4456的要求。6.1.2培養(yǎng)基原料應(yīng)符合NY5099的要求。2DB5404/T0004—20236.1.3栽培基配制用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。6.1.4一級(jí)種需經(jīng)出菇試驗(yàn)確認(rèn)農(nóng)藝性狀和商品性狀等種性合格。6.2容器6.2.1一級(jí)種使用18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃試管或培養(yǎng)皿。6.2.2二級(jí)種、三級(jí)種使用750mL或以下，耐121℃-126℃及以上高溫高壓的無(wú)色或近無(wú)色的、瓶口直徑≤4cm的玻璃瓶或近透明的耐高溫塑料瓶，或(13cm~17cm)×(26cm~33cm)耐121℃-126℃高溫高壓的聚丙烯塑料袋，各類容器都應(yīng)使用能滿足濾菌和透氣要求的無(wú)紡布塑料蓋。6.3培養(yǎng)原料6.3.1化學(xué)試劑類要使用化學(xué)純或以上級(jí)別的試劑。6.3.2生物制劑和天然材料類材料要新鮮，無(wú)蟲(chóng)、無(wú)螨、無(wú)霉、潔凈、干燥。7培養(yǎng)基參考配方7.1一級(jí)種以1000mL計(jì)：a)木屑PDA培養(yǎng)基馬鈴薯(去皮、切塊或片)200g，雜木屑20g，葡萄糖20g，瓊脂20g，b)PDA培養(yǎng)基馬鈴薯(去皮、切塊或片)200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL，pH自然。c)綜合PDA(CPDA)培養(yǎng)基馬鈴薯(去皮、切塊或片)200g，葡萄糖20g，蛋白胨2g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，瓊脂20g，維生素B110mg，水1000mL，pH自然。7.2二級(jí)種和三級(jí)種以100g干料計(jì)：a)玉米(小麥、高粱)98g，輕質(zhì)碳酸鈣1g，硫酸鈣1g。高粱(或玉米、小麥)浸泡12h-24h時(shí)，煮熟至掰開(kāi)無(wú)白心，瀝去多余水分，晾干表面水分，混合輕質(zhì)碳酸鈣和硫酸鈣拌勻，pH自然。b)雜木屑77g，麩皮17g，玉米粉3g，輕質(zhì)碳酸鈣2g，硫酸鈣1g，加水至培養(yǎng)料含水量60%，pH自然。c)玉米芯顆粒77g，麩皮17g，玉米粉3g，輕質(zhì)碳酸鈣2g，硫酸鈣1g，加水至培養(yǎng)料含水8菌種制做工藝流程備料→拌料→裝袋→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)。8.1拌料將培養(yǎng)基按本規(guī)范第7章的配方比例稱取，拌勻，并掌握好PH值。代料以用手緊握培養(yǎng)料成團(tuán)，松開(kāi)后龜裂，手掌有微量水跡為準(zhǔn)(含水量60%~65%)。3DB5404/T0004—20238.2裝袋用長(zhǎng)33cm、寬17cm、厚0.05mm塑料菌袋。采用機(jī)械或手工裝袋。壓實(shí)填至袋口約4/5處，用菌種套環(huán)封袋口。8.3滅菌8.3.1常壓滅菌滅菌鍋加溫達(dá)到100℃(海拔3000m左右的地方，壓力達(dá)到0.04MPa時(shí))保持12h~16h，?；?h后將料袋出鍋。8.3.2高壓滅菌排氣2次,待冷氣排凈,壓力達(dá)到0.105MPa~0.15MPa，溫度121℃~126℃時(shí)保持15min~30min或20min，自然冷卻至壓力表到“0”時(shí)打開(kāi)放氣閥，打開(kāi)爐門，待冷卻至可以搬動(dòng)時(shí)，將培養(yǎng)基袋取8.4冷卻、消毒、接種8.4.1冷卻料袋放置在接種室內(nèi)，自然冷卻至常溫。8.4.2消毒接種場(chǎng)所準(zhǔn)備好后，選用2%~3%來(lái)蘇兒水溶液噴霧消毒，或選用國(guó)家衛(wèi)生部和農(nóng)業(yè)部規(guī)定的無(wú)公害藥劑進(jìn)行熏蒸消毒。8.4.3接種菌種符合NY/T528的要求,種菌齡30d~35d。17cm×33cm規(guī)格的菌種，每袋接20個(gè)~30個(gè)料袋。8.5發(fā)菌8.5.1菌袋擺放菌室前，用3%來(lái)蘇爾水溶液對(duì)發(fā)菌室內(nèi)空間噴霧消毒，然后將菌袋擺放在培養(yǎng)架上，或墻式疊堆在地面上，擺放方式和擺放密度依發(fā)菌室溫度確定。8.5.2環(huán)境控制發(fā)菌溫度控制在20℃~25℃，空氣相對(duì)濕度保持50%~60%；菌絲封面后開(kāi)始通風(fēng)；發(fā)菌室需遮光，即“暗光培養(yǎng)，宜黑勿亮”。8.5.3發(fā)菌管理發(fā)菌15d左右進(jìn)行一次全面檢查，發(fā)現(xiàn)污染的及時(shí)清理，同時(shí)將菌袋上下、內(nèi)外位置調(diào)換；菌袋間溫度低于20℃，通過(guò)加溫提高發(fā)菌室溫度，促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)。當(dāng)袋內(nèi)菌絲長(zhǎng)至菌袋五分之四后，發(fā)菌室內(nèi)再次噴灑3%來(lái)蘇爾消毒。8.6后熟培養(yǎng)菌絲長(zhǎng)滿菌袋后，要后熟10d~30d。溫度(18±2)℃，空氣相對(duì)濕度40%~60%。4DB5404/T0004—20238.7菌絲生長(zhǎng)速度8.7.1一級(jí)種在PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)培養(yǎng)基上，在避光、適溫(25±1)℃條件下，菌絲長(zhǎng)速為(8.2±1.1)mm/d，菌絲長(zhǎng)滿斜面的時(shí)間為8d~10d。8.7.2二級(jí)種在適宜培養(yǎng)基上、適宜培養(yǎng)容器里(以使用15cm×28cm聚丙烯塑料菌種袋、裝量300g干料每袋為例)，在避光、適溫(25±1)℃條件下，菌絲長(zhǎng)速為(8.0±0.8)mm/d，菌絲長(zhǎng)滿容器的時(shí)間為23d~30d。8.7.3三級(jí)種在適宜培養(yǎng)基上、適宜培養(yǎng)容器里(以使用17cm×33cm