不同園藝植物花粉離體培養(yǎng)生活力的測定分析

不同園藝植物花粉離體培養(yǎng)生活力的測定分析第一頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第1頁，共37頁。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握園藝植物的花粉收集、并掌握利用不同方法進(jìn)行花粉生活力的測定。2.觀察花粉在離體條件下的萌發(fā)情況，認(rèn)識(shí)花粉萌發(fā)形成花粉管的外形和伸長過程以及萌發(fā)的長度,為理解園藝植物的生殖過程及雜交育種奠定基礎(chǔ)。第二頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第2頁，共37頁。二、實(shí)驗(yàn)原理

正常的成熟花粉粒具有較強(qiáng)的活力，在適宜的培養(yǎng)條件下便能萌發(fā)和生長，在顯微鏡下可直接觀察計(jì)算其萌發(fā)率，以確定其活力。第三頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第3頁，共37頁?；ǚ圪A藏的原理在于創(chuàng)造一定的條件，使花粉降低代謝強(qiáng)度，延長花粉的壽命。花粉壽命的長短，因植物種類不同而異。在自然條件下，大多數(shù)植物的花粉從花藥散出后只能存活幾小時(shí)，幾天或幾個(gè)星期。第四頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第4頁，共37頁?；ǚ蹓勖拈L短除了上述因種遺傳性的差異以外，還與溫度、濕度有密切的關(guān)系。通常高溫高濕下花粉呼吸旺盛，會(huì)很快失去生命力，但在極干燥的條件下，花粉失去水分，也不利于保存。第五頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第5頁，共37頁。亞達(dá)姆斯試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蘋果花粉在干燥狀態(tài)下，可保存3個(gè)月；如放在2～8℃，濕度80％的條件下，經(jīng)過5個(gè)星期即失去生活力。維霍夫試驗(yàn)中，丁香的花粉貯藏在干燥器中，15d以后發(fā)芽率降到50％；至20d時(shí)，僅有個(gè)別花粉發(fā)芽；到30d時(shí)，即全部死亡。第六頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第6頁，共37頁。因此，暫時(shí)不用的花粉，應(yīng)立即在適宜的條件下貯藏，妥善保存。為保持花粉生活力則人為采取減低其代謝強(qiáng)度，保持其純潔性，將其貯存于低溫、干燥、黑暗，并較為穩(wěn)定的環(huán)境條件下，以保持其活力。第七頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第7頁，共37頁。三、實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器和試劑

1.材料：不同園藝植物，任選3種

2.主要儀器：鑷子、顯微鏡、恒溫箱、培養(yǎng)皿、燒杯、玻璃棒、量缸、電磁爐、標(biāo)簽、記號(hào)筆、離心管、冰箱、牙簽、分析天平。

3.主要試劑：瓊脂、蔗糖、硼酸、無水CaCl2

。

第八頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第8頁，共37頁。（一）形態(tài)檢測法

⑴把具有品種典型性的花粉粒作為具有生活力的花粉；⑵把小的、皺縮的、畸形的以及沒有內(nèi)含物的作為沒有生活力或具有較弱生活力的花粉?；ǚ壑糜谳d玻片上，滴上水，蓋上蓋玻片觀察，然后自制表格進(jìn)行記載。

四、實(shí)驗(yàn)方法分別介紹第九頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第9頁，共37頁。

（1）采集花朵選擇正常的無病蟲害的園藝植株上含苞待放正常的花朵，采集后帶回實(shí)驗(yàn)室剔除過大及過小的以及一些葉子和雜質(zhì)。（二）花粉萌發(fā)檢測法第十頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第10頁，共37頁。

（2）收集花藥及散粉

用鑷子取出花藥（每個(gè)園藝植物取20個(gè)花蕾的花藥）置于培養(yǎng)皿（紙盒-花粉量多）中，寫上標(biāo)簽，進(jìn)行必要的加溫處理（培養(yǎng)箱溫度25℃使其散粉。第十一頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第11頁，共37頁。

（3）花粉的儲(chǔ)藏

散粉然后將花粉收集于2ml的離心管（花粉瓶）中，用封口膜密封蓋子，寫上標(biāo)簽置于冰箱（-20℃）內(nèi)儲(chǔ)藏備用。（或者不同溫度25℃，5℃、0℃、-20℃、-40℃和-86℃下貯藏）。注意采集花藥開裂前后的新鮮花粉，對不成熟的幼嫩花藥的花粉，成熟過頭的花粉被雨露粘濕的花粉，有疑問的花粉雜質(zhì)要除去。第十二頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第12頁，共37頁。

（4）培養(yǎng)基的配制

第十三頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第13頁，共37頁。培養(yǎng)基的配制：瓊脂量：7g/L，蔗糖：15g/100mL（15%），調(diào)pH6.0，分裝到培養(yǎng)皿中，凝固后即為花粉離體培養(yǎng)的發(fā)芽床。第十四頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第14頁，共37頁?；ǚ叟囵B(yǎng)為固體培養(yǎng)，瓊脂需要的量是5g/L-7g/L，在瓊脂中分別添加蔗糖、硼酸、氯化鈣為參照因素，按照（三因素三水平）進(jìn)行正交設(shè)計(jì)。按照設(shè)計(jì)進(jìn)行配置培養(yǎng)基。第十五頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第15頁，共37頁。因素水平11005010021501001503200150200表1因素水平表第十六頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第16頁，共37頁。試驗(yàn)處理列號(hào)1（A）2（B）3(C)111121223133421252236231731383219332表2花粉培養(yǎng)正交試驗(yàn)正交表第十七頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第17頁，共37頁。

（5）撒播花粉

取出花粉，用牙簽沾取已經(jīng)散好的花粉輕輕均勻抖在培養(yǎng)基上，抖上之后先在顯微鏡下觀察，要求每個(gè)視野內(nèi)30～50個(gè)，避免成團(tuán)影響觀察效果。

按要求撒好后用記號(hào)筆在標(biāo)簽上做標(biāo)記（時(shí)間、品種、組別）放在25℃培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，觀察花粉管的萌發(fā)伸長。第十八頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第18頁，共37頁。（6）觀察

培養(yǎng)1h，2h，3h，5h后進(jìn)行顯微鏡觀察,觀察萌發(fā)的個(gè)數(shù)，每個(gè)培養(yǎng)皿觀察3個(gè)重復(fù)，算出平均數(shù)，然后計(jì)算不同園藝植物不同貯藏條件下離體培養(yǎng)的花粉萌發(fā)率。萌發(fā)率（%）=（已萌發(fā)的花粉粒數(shù)目/花粉?？倲?shù)）*100%第十九頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第19頁，共37頁。

（7）結(jié)果統(tǒng)計(jì)

表1材料1的花粉萌發(fā)率

貯藏溫度總數(shù)1總數(shù)2總數(shù)3總數(shù)平均數(shù)萌發(fā)1萌發(fā)2萌發(fā)3萌發(fā)平均數(shù)萌發(fā)率常溫-20℃第二十頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第20頁，共37頁。

（8）照片描述

桃的花粉萌發(fā)率的觀察第二十一頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第21頁，共37頁。桃的花粉萌發(fā)情況的觀察第二十二頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第22頁，共37頁。桃的花粉萌發(fā)情況的觀察第二十三頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第23頁，共37頁。杏梅的花粉萌發(fā)情況的觀察第二十四頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第24頁，共37頁。1.碘-

碘化鉀染色測定法

【原理】多數(shù)植物正常的成熟花粉粒呈球形，積累較多的淀粉，I2-KI溶液可將其

染成藍(lán)色。發(fā)育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或積累淀粉較少，I2-KI溶液染色呈黃褐色。因此，可用I2-KI溶液染色來測定花粉活力。

（三）染色檢測法第二十五頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第25頁，共37頁?！酒鞑呐c用具】

顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鑷子；棕色試劑瓶；燒杯；量筒；天平。

【試劑】

I2-KI溶液第二十六頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第26頁，共37頁?！静襟E】

采集成熟花藥，取一花藥于載玻片上，加一滴蒸餾水，用鑷子將花藥搗碎，使花粉粒釋放，再加1～2滴I2-KI溶液，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。凡是被染成藍(lán)色的為含有淀粉的活力較強(qiáng)的花粉粒，呈黃褐色的為發(fā)育不良的花粉粒。觀察2～3張片子，每片取5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。第二十七頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第27頁，共37頁。2.氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】

具有活力的花粉呼吸作用較強(qiáng)，其產(chǎn)生的NADH2或NADPH2可將無色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）還原成紅色的TTF（三苯基甲）而使其本身著色，無活力的花粉呼吸作用較弱，TTC的顏色變化不明顯，故可根據(jù)花粉吸收TTC后的顏色變化判斷花粉的生活力。

第二十八頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第28頁，共37頁。【器材與用具】

顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鑷子；恒溫箱；棕色試劑瓶；燒杯；量筒；天平。

【試劑】

0.5%TTC溶液：稱取0.5g

TTC放入燒杯中，加入少許95%酒精使其溶解，然后用蒸餾水稀釋至100ml。溶液避光保存，若發(fā)紅時(shí)，則不能再用。

第二十九頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第29頁，共37頁?！痉椒ā?/p>

采集植物的花粉，取少許放在干潔的載玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，攪勻后蓋上蓋玻片，置35℃恒溫箱中，10~15min后鏡檢，凡被染為紅色的花

粉活力強(qiáng)，淡紅次之，無色者為沒有活力或不育花粉。觀察2~3張片子，每片取5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。第三十頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第30頁，共37頁。3.醋酸洋紅法【原理】正?；ǚ鄢蕡A球形,物質(zhì)積累較多,對醋酸洋紅的吸附作用與親和力強(qiáng),通常易被染成深紅色,發(fā)育不良的花粉常呈畸形,不積累物質(zhì)或積累很少,用醋酸洋紅染色呈淡紅色或無色。第三十一頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第31頁，共37頁?！酒鞑呐c用具】顯微鏡、載玻片、鑷子、滴瓶?！驹噭?%醋酸洋紅:將洋紅粉末1g倒入100mL45%醋酸溶液中,邊煮邊攪拌,煮沸(沸騰時(shí)間不超過30s),冷卻后過濾,即可使用。也可再加入1%～2%鐵明礬水溶液5-10滴,至此液變?yōu)榘导t色而不發(fā)生沉淀為止。

第三十二頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第32頁，共37頁?！痉椒ā?1)取少許花粉于載玻片上,加1～2滴醋酸洋紅溶液,蓋上蓋玻片;(2)將制片放在顯微鏡(16×10)下觀察3～5片,每片選擇3～5個(gè)視野,以統(tǒng)計(jì)花粉的活力百分率。第三十三頁，編輯于星期六：十點(diǎn)十五分。第33頁，共37頁。