放射醫(yī)學(xué)所中國(guó)煙草科教網(wǎng)

朱茂祥軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所2004.06中式卷煙的生物醫(yī)學(xué)評(píng)價(jià)技術(shù)報(bào)告內(nèi)容發(fā)展中式卷煙的意義

——從吸煙與健康談起中式卷煙的生物醫(yī)學(xué)評(píng)價(jià)技術(shù)

——技術(shù)原理與方法代表性中式卷煙的安全性評(píng)價(jià)舉例

——煙絲添加神農(nóng)液降低卷煙危害——使用SRM生物濾嘴降低卷煙危害

吸煙與健康

——事實(shí)與問(wèn)題全世界1/3的成年男性吸煙，香煙銷(xiāo)售量約1.51010支/d（約1.0107支/min）未成年人中有近1/5的吸煙者，而且每天還以8~10萬(wàn)人的速度增加（近一半在亞洲）發(fā)達(dá)國(guó)家吸煙人數(shù)呈下降趨勢(shì)，但女性吸煙者增多。目前美國(guó)吸煙的女性約2200萬(wàn)人，韓國(guó)女性吸煙比例從1989年的3.9%上升到1998年的6.7%，增加了近2倍；在日本，最近十年中女性吸煙者的比例也達(dá)到近10%在中國(guó)，香煙消費(fèi)量占全世界1/3，每年消耗的香煙數(shù)約1.71012支（每分鐘3.0106支），吸煙人數(shù)3.2億，比整個(gè)美國(guó)人口還多，成年人中，約67%的男性和4%的女性吸煙，未成年人中，約1/3的男性和8%的女性吸煙

——WHO：2004年公布的統(tǒng)計(jì)數(shù)字事實(shí)1965~1998年間美國(guó)大于18歲公民中吸煙者的比例（按性別）（CDC，MMWR,2000，Vol49,No.39）

事實(shí)1964USSurgeonGeneral報(bào)告吸煙對(duì)健康的不良影響196541%的美國(guó)成年人吸煙1967煙盒上標(biāo)示“吸煙有害健康”1970電視上禁止煙草廣告2000美國(guó)只有25%的成年人吸煙1900~1998年間美國(guó)成年人年均吸煙量煙草中含有大量碳水化合物（占40%~50%），羧酸，色素，萜烯類(lèi)，鏈烷烴，類(lèi)脂物質(zhì)，以及一些生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物（如硝酸鹽等）和某些污染物（如農(nóng)藥、重金屬等）吸煙是不完全燃燒過(guò)程，煙草經(jīng)一系列熱分解與熱合成反應(yīng)，產(chǎn)生大量化學(xué)物質(zhì)。據(jù)分析，煙氣中化學(xué)成分共5068種，除煙草中存在的1172種外，3896種是吸煙過(guò)程中產(chǎn)生的新的化學(xué)物質(zhì)——Roberts，1988TobaccoReporter事實(shí)卷煙煙氣的粒相物（如脂肪烴、芳香烴、萜類(lèi)、羰基化合物、酚類(lèi)、有機(jī)酸、氮雜環(huán)、亞硝胺、金屬）和氣相物（如氮、氧、CO2、CO、氫、揮發(fā)性烴類(lèi)、酯類(lèi)、呋喃類(lèi)、腈類(lèi)）中包含多種有害成分，如氣相中的CO、氮氧化物、丙烯醛、揮發(fā)性芳香烴、氫氰酸，粒相中的稠環(huán)芳烴、酚類(lèi)、煙堿、亞硝胺、雜環(huán)化合物及微量放射性元素，以及氣相與粒相中都存在的自由基等Hoffmannlist：卷煙煙氣存在44種有害成分69種致癌物中（包括一些促癌劑或輔致癌物）NNK最受關(guān)注——HoffmannD：ChemResToxicol2001;14(7):767-9040年吸煙（40支/天）的累積NNK量可致癌——HoffmannD：PrevMed1997;26(4):427-34事實(shí)幾乎所有的機(jī)體組織、器官或系統(tǒng)均可受到吸煙的影響，其中，最敏感的部位是呼吸系統(tǒng)（肺、氣管、咽喉）、循環(huán)系統(tǒng)（心臟、血管），神經(jīng)系統(tǒng)（腦），免疫和抗氧系統(tǒng)也是近年來(lái)研究較多的問(wèn)題。孕婦、未成年人（特別是嬰育兒）對(duì)吸煙的敏感性尤為值得關(guān)注吸煙可造成40種致命疾病，包括口腔癌、食道癌、喉癌、肺癌、胰腺癌、膽囊癌、子宮內(nèi)膜癌及其他非常罕見(jiàn)的疾病等。長(zhǎng)期吸煙者肺癌發(fā)病率比不吸煙者高10~20倍，喉癌發(fā)病率高6~10倍，冠心病發(fā)病率高2~3倍。循環(huán)系統(tǒng)發(fā)病率高3倍，氣管炎發(fā)病率高2~8倍英國(guó)牛津拉德克里夫醫(yī)院ICRF癌癥研究中心醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)與流行病學(xué)教授RichardPeto世界衛(wèi)生組織煙草與衛(wèi)生規(guī)劃署研究員AlanD.Lopez《1950~2000年期間發(fā)達(dá)國(guó)家的吸煙死亡率》事實(shí)全世界每年死于與吸煙有關(guān)的疾病人數(shù)達(dá)400萬(wàn)，相當(dāng)于每8秒就有1人死亡。預(yù)計(jì)這一數(shù)字在2020年會(huì)上升到1000萬(wàn)在中國(guó)，平均每天約有3000人死于吸煙——世界衛(wèi)生組織煙草與衛(wèi)生規(guī)劃署《煙草與衛(wèi)生：全球狀況報(bào)告》在美國(guó)，因吸煙引起的死亡，包括母親吸煙所致嬰兒早熟及被動(dòng)吸煙等間接的影響在內(nèi)，每年估計(jì)超過(guò)400000人，約為全部死亡數(shù)的1/5，由此花費(fèi)的醫(yī)療和保健費(fèi)用約1500億美元

美國(guó)每年死于與吸煙有關(guān)的疾病人數(shù)（430,000人）(引自：CDC,MMWR1999;48;131-38)

(1990~1994年間年平均值)事實(shí)1994年美國(guó)與吸煙有關(guān)的疾病死亡情況（引自：CDC，MMWR1997,Vol.48,No.43;993-996）疾病男性女性合并癌癥

肺癌81,17935,741116,920食道癌1,0551,9453,000其他癌癥21,6599,74331,402合計(jì)103,89347,429151,322心血管疾病

高血壓3,2332,1515,450心臟病88,64445,591134,235中風(fēng)14,9788,30323,281其他心血管疾病11,6825,17216,854合計(jì)118,60361,117

179,820呼吸器官疾病

肺炎11,292

7,881

19,173支氣管炎/肺氣腫9,2345,541

14,865慢性阻塞性肺障礙30,38518,579

48,982其他呼吸疾病

787

6681,455合計(jì)

51,788

32,689

84,475嬰兒患病數(shù)1,006705

1,711火災(zāi)死亡人數(shù)

863499

1,362總數(shù)

276,153142,537418,6901995年英國(guó)因吸煙的疾病死亡人數(shù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)(引自：HealthEducationAuthority,1998)在英國(guó)，估計(jì)每年有28.4萬(wàn)人因吸煙引起的疾病住院治療，其中死亡人數(shù)約12萬(wàn)人。據(jù)估計(jì)，1950~2000年間，英國(guó)有600萬(wàn)人死于與吸煙有關(guān)的疾病，平均每年死于吸煙的人數(shù)是二戰(zhàn)前的12倍。1995年，英國(guó)死于吸煙的人數(shù)為12.31萬(wàn)人，是交通事故(3444人)、吸毒(2663)、犯罪謀殺(503)、自殺(4379)、愛(ài)滋病(195)以及其他意外死亡(8986)的總和（20170）的6倍疾病

死亡百分比死亡人數(shù)男性女性男性女性合并癌癥

肺癌907321,1009,50030,600咽喉癌74471,5004001,900食管癌71622,9001,6004,500膀胱癌48171,7003002,000腎癌415700100800胃癌35101,7003002,000胰癌21256008001,500其他癌癥3472,4005003,000白血病1910200100300合計(jì)

46,600心血管疾病

心臟病231118,7007,60026,400主動(dòng)脈瘤62484,0001,8005,800心肌退化2410300300600動(dòng)脈硬化癥175100100200中風(fēng)1393,4003,9007,300合計(jì)

40,300其他疾病

支氣管炎和肺氣腫867915,1009,30024,400肺炎25115,8004,1009,900胃和十二指腸潰瘍4741100010001,900總計(jì)

81,30041,700123,100吸煙避免死亡

巴金森氏癥

9003001,200子宮肌瘤

100100合計(jì)

9004001,300總數(shù)

80,40041,300121,800問(wèn)題如果不進(jìn)行劑量分析和評(píng)價(jià)，單憑卷煙煙氣中存在的有害成分，就認(rèn)定其對(duì)健康有不良影響，是不科學(xué)的“所有的物質(zhì)本身并非毒物，劑量才使一種物質(zhì)變成毒物”“毒物和藥物之間的區(qū)別在于正確的劑量”——16世紀(jì)著名醫(yī)學(xué)家Paracelsus與城市空氣污染比較，人類(lèi)接觸有害環(huán)境因素中，來(lái)自于卷煙煙氣，相對(duì)來(lái)說(shuō)是較少的目前，“吸煙有害健康”的“證據(jù)”主要來(lái)自于流行病學(xué)調(diào)查和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果，存在商榷之處吸煙者的“誤區(qū)”停止吸煙會(huì)導(dǎo)致體重增加沒(méi)有直接證據(jù)表明吸煙能導(dǎo)致癌癥肺癌是多因素疾病絕大多數(shù)人都吸煙吸煙的危害遠(yuǎn)沒(méi)有政府宣傳和倡導(dǎo)的那么嚴(yán)重許多重度吸煙者并沒(méi)有得病，且壽命很長(zhǎng)目前市場(chǎng)是的煙焦油量都較低，每天吸煙少于20支應(yīng)該說(shuō)是安全的環(huán)境煙草煙氣對(duì)不吸煙者并沒(méi)有嚴(yán)重的影響問(wèn)題中式卷煙的生物醫(yī)學(xué)評(píng)價(jià)技術(shù)——技術(shù)原理與方法篩選對(duì)煙氣敏感的細(xì)胞系：用于實(shí)驗(yàn)研究的細(xì)胞系有數(shù)百種，其中人支氣管上皮細(xì)胞(BEAS-2B)富含P450酶，在無(wú)需代謝活化因子S9時(shí)能轉(zhuǎn)化利用NNK等煙氣中主要有害物質(zhì)研制中的細(xì)胞氣體中毒裝置：細(xì)胞在培養(yǎng)液中染毒，與人類(lèi)吸煙實(shí)際情況有差別，研制細(xì)胞氣體中毒裝置對(duì)煙氣評(píng)價(jià)意義重大卷煙煙氣毒理學(xué)評(píng)價(jià)動(dòng)物吸煙中毒實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒ⅲ簞?dòng)物在恒氧、恒壓、恒濕、恒溫和煙氣均勻條件下自由吸入卷煙煙氣動(dòng)物吸煙試驗(yàn)煙氣細(xì)胞中毒試驗(yàn)急性毒性評(píng)價(jià)方案急性毒性慢性毒性蓄積毒性生殖毒性免疫毒性增殖死亡氧化損傷膜損傷致突致畸致癌基因毒性煙草煙氣中有數(shù)千種物質(zhì)，單一或數(shù)種有害成分的分析難以全面真實(shí)客觀地反映吸煙的健康影響。卷煙煙氣毒理學(xué)評(píng)價(jià)是以吸煙產(chǎn)生的煙氣做為整體，通過(guò)動(dòng)物和細(xì)胞中毒試驗(yàn)，用毒理學(xué)的方法，對(duì)卷煙煙氣的健康影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過(guò)與同品質(zhì)對(duì)照煙比較，檢驗(yàn)降焦減害技術(shù)應(yīng)用于卷煙中提高卷煙安全性的效果。

其他功能檢測(cè)第一級(jí)，動(dòng)物要求2種，雌雄各半，細(xì)胞至少2種，代表人和動(dòng)物來(lái)源的支氣管和成纖維細(xì)胞各1種。最好是2種染毒途徑。如果兩種卷煙（一般是試驗(yàn)樣品煙和對(duì)照煙）的急性毒性差異明顯，則無(wú)需進(jìn)行進(jìn)一步的評(píng)價(jià)，否則需進(jìn)行第二級(jí)和第三級(jí)，甚至其他評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)分級(jí)評(píng)價(jià)方案動(dòng)物實(shí)驗(yàn)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)一級(jí)急性毒性試驗(yàn)細(xì)胞存活試驗(yàn)二級(jí)亞慢毒試驗(yàn)細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞膜損傷試驗(yàn)三級(jí)三致（致突、致畸和致癌）試驗(yàn)基因突變和細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)其他實(shí)驗(yàn)免疫和抗氧化功能損傷，呼吸道損傷，心血管系統(tǒng)檢查等基因與蛋白質(zhì)表達(dá)水平檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其吸煙染毒實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠和Wistar大鼠是我國(guó)“新藥審批辦法”推薦使用的動(dòng)物。動(dòng)物到達(dá)后，按SOPA034的要求接收。每籠5只，飼養(yǎng)在二級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，溫度30±1℃，濕度60±5%。由獲得資格認(rèn)可的人員飼養(yǎng)。所有動(dòng)物按SOPA035要求檢疫觀察1-3天，在此時(shí)間內(nèi)觀察動(dòng)物的疾病和死亡指征，出現(xiàn)異常現(xiàn)象需向?qū)ｎ}負(fù)責(zé)人和臨床獸醫(yī)報(bào)告。由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供標(biāo)準(zhǔn)飼料。從動(dòng)物到達(dá)至研究結(jié)束自由攝食。用飲水瓶供應(yīng)消毒自來(lái)水，由動(dòng)物自由飲用。每日沖洗飲水瓶吸煙染毒用吸煙器吸煙，將煙氣導(dǎo)入中毒室（有機(jī)玻璃盒），動(dòng)物在恒氧、恒壓、恒濕、恒溫和煙氣均勻的條件下自由吸入卷煙煙氣，造成動(dòng)物吸煙中毒的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀糜趯?shí)驗(yàn)研究的靶細(xì)胞主要有鼠或人來(lái)源的成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞四大類(lèi)敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞（SHE）優(yōu)點(diǎn)：易獲得，易培養(yǎng)，穩(wěn)定，經(jīng)濟(jì)缺點(diǎn)：敏感性較差，結(jié)果難以外推到人人支氣管上皮細(xì)胞（BEAS-2B）優(yōu)點(diǎn)：敏感性好，與人類(lèi)接近缺點(diǎn)：難培養(yǎng)，費(fèi)用高將吸煙器抽煙的煙氣，分別經(jīng)過(guò)有機(jī)相（乙酸乙酯）和無(wú)機(jī)相（基本培養(yǎng)液）收集。將有機(jī)溶劑揮發(fā)后，與培養(yǎng)液混合，并將煙氣濃度調(diào)整為1支煙/ml，加入細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)細(xì)胞，造成細(xì)胞煙氣中毒的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图?xì)胞系及其暴露卷煙煙氣染毒通常急性毒性是指動(dòng)物1d內(nèi)單次或多次染毒后在7~14d中連續(xù)觀察動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況。考慮到吸煙的實(shí)際情況，在吸煙的急性毒性實(shí)驗(yàn)中，我們采用所有動(dòng)物同時(shí)開(kāi)始吸煙，連續(xù)染毒，直至全部動(dòng)物死亡為止，觀察動(dòng)物吸煙的反應(yīng)，準(zhǔn)確記錄每只動(dòng)物的死亡時(shí)間和吸煙量，計(jì)算平均活存時(shí)間和平均致死吸煙量，提供以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：第一只動(dòng)物和最后一只動(dòng)物死亡的時(shí)間和致死吸煙量（即死亡時(shí)間和劑量的范圍）一半動(dòng)物發(fā)生死亡的時(shí)間和吸煙量（T1/2和LD50）對(duì)照煙動(dòng)物全部死亡時(shí)，實(shí)驗(yàn)煙動(dòng)物的活存率必要時(shí)，需對(duì)急性致死動(dòng)物的進(jìn)行病理觀察動(dòng)物暴露卷煙煙氣的急性毒性試驗(yàn)細(xì)胞存安活試驗(yàn)細(xì)胞在正麥常情況下耕按一定生姜長(zhǎng)速度倍伍增，當(dāng)受憲到有害因村素作用時(shí)籍，細(xì)胞周訴期發(fā)生紊近亂，表現(xiàn)受出直接死思亡或增殖來(lái)性死亡接種效賭率試驗(yàn)細(xì)胞在宜低密度縣接種條開(kāi)件下，殿受損傷味細(xì)胞不憐能存活聾，而正線常細(xì)胞烤在一定臨時(shí)間后皂形成集銷(xiāo)落（克界?。蛲ㄟ^(guò)計(jì)責(zé)數(shù)克隆煤數(shù)，可懼以計(jì)算肉活存細(xì)椒胞百分庭數(shù)MTT甘試驗(yàn)噻唑蘭（暢MTT）前是一種細(xì)漏胞染料，度能被活細(xì)秒胞在生長(zhǎng)零過(guò)程中利執(zhí)用并在細(xì)灣胞內(nèi)沉積萬(wàn)，因此，鉗MTT試芽驗(yàn)可用來(lái)探檢測(cè)細(xì)胞濾增殖死亡綁率，評(píng)價(jià)怎有害物質(zhì)三對(duì)細(xì)胞的昆毒性作用細(xì)胞氧化咐損傷——圍活性氧檢糧測(cè)幾乎所貨有的環(huán)磨境有害率因素均剝能通過(guò)誓直接或夢(mèng)間接作林用，誘師發(fā)細(xì)胞瓜產(chǎn)生包粘括活性獵氧在內(nèi)墻的自由快基，這血一方面膛是由于故外源性雄化合物婦的代謝迎活化，蔬并與其萬(wàn)細(xì)胞或伸基因毒頂性密切禍相關(guān)；菜另一方臨面是細(xì)枝胞應(yīng)激等性啟動(dòng)肌抗氧化允防御機(jī)般制以對(duì)等抗外源擊性有害距因素可聽(tīng)能導(dǎo)致術(shù)的細(xì)胞戚損傷。淚細(xì)胞活被性氧水掀平反應(yīng)避了細(xì)胞返對(duì)外源乓性有害到因素作扮用時(shí)的物毒性應(yīng)哲答，也斜就是外依源性化激合物的律毒性細(xì)胞內(nèi)唇活性氧門(mén)水平嘉細(xì)胞中，分子員探針DCF趕H-D旋A和HE可分別茅與H2O2和O2.—反應(yīng)，鞏生成二裝氯熒光淡黃（DCF衡）和溴乙錠（EB），并產(chǎn)依生綠色和紅色熒光，通畜過(guò)測(cè)定細(xì)強(qiáng)胞內(nèi)DC籃F和/或田EB的熒尸光強(qiáng)度，領(lǐng)即可相對(duì)劫定量細(xì)胞護(hù)內(nèi)H2O2和O2.—水平細(xì)胞外增活性含騾量過(guò)氧化氫公（H2O2）用辣根過(guò)肆氧化物副酶和酚紅捕獲，通醋過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲虛線進(jìn)行定跡量；超氧陰離皺子（O2.—）用細(xì)胞色叨素C捕獲，輪通過(guò)測(cè)爺定吸光懂度改變倍進(jìn)行定世量；羥自由民基（.OH）用番紅花紅捕獲，通艇過(guò)測(cè)定吸勁光度改變核進(jìn)行定量過(guò)氧化氫細(xì)胞膜是細(xì)胞房誠(chéng)與外界客的屏蔽猛，具有信號(hào)轉(zhuǎn)坦導(dǎo)與物質(zhì)交孫換的重要春功能。偷有人提宮出膜損泊傷是疾更病發(fā)生飼甚至癌滲變的標(biāo)巖志。細(xì)葵胞膜損此傷可從黎以下幾治個(gè)方面賠進(jìn)行評(píng)岸價(jià)：膜的通刪透性乳酸脫氫東酶（LDH扁）是胞漿中眾的一種常立見(jiàn)酶，通注常情況下桿不能透過(guò)路細(xì)胞膜外豪逸，因此奇，通過(guò)檢砍測(cè)細(xì)胞外LDH的活性，北可以評(píng)價(jià)膜通透性的改變膜的結(jié)器構(gòu)與功紫能腺苷三幅磷酸酶（ATP咐ase）是細(xì)胞鐮膜上的倆一種重離要酶，久負(fù)責(zé)重印要離子田的主動(dòng)琴跨膜運(yùn)蘭輸。通潑過(guò)檢測(cè)堤細(xì)胞膜ATP政ase的活性，艙可以評(píng)價(jià)膜功能性的改變膜的流動(dòng)曠性采用熒光掩偏振法，途細(xì)胞經(jīng)D爽PH熒光嗓探針標(biāo)記烈后，用熒罰光分光光脂度計(jì)測(cè)熒煙光偏振度特。Kex3肯62nm到,Kem巨432將nm浙,狹縫10nm羞,測(cè)溫25℃細(xì)胞膜救損傷長(zhǎng)期毒貌性（也耕稱(chēng)為亞輔急性毒雹性、亞至慢性毒臉性、慢荷性毒性詠或終生膨毒性）類(lèi)是指動(dòng)驕物反復(fù)具多次染抓毒的毒斃性反應(yīng)南。實(shí)驗(yàn)?zāi)[時(shí)，動(dòng)療物每天端固定時(shí)系間吸煙龜1次，扒按實(shí)驗(yàn)免設(shè)計(jì)要必求控制媽吸煙時(shí)紋間和吸合煙量，橫持續(xù)3福個(gè)月后庭活殺一差批，余明下動(dòng)物期繼續(xù)飼令養(yǎng)1個(gè)尿月進(jìn)行傍恢復(fù)期部觀察。沖分別在誤吸煙前腫、吸煙柔期間的牢1個(gè)月墓和2個(gè)留月、停僻止吸煙柔時(shí)（吸攜煙后3衡個(gè)月）熔、停止仔吸煙后廉1個(gè)月湖（吸煙旋后4個(gè)挖月）觀皺察動(dòng)物起體重變客化、血燦液學(xué)參斑數(shù)。實(shí)轎驗(yàn)結(jié)束零后，全宵部處死綱動(dòng)物，財(cái)進(jìn)行肺聯(lián)組織病抄理學(xué)觀飽察。觀炒察指標(biāo)紛包括一般觀再察外觀體凳征和行懼為活動(dòng)肝（如神踢態(tài)萎靡胡、倦縮警不動(dòng)或腎過(guò)度興抗奮、躁蠅動(dòng)驚跳五、肌肉處麻痹或瓦震顫、娛步態(tài)異霜常等）業(yè)，皮毛辰帖身或騙稀疏豎騰散，糞躬便性狀盈、顏色材，食量源及體重菠變化等血液學(xué)啄指標(biāo)紅細(xì)胞菠或網(wǎng)織螺紅細(xì)胞綠細(xì)胞數(shù)追，血紅井蛋白含籃量，白犧細(xì)胞及往其分類(lèi)三細(xì)胞數(shù)康，血小岡板計(jì)數(shù)飯，凝血秋時(shí)間等血液生化仗指標(biāo)天氡氨酸搭氨基轉(zhuǎn)換題酶（AS數(shù)T）、丙太氨酸氨基襯轉(zhuǎn)換酶（吼ALT）仍、堿性磷件酸酶（A啟LP）、廚尿素氮（純BUN）腹、總蛋白喚（TP）閑、白蛋白旅（ALB賢）、血糖挨（GLU瘡）、總膽穴紅素（T林BIL）總、肝酐（屬CREA擊）、總膽詢固醇（T供CH）、氏鈣濃度（搖CA）等病檢器暖官心、肝、匯脾、肺、殃腎、腎上掩腺、甲狀猶腺、胸腺尚、睪丸(嬸子宮)、州腦、交列噴腺等的重還量及其系松數(shù)，以及埋部分器官貿(mào)的病理學(xué)廳檢查動(dòng)物暴蛾露卷煙街煙氣的菜慢性毒便性試驗(yàn)細(xì)菌回復(fù)悅突變?cè)囼?yàn)即Am菌es試姐驗(yàn)。實(shí)康驗(yàn)用菌邊株為鼠麻傷寒沙趕門(mén)氏菌繳不同組繁氨酸缺明陷型突幟變株，遙根據(jù)致閑突變物栽能靈敏也而特異訂地使組將氨酸缺胡陷型突脆變株回燥變成原千型的特偶點(diǎn)，故鉛在缺乏希組氨酸竹的培養(yǎng)款基上，唯只有少鉛數(shù)自發(fā)幣回變菌攏落生長(zhǎng)錯(cuò)，而能把誘發(fā)細(xì)鳳菌回變率的致突切變物可素使細(xì)菌證生長(zhǎng)增承多，從胃而可判河斷被試麻物是否闊具有致勞突變性染色體責(zé)畸變分爽析染色體數(shù)侍目畸變非整倍體行（亞二倍判體和超二弦倍體）、安多倍體和疑內(nèi)復(fù)制染色體芳結(jié)構(gòu)畸挺變裂隙、斷旋裂、斷片系、著絲粒胸環(huán)和無(wú)著匹絲粒環(huán)等姐妹染鬼色體交歸換微核試鑼驗(yàn)致突變?cè)噮Ⅱ?yàn)Hch枯r1毅1分帶AL細(xì)胞附(×4勁00)AL細(xì)胞染色獄體核型次黃嘌廈呤磷酸遣核糖基楊轉(zhuǎn)移酶杏（HP皆RT）主要參與茫嘌呤核苷方酸的補(bǔ)救遼合途徑，麥正常細(xì)胞貴能從頭合趟成DNA催，因此H肺PRT酶牛對(duì)細(xì)胞存柔活繁殖是杏非必需的耍，HPR拼T基因突挽變后仍能邊較長(zhǎng)期活駐存。利用雪正常細(xì)胞泄中HPR鉗T酶活性恩，加入毒救性嘌呤類(lèi)悅似物6-鍛巰基鳥(niǎo)嘌愚呤（6-芽TG）培養(yǎng)，吩細(xì)胞死亡勞，而HP欄RT基因伙突變的細(xì)焰胞對(duì)6-逐TG有抗件性而活存寸，并形成些克隆，以術(shù)此可以檢炕測(cè)HPR呆T基因突銳變?nèi)祟?lèi)11腐號(hào)染色體搭基因突變頭分析用人-中沈國(guó)倉(cāng)鼠卵運(yùn)巢雜交細(xì)扒胞（AL細(xì)胞）檢測(cè)人類(lèi)11政號(hào)染色體（Hch宿r(nóng)11偉）基因突繪變是近幾碧年發(fā)展起濃來(lái)的一種膀快速、簡(jiǎn)慕便、經(jīng)濟(jì)蛾、靈敏的蘆檢測(cè)基因溉突變的實(shí)襲驗(yàn)方法基因突本變細(xì)胞惡性爬轉(zhuǎn)化試驗(yàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化俱是是細(xì)胞沃失去原有站正常形態(tài)腫和功能的善表型特征原，是細(xì)胞胞癌前病變蛛的重要標(biāo)砍志，表現(xiàn)拖在細(xì)胞增渣殖速度加徒快（倍增挽時(shí)間縮短陷），細(xì)胞劍間接觸抑描制消失（抗疊層生長(zhǎng)純），并具框有異種組枯織的浸潤(rùn)巧性（轉(zhuǎn)移駐）。檢測(cè)燦細(xì)胞轉(zhuǎn)化沾能力是評(píng)怖價(jià)外源性噴化合物致寸癌性的基袖本方法動(dòng)物致東癌試驗(yàn)選擇腫瘤因易感性高今和腫瘤自火然發(fā)生率混低的純品當(dāng)系動(dòng)物，撇常用小鼠喪和大鼠。揮年齡以剛狹斷乳為宜蹈，因它們高的易感性水較高，同最時(shí)也可具核有較長(zhǎng)的扭實(shí)驗(yàn)觀察正時(shí)間。計(jì)晌算癌瘤發(fā)衰生率，一導(dǎo)般以病理魚(yú)組織診斷財(cái)為依據(jù)，寺并與對(duì)照伸組相比較輪，以確定蕉致癌的顯梯著性。確哥定誘癌潛各伏期的長(zhǎng)箭短以第一踐例癌瘤發(fā)恥現(xiàn)時(shí)間或遣平均癌瘤鵲發(fā)現(xiàn)時(shí)間生計(jì)。判定療癌瘤多發(fā)壇性，應(yīng)計(jì)雪數(shù)包括同襖一機(jī)體內(nèi)茄發(fā)生兩種嫩或兩種以池上類(lèi)型的彈腫瘤，或者同一臟器落、同一系饅統(tǒng)中出現(xiàn)罷多個(gè)同類(lèi)做型的癌瘤致癌試驗(yàn)生殖毒性府試驗(yàn)雄性生債殖毒性遺檢測(cè)方冒法精子活動(dòng)討度和精子僚計(jì)數(shù)分析精子形態(tài)據(jù)學(xué)試驗(yàn)親代雄脖鼠睪丸毒(附睪模)重量撈系數(shù)系列交配素與擴(kuò)展交群配試驗(yàn)雌性生醬殖毒性劉檢測(cè)方狡法一代繁殖碗試驗(yàn)多代繁媽殖試驗(yàn)其它輔助伙試驗(yàn)（如雌性械動(dòng)物動(dòng)情桂周期觀察厚、性激素箭水平的測(cè)煩定等）胚胎毒性鍵評(píng)定方法胚胎死亡廣率生長(zhǎng)遲緩弱率功能不全熔率畸形率免疫功岔能評(píng)價(jià)體液免剩疫血對(duì)胸腺偉依賴(lài)抗原已SRBC絲式的抗體空魯斑反應(yīng)(謀PFC)血清抗體方滴度(血戒凝法、E滑LISA算法)有絲分撞裂原L籍PS刺歸激淋巴招細(xì)胞轉(zhuǎn)抱化細(xì)胞免疫T細(xì)胞數(shù)那(ANA搭E染色法稱(chēng))遲發(fā)性變性態(tài)反應(yīng)(數(shù)DTH)有絲分裂狠原PHA敬、Con內(nèi)A刺激淋固巴細(xì)胞轉(zhuǎn)痕化非特異免鵝疫自然殺傷伶細(xì)胞單核細(xì)胞英及T、B利淋巴細(xì)胞赤標(biāo)記腹腔巨登噬細(xì)胞瘦對(duì)CR萌BC的尺吞噬作檢用單核細(xì)蠟胞對(duì)炭刷粒的廓快清代表性怒中式卷須煙安全性宴評(píng)價(jià)舉緩例——煙伏絲添加勇神農(nóng)液失降低卷坊煙危害——使用捏SRM生駱物濾嘴降冷低卷煙危浩害煙絲添加迅神農(nóng)液降低卷蘋(píng)煙危害鄙的生物腫醫(yī)學(xué)評(píng)食價(jià)——五葉您神卷煙試驗(yàn)樣品五葉神品怠牌卷煙煙絲中添降加2.5‰神農(nóng)萃取圣液制成的澡卷煙(編射號(hào)205俯#)同品牌對(duì)牧照煙未使用厭神農(nóng)萃富取液的扇空白煙煙絲添加賠神農(nóng)液降昆低卷煙危冒害對(duì)照煙五葉神煙動(dòng)物數(shù)(只)3030動(dòng)物體重(g)20.072.63

19.922.67

死亡時(shí)間(min)76.25~224.50

211.60~263.93

平均活存時(shí)間(min)180.0142.22

233.0611.57平均致死吸煙量(支)41.249.19

55.232.50

與同品針質(zhì)對(duì)照尸煙比較譽(yù)，吸五識(shí)葉神煙鎮(zhèn)組，小蠅鼠的平咸均活存構(gòu)時(shí)間和棵平均致棟死吸煙羞量分別許增加了29.坡4%和34.藍(lán)1%吸煙2鍛10泉min侍，五葉犁神煙組瘋小鼠100%存活，貢而對(duì)照煙疊組小鼠存境活率僅為40%，當(dāng)對(duì)照咱煙組小鼠戶全都死亡齊時(shí)，五葉序神煙組小酷鼠的存活觀率為高達(dá)86.7滾%小鼠吸煙嗓急性致死晌毒性試驗(yàn)空白煙五葉神淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)1.830.581.000.71*肺泡壁增厚2.500.672.110.60出血2.250.452.780.67*氣管上皮變溥2.170.941.440.73肺囊泡1.920.671.110.78*管周水腫2.170.391.890.60肺損傷總分值

12.831.7510.331.00**n=6塘,與擊空白煙潔比較，與*p<令0.0注5,磚**p寺<0.肢005吸煙急性存致死小鼠軍肺組織病坊理改變空白煙五葉神淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)3.400.552.800.45肺泡壁增厚2.200.451.800.45出血2.600.552.000.00*氣管上皮變溥3.200.841.600.55*肺囊泡2.600.551.600.55*管周水腫3.800.452.800.45*肺損傷總分值

17.800.4512.601.34***n=6,公與空白愛(ài)煙比較，號(hào)*p<0猶.05,非***斃p<0.趕001吸煙急店性致死捷大鼠肺抓組織病泳理改變小鼠大鼠正常肺組遞織對(duì)照煙五葉神吸煙急性件致死動(dòng)物幕肺組織病頭理形態(tài)改汪變肺組織病檢理觀察結(jié)菌果表明，聽(tīng)同為吸煙形急性致死浙動(dòng)物，五搖葉神煙組肝肺損傷程專(zhuān)度明顯減最輕，表現(xiàn)掌在淋巴細(xì)臟胞浸潤(rùn)傭、肺泡匪壁增厚拿、出血荒、氣管肅擴(kuò)張、找上皮變漲薄、肺祖囊泡和船管周水孩腫等多項(xiàng)病株理?yè)p傷指絡(luò)標(biāo)均明顯紡好于對(duì)照仿煙組五葉神柔及其對(duì)項(xiàng)照煙的細(xì)胞毒團(tuán)性比較五葉神煙霸誘發(fā)SH諷E和BE碰AS-2合B細(xì)胞增夕殖的半數(shù)攀致死劑量跌分別是對(duì)和照煙的1.7倍和4倍。提示裙：五葉神煙擠的細(xì)胞毒虧性明顯降品低不同細(xì)惱胞系對(duì)大卷煙煙閣氣敏感檔性不同BEA優(yōu)S-2臉B細(xì)胞視對(duì)空白璃煙的敏詠感性約剖是SH歪E細(xì)胞碧的11.5倍；而航對(duì)五葉級(jí)神煙的爐敏感性出僅為S窮HE細(xì)陸胞的4.5倍：提示已：五葉神卷增煙煙氣中枝能被P4蹄50酶活勁化的有害斧物質(zhì)降低沒(méi)？過(guò)氧化氫（H2O2）超氧陰離橫子（O2.-）五葉神及饞其對(duì)照煙狗誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)R養(yǎng)OS增高五葉神觀卷煙誘濤發(fā)細(xì)胞義內(nèi)過(guò)氧說(shuō)經(jīng)氫和朗超氧陰紙離子增犧高的能種力分別腳僅為對(duì)姑照煙的65%和60%。提示五很葉神卷煙騙對(duì)細(xì)胞的顆氧化損傷鏡顯著降低俊。不同種鹿類(lèi)活性跳氧對(duì)煙乘氣的敏攤感性不僑同：超氧陰慮離子的弓增高為湖過(guò)氧化撇氫的2.3倍五葉神煙紋誘發(fā)細(xì)胞刑產(chǎn)生的過(guò)氧化堤氫和超氧陰痰離子含量含矛量增高明分別僅裹為同品莊質(zhì)對(duì)照雁煙的40%和29%，羥自由基含量不僅天明顯低于敘同品質(zhì)對(duì)謝照煙，而提且觀察到魄對(duì)羥自由宴基的清除(?)作用。表爭(zhēng)明五葉神恢卷煙對(duì)細(xì)據(jù)胞的氧化姓損傷顯著受降低。五葉神及還其對(duì)照煙鏡誘發(fā)細(xì)胞外R示OS含量增能高五葉神及日其對(duì)照煙翼對(duì)膜通透性影響乳酸脫氫量酶（LDH隊(duì)）是胞漿禮中一種檔常見(jiàn)酶已，通常招情況下右不能透娃過(guò)細(xì)胞茄膜外逸圍，因此努通過(guò)檢支測(cè)細(xì)胞之外LDH的活性，陽(yáng)可以評(píng)價(jià)膜通透性的改變五葉神揪卷煙誘校發(fā)細(xì)胞斬釋放的LDH活性增高僅伶為同品名質(zhì)對(duì)照雅煙的36%，表明五伶葉神卷煙睜對(duì)細(xì)胞膜麥損傷顯著兼降低。五葉神及達(dá)其對(duì)照煙位對(duì)細(xì)胞膜結(jié)兩構(gòu)和功能影響腺苷三磷隔酸酶（AT奴Pas巖e）是細(xì)胞肺膜上的碌一種重唇要酶，章負(fù)責(zé)重此要離子獵的主動(dòng)什跨膜運(yùn)被輸。通刪過(guò)檢測(cè)賢細(xì)胞膜ATP醫(yī)ase的活性趣，可以堂評(píng)價(jià)膜功能性的改變對(duì)照煙誘可發(fā)細(xì)胞膜ATP酶活性的降低燥程度為膊五葉神洗煙的1.5倍，表明隆五葉神卷見(jiàn)煙對(duì)細(xì)胞憐膜損傷明帳顯減輕?？侫T茅Pa遺se活夢(mèng)性五葉神及食其對(duì)照煙沉對(duì)細(xì)胞膜簡(jiǎn)結(jié)構(gòu)和摧功能影響不同A冤TP酶應(yīng)活性鈉/鉀-AT優(yōu)P酶鎂-ATP貴酶鈣-ATP歪酶鈣/鎂-ATP添酶鈣、鎂攏-AT含P酶是對(duì)煙敗氣敏感遙的指標(biāo)除鈣-A頓TP酶外，五葉授神煙對(duì)其槐他ATP抵酶的損傷餅作用明顯袋輕于對(duì)照某煙神農(nóng)萃籍取液含有活抄化鈉/女鉀-A音TP酶述的活性達(dá)成分(?)五葉神及監(jiān)其對(duì)照煙錯(cuò)對(duì)Hch鉛r1靠1基因舍突變的影響人類(lèi)1銹1號(hào)染伍色體(Hc酬hr撕11)對(duì)包含晃單拷貝藝Hch殊r1驗(yàn)1的人殖-中國(guó)村倉(cāng)鼠卵蒙巢雜交驅(qū)細(xì)胞(AL細(xì)胞)的存活無(wú)夜明顯影響池。利用H腿chr惠11表達(dá)沖CD59像表面抗原收的特性，嶄用CD5估9抗體可枯以篩選H大chr癥11基因爺突變的A北L突變細(xì)在胞，從而蕉檢測(cè)Hc屬hr1燭1基因突慘變率。五葉神血卷煙誘陶發(fā)Hc抱hr量11基撤因突變廟率明顯幕低于同苗品質(zhì)對(duì)指照煙，刺提示五里葉神煙岡具有較象低的基殖因毒作真用。五葉神及域其對(duì)照煙膛對(duì)HPR挺T基因關(guān)突變的影響次黃嘌呤臂磷酸核糖鴉基轉(zhuǎn)移酶（HP潤(rùn)RT）對(duì)正常細(xì)牢胞DNA貴合成是非連必需的，籠而HPR去T基因突尋變體對(duì)基板因毒物6-巰稿基鳥(niǎo)嘌浪呤具有抗性級(jí)，以此可喇檢測(cè)HP腫RT基因窯突變。低劑量嬸時(shí)，五寶葉神卷依煙誘發(fā)HPRT基因突變當(dāng)率與對(duì)照灣煙無(wú)明顯讓差異高劑量時(shí)亡，五葉神縱卷煙誘發(fā)HPRT基因突變硬率明顯低單于同品坦質(zhì)對(duì)照環(huán)煙五葉神樓及其對(duì)博照煙誘般發(fā)SHE細(xì)揉胞轉(zhuǎn)化的比較細(xì)胞轉(zhuǎn)化是細(xì)胞爐失去原級(jí)有正常齡形態(tài)和叔功能的勁表型特亭征，是沈細(xì)胞癌繁前病變湖的重要勉標(biāo)志。蠅檢測(cè)細(xì)聾胞轉(zhuǎn)化津能力是誦評(píng)價(jià)外探源性化鼠合物致引癌性的痰基本方塞法。五葉神有2個(gè)連續(xù)劑廉量組（0.悠008萌和0.攜010閃）轉(zhuǎn)化率明奸顯增高，錯(cuò)對(duì)照煙有3個(gè)連續(xù)追劑量組輔（0.00跑6、0.麗008和壞0.01想0）轉(zhuǎn)化率明考顯增高。相同劑量復(fù)下五葉神棟誘發(fā)的細(xì)輛胞轉(zhuǎn)化率畝明顯低于誕對(duì)照煙，資誘發(fā)細(xì)胞許轉(zhuǎn)化率增通高的能力分比對(duì)照煙柄減少50%。組別咳嗽次數(shù)(次)P值對(duì)照煙3支/d14.7±1.6五葉神煙1支/d14.0±1.7>0.052支/d13.2±2.4>0.053支/d12.3±2.2<0.05復(fù)方甘草合劑20ml/kg/d9.1±1.7<0.001減少氨擇水刺激兆小鼠致艘咳反應(yīng)（治咳俗）延長(zhǎng)喘息付性抽搐潛偉伏期（平喘）組別潛伏期(min)P值對(duì)照煙3支/d39.6±5.8五葉神煙1支/d41.3±6.6>0.052支/d45.2±9.8>0.053支/d50.6±11.0<0.05陽(yáng)性對(duì)照藥102.7±19.4<0.001組別酚紅排泌量P值對(duì)照煙3支/d0.59±0.027五葉神煙1支/d0.60±0.061>0.052支/d0.63±0.045>0.053支/d0.67±0.065<0.05淑芬氏劑20ml/kg/d0.98±0.18<0.001增加離體副氣管酚紅待排泌量（祛痰）改善瘀眼血組織監(jiān)的血液鋸流動(dòng)性組別全血粘度(CP)低切(20S)中切(60S)高切(120S)正常組10.62±1.897.59±1.045.96±0.65對(duì)照煙3支/d15.82±1.5610.32±0.728.06±0.71五葉神煙1支/d15.78±1.4110.14±0.657.82±0.392支/d14.09±2.039.30±1.167.20±0.873支/d13.55±2.219.29±1.287.12±0.85水20ml/kg/d13.12±1.719.15±1.107.16±0.90降低吸蠻煙所致研細(xì)胞染帆色單體旱交換（幼SCE?。┞式M別SCE數(shù)范圍/細(xì)胞平均SCE數(shù)/細(xì)胞空白對(duì)照0~84.16±1.50溶劑對(duì)照2~94.28±1.60對(duì)照煙4~116.84±1.57五葉神煙3~95.50±1.73某外煙5~2011.42±3.15組別觀察細(xì)胞數(shù)微核數(shù)微核率空白對(duì)照組10000171.7‰對(duì)照煙組10136403.95‰實(shí)驗(yàn)煙組10075252.48‰陽(yáng)性對(duì)照組1019423523.05‰抑制吸煙絲式所致細(xì)胞講微核形成神農(nóng)萃主取液應(yīng)俱用于卷扮煙中，銳使小鼠孤和大鼠混吸煙急擠性死亡仙的時(shí)間腫和致死涂吸煙量籠分別增披加了約60%和30%；特別是郊當(dāng)吸對(duì)照昂煙組動(dòng)物屑全部死亡饑時(shí)，五葉可神煙組動(dòng)父物存活率再高達(dá)85%以上同為吸煙頁(yè)急性致死度動(dòng)物，五弦葉神煙組侵肺損傷程豎度明顯減筍輕，表現(xiàn)龍?jiān)诹馨图?xì)胞典浸潤(rùn)、肺姓泡壁增厚昌、出血、霞?xì)夤軘U(kuò)張叮、上皮變身薄、肺囊紡泡和管周參水腫等多屬項(xiàng)病理?yè)p鋪傷指標(biāo)均駱明顯好議于對(duì)照歡煙組。與同品冠質(zhì)對(duì)照徒煙比較獸，五葉惰神卷煙奶的細(xì)胞宇毒性降敏低了約2~4倍，誘發(fā)壘的細(xì)胞氧化素?fù)p傷、膜盯損傷、染晃色體基因慨突變和細(xì)久胞轉(zhuǎn)化等細(xì)胞峽生物學(xué)記改變均洗明顯減齒輕與同品質(zhì)詳對(duì)照煙比爬較，五葉持神卷煙減少動(dòng)萬(wàn)物的刺絨激性咳蓄嗽反應(yīng)版，延長(zhǎng)緣瑞喘息性踐抽搐的鴉潛伏期股，增加示離體氣槳管酚紅印排泌量肉，改善性瘀血的暮血液流戶動(dòng)性，擔(dān)降低了電吸煙所在致染色功單體交拜換率，哈抑制吸脫煙所致雄微核形爪成結(jié)論使用S妖RM生羅物濾嘴降低卷躍煙危害私的生物五醫(yī)學(xué)評(píng)欺價(jià)——5粘mg中脅南?；戽@合型卷全煙SRM降骨低卷煙煙巡壽氣自由基鉗的效果及研穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)樣品1#煙遼普通香押煙2#煙滾5mg中存南海香煙4#煙設(shè)5甜mg中雖南海SR港M低自由錢(qián)基香煙(以上樣房誠(chéng)品均由北慕京卷煙廠繞提供)細(xì)胞毒戚作用小鼠急守性毒性雄性小型鼠吸煙疊1個(gè)月半后生殖嫁器官改明變吸煙組修動(dòng)物體民重、睪柱丸重量第及附睪灰重量均斷低于不辮吸煙組間，其中核體重和族附睪重刷量降低辨明顯，垂但各吸富煙組間木無(wú)差異雄性小烏鼠吸煙藍(lán)1個(gè)月升后精子父活性改丑變精子總貧數(shù)吸1#煙漿組動(dòng)物精嘗子總數(shù)明批顯減少吸2#儀煙組動(dòng)籮物精子匪總數(shù)減惑少，但腳無(wú)統(tǒng)計(jì)抬學(xué)差異吸4#書(shū)煙組動(dòng)陶物精子雕總數(shù)與鑒不吸煙練組相