臨床全自動生化分析儀

關(guān)于臨床全自動生化分析儀第1頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月教學(xué)目標(biāo)和要求掌握自動生化分析儀的分析方法類型及其特點(diǎn)，連續(xù)監(jiān)測法的理論K值，必選的分析參數(shù)，雙波長測定的作用，雙試劑的優(yōu)點(diǎn)，分析儀與手工法比較的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。熟悉分立式自動生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)，備選的分析參數(shù)，測定過程的自動監(jiān)測，校準(zhǔn)方式和校準(zhǔn)要求，影響分析儀分析速度的因素和分析儀性能指標(biāo)。了解某些分析參數(shù)的特殊意義，分析儀的工作過程和操作方法，干片式分析儀的結(jié)構(gòu)和分析原理，常用分析儀的分析性能。第2頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

自動生化分析儀由電腦控制，將生化分析中的取樣(sampling)、加試劑、混勻、保溫反應(yīng)、檢測(detect)、結(jié)果計算、可靠性判斷、顯示和打印、以及清洗(cleaning)等步驟組合在一起自動進(jìn)行操作的分析儀器。

第3頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

自動生化分析技術(shù)的應(yīng)用提高了臨床生化檢驗質(zhì)量和速度；減輕檢驗人員的勞動強(qiáng)度；節(jié)約樣品和試劑；增加檢驗項目；提高檢測精密度，減少實驗誤差；并且有利于臨床檢驗標(biāo)準(zhǔn)化的實現(xiàn)。不足：溫度、試劑、反應(yīng)時間、加樣第4頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月自動生化分析儀按其工作方式不同分為連續(xù)流動式(continuous

streamingmovement

style)或管道式：已很少用離心式(centrifugationstyle)：已很少用分立式(discrete

style)：應(yīng)用最廣泛干片技術(shù)(dryingstyle)：急診多用第5頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)分立式自動生化分析儀的結(jié)構(gòu)

完全模仿手工操作方式設(shè)計，各部分結(jié)構(gòu)對應(yīng)手工操作的每個步驟包括取樣、加試劑、混勻、孵育、檢測、結(jié)果計算、器材清洗等。第6頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月一、基本結(jié)構(gòu)

（一）樣品盤或樣品架

樣品盤（specimendisc）：放置待測樣品的轉(zhuǎn)盤，可放置一定數(shù)量的樣品杯（specimencup）或不同規(guī)格的采血試管，通過樣品盤的轉(zhuǎn)動來控制不同樣品的進(jìn)樣。第7頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

樣品架（specimenstock）：每個樣品架可放數(shù)只樣品杯或采血試管（多為5只或10只）。樣品架的移動通過樣品傳送帶來進(jìn)行。樣品架上的條形碼（barcode）或編碼孔可識別樣品架號及樣品位置號。第8頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品架的優(yōu)點(diǎn)①隨著樣品架移動及樣品的被檢測，可不斷追加已放置樣品杯或采血試管的樣品架；②通過樣品架的移動能將樣品傳送到另一個分析模塊（analysis

die-block）甚至另一臺分析儀上再進(jìn)行分析。

第9頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）試劑室和試劑瓶

轉(zhuǎn)盤式試劑室（reagentchamber）：內(nèi)裝放置試劑瓶的轉(zhuǎn)盤，一般可放置20種以上具有一定形狀的塑料試劑瓶，大型分析儀可放置30～45種試劑瓶。試劑瓶容量一般為10～100ml。通過試劑轉(zhuǎn)盤的轉(zhuǎn)動來選用不同試劑。

第10頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

試劑架式試劑室：可放置容量為250ml～500ml的不同形狀的試劑瓶，試劑瓶不能轉(zhuǎn)動，但每個試劑瓶內(nèi)引出一條試劑管路及其噴嘴，即每種試劑均有專用的加試劑裝置，因而不同試劑間無交叉污染。但試劑管路較長使試劑存在一定的死體積，因而適宜用于使用頻率高、消耗試劑量大的檢測項目。第11頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

大型分析儀同時備有第一試劑室和第二試劑室，即具備對同一檢測項目添加兩次試劑的功能，個別分析儀還具有加入第三試劑的功能。對有條形碼裝置的儀器可將帶條形碼的試劑瓶放在試劑室轉(zhuǎn)盤上的任意位置，儀器能自動識別試劑的種類、批號和有效期。試劑室均具有冷藏裝置，可將試劑保存在4～10℃。第12頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）反應(yīng)杯和反應(yīng)盤

反應(yīng)杯（reactioncup）是樣品與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場所，同時用作比色杯。由透光特性好的硬塑料或石英玻璃制成。比色杯光徑不同分析儀有0.5～0.7厘米不等，大多數(shù)分析儀在計算時將其折算為1厘米光徑。第13頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

反應(yīng)盤（reactiondisc）：100只或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成。在測定過程中反應(yīng)盤作恒速的圓周運(yùn)動，在靜止時向反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進(jìn)行攪拌混勻，當(dāng)反應(yīng)盤恒速圓周運(yùn)動經(jīng)過檢測窗口的比色杯可進(jìn)行吸光度檢測。第14頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）取樣和加試劑裝置

1．取樣裝置（sampling

assembly）：由取樣針、取樣臂、取樣管路、取樣注射器和閥門組成，能定量吸取樣品并加入到反應(yīng)杯。不同分析儀的取樣容量有不同的范圍，一般為2～35μl，步進(jìn)0.1微升不等。第15頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

取樣針設(shè)有電子液面感應(yīng)器，取樣針于樣品上方下降，一旦接觸到樣品液面即停止下降而開始吸樣。適用于不同的采血試管上機(jī)測定。第16頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

多數(shù)加樣裝置設(shè)有防撞功能，遇到阻礙時取樣針立即停止運(yùn)動并報警。某些取樣針還設(shè)有阻塞報警功能，當(dāng)取樣針被樣品中的凝塊、纖維蛋白等物質(zhì)阻塞時，機(jī)器會自動報警、沖洗取樣針，并跳過當(dāng)前樣品，進(jìn)行下一個樣品的取樣檢測。

第17頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月取樣針防交叉污染（crossing

contamination）措施

絕大多數(shù)采用水洗方式（又有瀑布式和涌泉式之分），在吸取另一個樣品前對接觸樣品的樣品針內(nèi)外壁進(jìn)行沖洗；也有采用化學(xué)惰性液（chemicalinertia

fluid）膜的方式來隔絕樣品與取樣針內(nèi)外壁之間的接觸。第18頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2．加試劑裝置

加試劑裝置用于定量吸取試劑加入反應(yīng)杯，可加入試劑容量一般為20～350μl。步進(jìn)1～5微升不等，取樣精度在1微升左右。

注射器方式：組成部件與取樣裝置類似，其液面感應(yīng)系統(tǒng)能檢測并提示試劑剩余量。

灌注式：具有許多條試劑管路及其噴嘴，每種試劑單獨(dú)使用一條試劑管路和噴嘴，不存在各試劑間的交叉污染。

第19頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

大型自動生化儀多具有兩組加試劑裝置，可分別從兩個試劑室吸取同一個檢測項目的第一試劑和第二試劑，大多數(shù)分析儀所有檢測項目加入第二試劑的時間點(diǎn)統(tǒng)一固定為1個或2個點(diǎn)，也有分析儀有3個加入時間點(diǎn)可供選擇。第20頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）混勻與攪拌裝置

反應(yīng)杯里的樣品與試劑通過攪拌棒攪拌而充分混勻，攪拌棒的形狀為扁平棒狀或扁平螺旋狀，表面的疏水材料能防止反應(yīng)液被攪拌棒所攜帶。其工作方式大多為旋轉(zhuǎn)式攪拌，也有震動式攪拌方式。也設(shè)置了防止攪拌棒在不同反應(yīng)液之間攜帶交叉污染的清洗措施。第21頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（六）溫控和定時系統(tǒng)

溫控系統(tǒng)使反應(yīng)杯浸浴在恒溫環(huán)境：恒溫循環(huán)水浴方式：溫度傳遞速度快，保養(yǎng)要求較高。恒溫空氣浴方式：溫度傳遞速度不如恒溫水浴循環(huán)方式，保養(yǎng)簡單。溫度控制器能使循環(huán)水或循環(huán)空氣的溫度控制在規(guī)定溫度±0.1℃。規(guī)定溫度可有37℃和30℃兩種選擇，一般固定在37℃。第22頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

定時系統(tǒng)：不同分析儀對檢測吸光度的間隔時間有不同的規(guī)定，反應(yīng)時間應(yīng)該設(shè)定為此間隔時間的倍數(shù)。總反應(yīng)時間一般限制在8.5-10min內(nèi)，個別分析儀可以設(shè)定為15或22min等。第23頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（七）光路和檢測系統(tǒng)

自動生化分析儀以紫外可見分光光度法為其中心和主要的檢測手段，與一般分光光度計一樣，其光路和檢測系統(tǒng)由光源、單色器和檢測器組成。第24頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月1．光源（lightsource）

一般為鹵素鎢絲燈（halogen

tungstenfilament

lamp），也有采用長壽命的氙燈（xelamp），要求在340～800nm波長范圍內(nèi)能發(fā)射出穩(wěn)定且較平坦的光能。第25頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2．單色器（monochromato）

①干涉濾光片（interferencefilter）分光系統(tǒng)：常帶有340、380、405、500、550、600、660nm等幾種濾光片，各濾光片固定在轉(zhuǎn)盤上，以轉(zhuǎn)盤旋轉(zhuǎn)的方式來選擇波長。這種分光系統(tǒng)在半自動和小型自動分析儀中常用，且不能同一時刻進(jìn)行多波長檢測。②光柵（raster）分光系統(tǒng)：常在340（或293）～800nm范圍內(nèi)選擇10～13種固定的單色光。第26頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月前分光和后分光方式

光柵分光有前分光和后分光兩種方式，光源首先經(jīng)過單色器分光，然后透射到比色溶液的方式為前分光。目前以后分光方式為多見，其優(yōu)點(diǎn)是單色器中沒有轉(zhuǎn)動部分，雙波長在同一時刻檢測，因而提高了檢測的精度和速度。第27頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

光源先透過比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上，經(jīng)色散后所有固定單色光同時通過各自的光纖傳輸?shù)綄?yīng)的檢測器，微處理器按該分析項目的分析參數(shù)，后分光方式

選擇其中一個或兩個波長（雙波長方式）的吸光度值，用于分析結(jié)果的計算。第28頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3．檢測器（detector）

由光敏二極管及放大電路組成，可按設(shè)定的間隔時間連續(xù)測定各反應(yīng)杯的吸光度值。第29頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（八）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

具有多種數(shù)據(jù)處理功能。計算測定結(jié)果判斷結(jié)果準(zhǔn)確性保存各種數(shù)據(jù)自我診斷功能

第30頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（九）清洗系統(tǒng)

反應(yīng)杯清洗裝置：一個反應(yīng)杯內(nèi)的反應(yīng)和檢測結(jié)束后，該反應(yīng)杯就被沖洗系統(tǒng)及時沖洗。清洗過程：由廢液針吸取反應(yīng)杯內(nèi)廢液，加入清洗劑（detergent）沖洗并抽干后，再經(jīng)數(shù)次去離子水沖洗及抽干，然后做杯空白的吸光度檢查，若通過檢查則此反應(yīng)杯可繼續(xù)循環(huán)使用；更高級的儀器帶有風(fēng)干技術(shù)。如果不能通過，分析儀將提示該反應(yīng)杯異常，并跳過此反應(yīng)杯使用下一個反應(yīng)杯，或提示更換反應(yīng)杯。第31頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品針、試劑針和攪拌棒清洗

一般在用于下一個樣品、試劑或反應(yīng)杯前即清洗一次，此時多數(shù)為去離子水沖洗，在一批檢測完成后，則自動進(jìn)行清洗劑清洗。清洗劑可配有1至3種可供選擇，除一種常規(guī)清洗劑外，其它1至2種可按設(shè)定對試劑針、樣品針或反應(yīng)杯進(jìn)行補(bǔ)充清洗。第32頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月二、組合式自動分析儀

（一）組合式自動生化分析儀

將相同或不同的兩臺或兩臺以上的分析部分，即分析模塊進(jìn)行組合連接，采用樣品架方式使樣品通過傳輸線在不同分析模塊間進(jìn)行傳遞并檢測。各分析模塊所分析項目的組合提高了分析效率，這些分析模塊除了基于紫外-可見光譜分析原理的分析模塊外，還有基于離子選擇電極的電解質(zhì)分析模塊，甚至還可組合建立在免疫發(fā)光分析原理的免疫分析模塊。

第33頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月組合式分析儀i2000SRImmunoassayModulec8000ClinicalChemistryModuleci8200ImmunoChemistryIntegration第34頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）實驗室自動化系統(tǒng)

（laboratoryautomationsystem，LAS）

包括樣品前處理系統(tǒng)、樣品輸送系統(tǒng)和各樣品分析系統(tǒng)。不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來連接，通過計算機(jī)控制運(yùn)行。隨著檢測樣品量的增加，只需添加需要的新模塊，將其安裝連接，即可擴(kuò)大處理能力。這樣可避免同類硬件和功能的重復(fù)投資，節(jié)省占地面積所需的基礎(chǔ)投入。當(dāng)一模塊發(fā)生故障時，其余模塊仍在運(yùn)行，在24小時內(nèi)任意時間對模塊進(jìn)行交替保養(yǎng)維護(hù)，不影響日常工作。第35頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品前處理系統(tǒng)

能獨(dú)立工作，由樣品投入部、離心分離部、開栓部、在線分注部、非在線分注部、貼條碼部、蓋栓部、樣品分注收存部、樣品接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的部分，又是獨(dú)立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈活性和擴(kuò)展性。也可通過樣品輸送部分與樣品分析系統(tǒng)連接，組成類似工業(yè)領(lǐng)域的生產(chǎn)流水線，從而實現(xiàn)了從采血到報告的實驗室的全自動化。

第36頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)生化自動化分析方法概要

一、分析方法分類（一）終點(diǎn)法（endassay）

被測物質(zhì)在反應(yīng)過程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)，根據(jù)終點(diǎn)吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點(diǎn)法。該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。從時間-吸光度曲線來看，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)或平衡點(diǎn)時，吸光度將不再變化。終點(diǎn)法參數(shù)設(shè)置簡單，反應(yīng)時間一般較長，精密度較好。第37頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月終點(diǎn)時間的確定①根據(jù)時間-吸光度曲線來確定，②根據(jù)被測物反應(yīng)終點(diǎn)，結(jié)合干擾物的反應(yīng)情況來確定。第38頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月1．一點(diǎn)終點(diǎn)法（onepointendassay）

在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)，即在時間-吸光度曲線上吸光度不再改變時選擇一個終點(diǎn)吸光度值，用于計算結(jié)果。結(jié)果計算公式：待測物濃度CU=（待測吸光度AU－試劑空白吸光度AB）×KK為校準(zhǔn)系數(shù)

第39頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月圖4-3

一點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線

A單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法B雙試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法第40頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2．兩點(diǎn)終點(diǎn)法（twopointendassay）

在被測物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時，選擇第一個吸光度，在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)或平衡時選擇第二個吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計算結(jié)果。計算公式為：

CU=（待測吸光度A2－待測吸光度A1）×K。第41頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月圖4-4

兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線

A單試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法B雙試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法

第42頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

該法能有效地消除溶血(hemolysis)、黃疸（icterus）和脂濁（lipo-turbid）等樣品本身光吸收造成的干擾。圖4-5血紅蛋白、膽紅素和脂濁的

光吸收曲線

第43頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）固定時間法（fixed-timeassay）

指在時間-吸光度曲線上選擇兩個測光點(diǎn)，此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計算。有時也稱此法為兩點(diǎn)法。計算公式與兩點(diǎn)終點(diǎn)法相同，

CU=(A2-A1)×K。第44頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月圖4-6固定時間法反應(yīng)曲線

A單試劑固定時間法B雙試劑固定時間法該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題。

第45頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）連續(xù)監(jiān)測法

（continuousmonitoringassay）

又稱速率法（rateassay），是在測定酶活性或用酶法測定代謝產(chǎn)物時，連續(xù)選取時間-吸光度曲線中線性期（各兩點(diǎn)間吸光度差值相等）的吸光度值，并以此線性期的單位吸光度變化值（ΔA/min）計算結(jié)果。第46頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月圖4-7連續(xù)監(jiān)測法反應(yīng)曲線

A單試劑連續(xù)監(jiān)測法

B雙試劑連續(xù)監(jiān)測法

第47頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月酶促反應(yīng)的線性段

δ1及δ5值偏小，而δ2＝δ3＝δ4，故A1點(diǎn)至A4點(diǎn)屬線性段第48頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月連續(xù)監(jiān)測法的優(yōu)點(diǎn)

可以確定線性期并計算ΔA/min，根據(jù)此值再準(zhǔn)確地計算酶活性，因而使自動生化分析儀在酶活性測定方面顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)測法也可用于測定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某些基于酶法測定的代謝物。酶活性（U/L）＝ΔA/min×理論（或校準(zhǔn)）K值。代謝物濃度CU=ΔA/min×校準(zhǔn)K值。第49頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月1．理論K值

多用于酶活性測定中，因酶活性尚無公認(rèn)的校準(zhǔn)品可用。根據(jù)酶活性的國際單位定義得出酶活性的計算公式為：酶活性(U/L)=ΔA/min×將此式中以K來表示，即為：理論K值-可作為分析參數(shù)輸入到分析儀中。

第50頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月采用理論K值的前提

應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色杯光徑準(zhǔn)確、溫度控制精確以及波長準(zhǔn)確等。但事實上由于各型分析儀在注射器容積步進(jìn)電機(jī)精度、濾光片帶寬等方面的差異，可造成樣品和試劑加量以及吸光度檢測的偏差，溫度的影響有時也非常大。第51頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

由于摩爾吸光系數(shù)受比色杯光徑、波長等的影響，書本上或試劑廠家提供的理論摩爾吸光系數(shù)可能與實際所用分析儀所測的不同，因而有必要獲得實際的摩爾吸光系數(shù)，然后來計算理論K值。第52頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）NADH（NADPH）

“摩爾吸光系”數(shù)的測定NADH（NADPH）沒有標(biāo)準(zhǔn)純制品，而且配成溶液后穩(wěn)定性又較差，不能直接用NADH或NADPH標(biāo)準(zhǔn)液來校正儀器，須通過有NAD+(NADP+)參與的反應(yīng)途徑。第53頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月用已糖激酶(HK)或葡萄糖脫氫酶(GD)方法測定葡萄糖時，葡萄糖的消耗與NADH的生成呈等摩爾關(guān)系。葡萄糖有標(biāo)準(zhǔn)純制品。根據(jù)公式A=εbC，已知比色杯光徑b和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度，測得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度A后便可計算出NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)ε為A/bC。第54頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月測定方法

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1Ommo1/L(0.01mol/L)，標(biāo)準(zhǔn)液加入量為3.5μL，酶試劑加入量為335μL，比色杯光徑為0.7cm，在340nm測得吸光度為0.465，則實測NADH摩爾吸光系數(shù)＝＝6424，即在此臺分析儀上

340nm波長處測得NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)為6424，而理論上NADH（NADPH）的ε為6220。第55頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）“色素原”酶促產(chǎn)物

在405nm波長摩爾吸光系數(shù)的測定

有許多酶底物為人工合成的“色素原”底物，其本身無色，經(jīng)酶作用后釋放出有色的反應(yīng)產(chǎn)物，在405nm波長具有吸收峰。ALP底物磷酸對硝基苯酚(4-Nitrophenylphosphate，4-NPP)經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對硝基苯酚(4-Nitrophenol，4-NP)GGT底物γ-L-谷氨酰對硝基苯胺(γ-L-Glutamyl-p-nitroanilide)或γ-L-谷氨酰-3-羥基-對硝基苯胺(γ-L-Glutamyl-3-carboxyl-p-nitroan)經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對硝基苯胺(p-Nitroaniline，4-NA)或?qū)ο趸?5-氨基苯甲酸(2-amino-nitrobenzoicacid，ANBA)。

第56頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月以對硝基苯酚的摩爾吸光系數(shù)測定為例試劑：①4-NP標(biāo)準(zhǔn)儲存液(1Ommo1/L)②4-NP標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(2.5mmo1/L，以0.84mol/LAMP緩沖液稀釋而成)③底物緩沖液(l5mmol/L4-NPP配于0.84mol/LAMP-HCL緩沖液中，37℃,pHl0.09土0.02)。第57頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月測定方法

4-NP標(biāo)準(zhǔn)液加入量為5μL，底物緩沖液加入量為350μL，波長405nm，光徑0.7cm，溫度37℃，測定得吸光度為A1；另用蒸餾水代替4-NP標(biāo)準(zhǔn)液，按上述方法測定其吸光度為A2，4-NP標(biāo)準(zhǔn)液吸光度ΔA=A1-A2，若測得ΔA為0.460，則實測4-NP摩爾吸光系數(shù)＝18662第58頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2．校準(zhǔn)K值

酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動計算得出。在進(jìn)行酶學(xué)測定時，如果分析條件的變化如溫度、樣品試劑加量和吸光度檢測偏差可同等程度地影響校準(zhǔn)物和待測樣品，則使用校準(zhǔn)品能進(jìn)行補(bǔ)償。一般來說以使用校準(zhǔn)K值為好，但必須有兩個先決條件：①必須使用配套的試劑；②必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，該校準(zhǔn)品應(yīng)具有溯源性。

第59頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）透射比濁法

抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物，在反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進(jìn)行透射比濁（transmissionturbidimetry）測定，可用于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測定。該法須做多點(diǎn)校準(zhǔn)，再經(jīng)非線性回歸，求出抗原或抗體的含量。第60頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月二、常用生化檢測項目分析方法舉例

1．終點(diǎn)法檢測

常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測定法）、鈣（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。第61頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2．固定時間法

苦味酸法測定肌酐采用此法。

第62頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3．連續(xù)監(jiān)測法

對于酶活性測定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測法，如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨?；D(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項目如：脲酶偶聯(lián)法測定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測法。第63頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月4．透射比濁法

透射比濁法可用于測定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項目，多數(shù)屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗“O”、類風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。第64頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)分析參數(shù)設(shè)置

各種測定項目的分析參數(shù)（analysis

paramete）大部分也已設(shè)計好，存于磁盤中，供用戶使用；目前大多數(shù)生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數(shù)。生化分析儀一般另外留一些檢測項目的空白通道，由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)。因此必須理解各參數(shù)的確切意義。

第65頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月一、分析參數(shù)介紹

（一）必選分析參數(shù)

1．試驗名稱（testcode）2．方法類型（也稱反應(yīng)模式）(assaymode)3．反應(yīng)溫度

4．主波長（primarywavelength）5．次波長（secondarywavelength）6.反應(yīng)方向（responsedirection）

第66頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月7．樣品量（samplingvolum）常量、減量和增量。8．第一試劑量（firstreagentvolum）一般20-300μl9．第二試劑量（secondreagentvolum）同上。10．總反應(yīng)容量（totalreactingvolum）一般180-350μl，現(xiàn)儀器能減少至120μl。11．孵育時間（incubatetime）12．延遲時間（delaytime）第67頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月13．連續(xù)監(jiān)測時間（continuousmonitoringtime）一般為60～120s，不少于4個吸光度檢測點(diǎn)（3個吸光度變化值）14．校準(zhǔn)液（calibrator）個數(shù)及濃度15．校準(zhǔn)K值（calibratecoefficient）或理論K值16．線性范圍（linearityrange）17．小數(shù)點(diǎn)位數(shù)（decimalpointdigit）

第68頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）備選分析參數(shù)

這類分析參數(shù)與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性有關(guān)，一般來說不設(shè)置這類分析參數(shù)，分析儀也能檢測出結(jié)果，但若樣品中待測物濃度太高等，檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確。第69頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月1．樣品預(yù)稀釋設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀釋后樣品量三個數(shù)值，便可在分析前自動對樣品進(jìn)行高倍稀釋。2．底物耗盡值（substrateexhaustlimit）在負(fù)反應(yīng)的酶活性測定中，可設(shè)置此參數(shù)，以規(guī)定一個吸光度下降限。若低于此限時底物已太少，不足以維持零級反應(yīng)而導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

第70頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3．前區(qū)檢查免疫比濁法中應(yīng)用，以判斷是否有抗原過剩。將終點(diǎn)法最后兩個吸光度值的差別（ΔA）設(shè)置一個限值，如果后一點(diǎn)的吸光度比前一點(diǎn)低，表示已有抗原過剩，應(yīng)稀釋樣品后重測。4．試劑空白吸光度范圍超過此設(shè)定范圍表示試劑已變質(zhì)，應(yīng)更換合格試劑。第71頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月5．試劑空白速率連續(xù)監(jiān)測法中使用，是試劑本身在監(jiān)測過程中沒有化學(xué)反應(yīng)時的變化速率。6．方法學(xué)補(bǔ)償系數(shù)用于校準(zhǔn)不同分析方法間測定結(jié)果的一致性，有斜率和截距兩個參數(shù)。7．參考值范圍對超過此范圍的測定結(jié)果，儀器會打印出提示。第72頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）某些參數(shù)的特殊意義

1．最小樣品量一般分析儀的最小樣品量是2μl，目前也有小至1.6μl的。2．最大試劑量對方法靈敏度很高而線性上限低的檢測項目，很重要。

第73頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3．彈性速率（flexrate）

在酶活性測定中，當(dāng)酶活性太高，在連續(xù)監(jiān)測期中已不呈線性反應(yīng)時，有些儀器具有彈性速率功能，能自動選擇反應(yīng)曲線上連續(xù)監(jiān)測期中仍呈線性的吸光度數(shù)據(jù)計算結(jié)果，使酶活性測定的線性范圍得以擴(kuò)大。如AST可從1000U/L擴(kuò)展至2000U/L，從而減少稀釋及重測次數(shù)、降低成本。第74頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月4．標(biāo)本空白速率

以膽紅素干擾堿性苦味酸法測定肌酐為例：樣品中存在膽紅素時，膽紅素對堿性苦味酸速率法或兩點(diǎn)法測定肌酐有負(fù)干擾。因為膽紅素在肌酐檢測的波長505nm有較高光吸收，而且膽紅素在堿性環(huán)境中可被氧化轉(zhuǎn)變，因而在肌酐反應(yīng)過程中膽紅素的光吸收呈下降趨勢。第75頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月設(shè)置空白速率以消除膽紅素干擾

若在加入第一試劑后一段時間內(nèi)設(shè)置試劑空白速率，因為此段中苦味酸尚未與肌酐反應(yīng)，而膽紅素在第一試劑的堿性環(huán)境中已同樣被氧化轉(zhuǎn)變，因而以第二試劑加入后的速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消除膽紅素的負(fù)干擾，見圖4-8。

第76頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

空白速率法消除膽紅素對肌酐測定的干擾

圖4-8第77頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月二、單波長和雙波長方式

（一）概念

采用一個波長檢測物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為單波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，或在混合反應(yīng)液中待測組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時，可以選用。使用一個主波長和一個次波長的稱雙波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性時，采用雙波長方式更好。第78頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）雙波長的作用①消除噪音干擾;②減少雜散光影響;③減少樣品本身光吸收的干擾：當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時，會產(chǎn)生非特異性的光吸收，雙波長方式可以部分消除這類光吸收干擾。第79頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）次波長的確定方法

當(dāng)被測物的主波長確定之后，根據(jù)干擾物吸收光譜特征選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。一般來說，次波長應(yīng)大于主波長100nm。以主波長與次波長吸光度差來計算結(jié)果。第80頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月三、單試劑和雙試劑方式

反應(yīng)過程中只加一次試劑稱單試劑方式，加兩次試劑便為雙試劑方式。雙試劑方式分析的優(yōu)點(diǎn)是：①可提高試劑的保存穩(wěn)定性；②能設(shè)置兩點(diǎn)終點(diǎn)法；③在某些項目檢測時能消除非特異性化學(xué)反應(yīng)干擾。第81頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月雙試劑方式消除非特異性化學(xué)

反應(yīng)干擾舉例

血清ALT測定時，血清中原有酮酸也可與試劑LDH起反應(yīng)，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一試劑，使原有酮酸與LDH反應(yīng)，之后加入含有α-酮戊二酸的第二試劑，啟動ALT酶促反應(yīng)生成丙酮酸，這些丙酮酸與LDH反應(yīng)消耗的NAD＋能真正反映ALT活性，從而消除以上副反應(yīng)的影響。

第82頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月四、測定過程的自動監(jiān)測

1．試劑空白監(jiān)測：①每瓶試劑在使用前先自動檢測試劑空白吸光度；②每個樣品測定前均檢測試劑空白吸光度。為某些先加試劑后取樣品的分析儀所采用。第83頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2．試劑空白變化速率監(jiān)測

設(shè)置此項監(jiān)測后，分析儀在結(jié)果計算時會自動減去試劑空白變化速率。在以監(jiān)測NAD（P）H減少為指示反應(yīng)的酶活性測定中，空白速率速率可監(jiān)測并消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降；在色素原為底物的酶活性測定中，空白速率可監(jiān)測并消除底物自身分解造成的吸光度升高。有關(guān)空白速率監(jiān)測在膽紅素對堿性苦味酸速率法測定肌酐負(fù)干擾消除中的作用，已如前述。第84頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3．樣品信息監(jiān)測

由于樣品的溶血、脂濁、黃疸會對測定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長或多波長檢測其性質(zhì)和程度，一般是測定樣品在600nm／570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小來分別判斷樣品溶血、脂濁和黃疸程度。然后在結(jié)果計算時自動減去這部分干擾，這將有利于提高分析結(jié)果的可靠性。第85頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月4．結(jié)果可靠性監(jiān)測（1）終點(diǎn)監(jiān)測（2）線性期監(jiān)測①將連續(xù)監(jiān)測到的各吸光度值進(jìn)行線性回歸，計算出各點(diǎn)的方差，根據(jù)方差值的大小來判斷是否呈線性；②取連續(xù)監(jiān)測期開始若干點(diǎn)的變化速率與連續(xù)監(jiān)測期最后若干點(diǎn)的變化速率進(jìn)行比較，來判斷是否為線性期。

第86頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月5．底物消耗的監(jiān)測

在連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性時，如果在監(jiān)測期內(nèi)吸光度上升或下降超過其底物耗盡值，則說明該樣品酶活性非常高，底物將被耗盡，監(jiān)測期的吸光度將偏離線性，使測定結(jié)果不可靠。此監(jiān)測對于采用負(fù)反應(yīng)分析酶活性的方法甚為重要。

第87頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

底物消耗監(jiān)測

圖4-9第88頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月6．方法線性范圍監(jiān)測

每種待測物分析都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結(jié)果若超過此范圍，分析儀將顯示測定結(jié)果超過線性范圍的提示，多數(shù)分析儀會自動將樣品減量或增量重新測定。

第89頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月四、分析參數(shù)設(shè)置舉例

以肌酸激酶測定為例。

1.肌酸激酶試劑盒通用參數(shù)

樣品量50μl，第一試劑1000μl，37℃保溫5min，加第二試劑500μl，延時2min在340nm讀第一點(diǎn)吸光度，連續(xù)監(jiān)測2min。第90頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2.某生化分析儀有關(guān)參數(shù)的設(shè)置范圍

樣品量2－35μl，第一試劑量20－270μl，第二試劑量20－270μl，總反應(yīng)容量180－350μ，吸光度監(jiān)測周期18s，總反應(yīng)時間10min，各試劑可加入時間：1.5min，4.5min，9.5min。第91頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3.參數(shù)設(shè)置如下

（1）按比例減少樣品量和各試劑量，使反應(yīng)液總?cè)萘吭诜治鰞x180－350μl范圍內(nèi)。選擇樣品量為10μl，第一試劑200μl，第二試劑100μl，這時反應(yīng)液總?cè)萘渴?10μl。或者選擇樣品量為8μl，第一試劑160μl，第二試劑80μl，這時反應(yīng)液總?cè)萘渴?48μl。第92頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）確定第二試劑加入時間，根據(jù)通用參數(shù)，應(yīng)選擇4.5min為第二試劑加入點(diǎn)。（3）確定各個吸光度選擇點(diǎn)，由于第二試劑加入時間4.5min，換算成監(jiān)測時間為第16，17點(diǎn)之間，加上2min延時，則在第24監(jiān)測點(diǎn)為第一點(diǎn)吸光度，并連續(xù)選擇24-31監(jiān)測點(diǎn)。第93頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（4）計算K值：根據(jù)樣品量10μl，第一試劑200μl，第二試劑100μl，代入計算公式則K===4984

也可以采用肌酸激酶的校準(zhǔn)品，執(zhí)行校準(zhǔn)程序來得到校準(zhǔn)K值。第94頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月4．對新設(shè)置的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行試運(yùn)行

在開始運(yùn)行時，分析儀會對各反應(yīng)參數(shù)之間的邏輯合法性進(jìn)行檢測，如果反應(yīng)參數(shù)中出現(xiàn)邏輯性錯誤，則分析儀會顯示錯誤信息并停機(jī)，這時可以根據(jù)提示信息對反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行修改。第95頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月第四節(jié)自動生化分析儀

工作過程和操作方法

一、工作過程在測定過程中所有機(jī)械步驟均由微處理器根據(jù)已設(shè)定的程序（procedure）進(jìn)行工作。第96頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月1．取樣加試劑和混勻

樣品盤轉(zhuǎn)動使樣品進(jìn)入待測位置

樣品針定量吸取樣品加入一反應(yīng)杯反應(yīng)盤旋轉(zhuǎn)

試劑轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動使所需試劑瓶進(jìn)入試劑吸取位置

試劑針定量吸取試劑加入反應(yīng)杯

攪拌機(jī)構(gòu)將反應(yīng)杯內(nèi)液體進(jìn)行攪拌混勻第97頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2．保溫反應(yīng)和吸光度檢測反應(yīng)盤旋轉(zhuǎn)

反應(yīng)杯內(nèi)液體在恒溫條件下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)當(dāng)該反應(yīng)杯通過檢測窗口時被檢測得到一個吸光度值按規(guī)定的間隔時間檢測吸光度值直至總反應(yīng)結(jié)束

總反應(yīng)時間一般為10min，如果18s為檢測吸光度的間隔時間（intervaltime），則10min得到34個吸光度值，若15s為間隔時間，則得到40個吸光度值。

第98頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3．計算并顯示或打印結(jié)果

分析儀根據(jù)各測光點(diǎn)讀數(shù)對某一檢測項目進(jìn)行結(jié)果計算，并顯示或打印出每個項目的報告，也可按標(biāo)本顯示或打印出全部項目的累積。即待某樣品指定的項目測試完畢，便顯示或打印檢測結(jié)果。第99頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月二、操作方法

（一）操作前的各項檢查（1）正常開機(jī)以后，檢查沖洗用水裝置是否正常、各項分析試劑是否充足、各種清洗劑是否足夠，以及樣品針、試劑針和攪拌棒是否清潔。（2）確認(rèn)要進(jìn)行校準(zhǔn)的項目，確認(rèn)要做的質(zhì)控批號及項目，以及校準(zhǔn)品、質(zhì)控品是否足夠。（3）進(jìn)行光度計自檢來確認(rèn)光路與檢測系統(tǒng)是否處于正常工作狀態(tài)。第100頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）校準(zhǔn)

分析儀在樣品分析之前都要對該分析項目進(jìn)行校準(zhǔn)（也稱定標(biāo)），得出一個該項目的校準(zhǔn)系數(shù)（K）。校準(zhǔn)前首先必須在反應(yīng)程序里設(shè)定有關(guān)校準(zhǔn)的參數(shù)，如校準(zhǔn)液的代碼、位置及濃度值等。執(zhí)行校準(zhǔn)程序，檢測得到該校準(zhǔn)品的吸光度值，再根據(jù)校準(zhǔn)濃度計算校準(zhǔn)系數(shù)（K=校準(zhǔn)品濃度/校準(zhǔn)品吸光度）。

第101頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月1．校準(zhǔn)方式

有單點(diǎn)校準(zhǔn)、兩點(diǎn)校準(zhǔn)和多點(diǎn)校準(zhǔn)單點(diǎn)校準(zhǔn)：校準(zhǔn)曲線呈直線且通過原點(diǎn)，用單個濃度的校準(zhǔn)液即可，兩點(diǎn)校準(zhǔn)：若校準(zhǔn)曲線呈直線但不通過原點(diǎn)，則需用兩個濃度的校準(zhǔn)液做兩點(diǎn)校準(zhǔn)；多點(diǎn)校準(zhǔn)：當(dāng)校準(zhǔn)曲線不呈直線而為真正的曲線時，應(yīng)做多點(diǎn)校準(zhǔn)，并按其線形選擇不同的曲線方程進(jìn)行擬和，如雙曲線、拋物線、冪函數(shù)、指數(shù)函數(shù)、對數(shù)函數(shù)等方程等。第102頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月2．對校準(zhǔn)的要求

（1）選擇合適（配套）的校準(zhǔn)品（2）如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)。（3）確定校準(zhǔn)的頻度。

第103頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（4）如有下列情況發(fā)生時，必須進(jìn)行校準(zhǔn)：①改變試劑的種類或批號；②儀器或者檢驗系統(tǒng)進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件；③質(zhì)控反映出異常的趨勢或偏移，或者超出了實驗室規(guī)定的接受限。第104頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）質(zhì)控品測定

質(zhì)控是保證檢測結(jié)果可靠性的一個重要手段，因此每批樣品的分析測定均應(yīng)該有質(zhì)控樣品同時監(jiān)測。關(guān)于分析儀的批測定，是指一批樣品從開始測定到完成測定后停止的整個過程。其中如果進(jìn)行了添加或更新試劑、進(jìn)行了有可能改變吸光度的維護(hù)等操作，均應(yīng)進(jìn)行一次質(zhì)控樣品的檢測，以便及時監(jiān)測到分析系統(tǒng)的改變。第105頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

所有分析儀都已設(shè)定或固化了有關(guān)質(zhì)控的分析程序：①設(shè)定有關(guān)質(zhì)控參數(shù)，如每個質(zhì)控品的批號、靶值和標(biāo)準(zhǔn)差；②選擇質(zhì)控圖的方式，如均值－標(biāo)準(zhǔn)差質(zhì)控圖；③質(zhì)控結(jié)果的統(tǒng)計分析，分析儀會保存每次測定的質(zhì)控結(jié)果，并對其進(jìn)行統(tǒng)計，以列表及質(zhì)控圖的形式在屏幕上顯示。第106頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

可根據(jù)質(zhì)控結(jié)果在質(zhì)控圖上的位置判斷其是否在控。如果判為失控則應(yīng)從試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和分析儀等幾方面尋找原因。通過對質(zhì)控結(jié)果的分析，可以了解某項目的分析精密度和準(zhǔn)確度的改變。第107頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）檢測項目的輸入與測定

1．項目輸入（1）逐項輸入：每份樣品可以任選分析儀中已設(shè)置的且試劑室內(nèi)已預(yù)置試劑的項目中的一項、幾項或全部項目。第108頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）項目組合輸入：把與疾病相關(guān)的檢驗項目組合在一起，進(jìn)行組合檢驗，這有利于方便病人，有利于疾病的診斷和預(yù)后分析，同時也簡化了分析操作，提高分析效率。（3）批量輸入：對于有連續(xù)相同測定項目的樣品，可使用批量輸入的方法。第109頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

多數(shù)全自動分析儀的操作非常方便，在開始測定畫面，輸入該批第一個樣品的樣品號，分析儀即會自動逐個地對樣品進(jìn)行測定。一般在開始畫面還可選擇：①是否需要對結(jié)果超過設(shè)定的線性范圍、超過允許的吸光度上限等的樣品自動進(jìn)行重復(fù)測定；②測定結(jié)果是否需要按照已設(shè)定的打印格式自動打印與測定結(jié)果有關(guān)的選項。2．進(jìn)行測定第110頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3．急診檢驗

幾乎所有全自動生化分析儀都具備“急診優(yōu)先”的功能，儀器留有急診樣品的分析位置或?qū)Ｓ脴悠芳芤曰蚣痹\分析的專用編號。一旦在急診樣品位置上放置了樣品，并設(shè)定了急診檢驗的項目，分析儀就會在常規(guī)樣品的測定過程中，優(yōu)先安排對該樣品進(jìn)行分析測定。第111頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）樣品的減量與預(yù)稀釋方式

樣品的預(yù)稀釋方式是指在分析過程中儀器首先對樣品做自動稀釋，然后進(jìn)行測定。

操作過程:a.樣品針吸取一定量樣品，加入反應(yīng)杯，b.試劑針把稀釋液加入已取樣品的反應(yīng)杯，并攪拌混勻，c.由取樣針在已稀釋的反應(yīng)杯里吸取已稀釋的樣品，加至另一個反應(yīng)杯進(jìn)行分析測定。

樣品預(yù)稀釋的優(yōu)點(diǎn)：稀釋過程自動化，能使用到高達(dá)100倍或更高的稀釋比例。缺點(diǎn)：需占用3個取樣周期(samplingcycle)。第112頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（六）分析儀的維護(hù)

分析儀的常規(guī)維護(hù)(maintenanc)是保證分析儀能夠正常運(yùn)行的重要手段。分析儀要嚴(yán)格根據(jù)操作手冊的要求進(jìn)行維護(hù)。每天維護(hù)每周維護(hù)不定期維護(hù)

第113頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（七）分析儀數(shù)據(jù)連網(wǎng)

分析儀的數(shù)據(jù)連網(wǎng)是指分析儀與實驗室電腦網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)之間分析數(shù)據(jù)的互傳與共享。連網(wǎng)的實現(xiàn)是通過分析儀的數(shù)據(jù)接口以及接口軟件來完成。通過連網(wǎng)，能使來自分析儀的結(jié)果數(shù)據(jù)在網(wǎng)絡(luò)軟件的強(qiáng)大功能下得到進(jìn)一步的處理，如報告單的格式（形式）更加為醫(yī)生與患者所接受；患者的信息與對應(yīng)的檢驗結(jié)果能長期保存；結(jié)果的分析與管理更為完善。

第114頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月三、自動化分析與手工操作的比較

（一）優(yōu)點(diǎn)

1.檢測速度快

2.檢測靈敏度高

3.檢測準(zhǔn)確度高

4.檢測精密度高

5.樣品和試劑用量減少

6.其他:能精確地控制反應(yīng)時間;能精確地控制反應(yīng)溫度;能進(jìn)行復(fù)雜的結(jié)果計算。

第115頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）缺點(diǎn)

1.選擇次波長較困難2.操作時間受限3.操作復(fù)雜性受限:加試劑的次數(shù)受限制;無法做復(fù)雜的操作;選擇和改變反應(yīng)溫度困難4.樣品量/試劑量的比例受限制5.不適宜做參考方法6.儀器維護(hù)和保養(yǎng)較復(fù)雜

第116頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月第五節(jié)

干片式生化分析儀簡介

一、儀器結(jié)構(gòu)

（一）干片試劑

干片試劑的結(jié)構(gòu)從上到下一般分為展開層、試劑層、顯色層和支持層，見圖4-10。（二）檢測儀器

也有半自動和全自動之分

第117頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月干化學(xué)的原理（1）

試劑結(jié)構(gòu)Sample散布層試劑層顯色層支持層第118頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月二、分析原理

（一）分析過程

1．展開層待測樣品定量加到干片試劑，由展開層把樣品均勻展開，并且阻擋固體物質(zhì)如紅細(xì)胞和大分子物質(zhì)進(jìn)入試劑層。展開層還能為反射光檢測提供一個具有反射的背景。2．試劑層樣品中的水分成為干式試劑的溶劑，試劑與待測物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。試劑層的結(jié)構(gòu)還能控制多步化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)次序。第119頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月3．顯色層化學(xué)反應(yīng)的產(chǎn)物在顯色層與顯色試劑起呈色反應(yīng)。支持層為一透明膠片，僅起支撐試劑干片的作用。4．吸光度檢測整個過程經(jīng)過一個規(guī)定的時間，由反射光度計進(jìn)行檢測分析。光度計的單色光透過支持層、顯色層、試劑層，一部分光線被吸收，另一部分光線則反射到接收器被檢測。待測物濃度越高，光線被吸收越多，檢測到的反射光越弱，因而待測物濃度與吸光度成正比。（圖4-10）

第120頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月干化學(xué)的原理（2）反應(yīng)過程演示第121頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月干化學(xué)的原理（3）

比色展開層試劑層顯色層支持層

接收器第122頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）分析方法原理

以血氨測定為例，氨干試劑片的有效成分是溴酚藍(lán)（BromphenolBlue）,其它成分包括表面活性劑、緩沖成分和保濕劑。氨通過半透膜進(jìn)入試劑層，與指示染料溴酚藍(lán)反應(yīng)產(chǎn)生顏色產(chǎn)物，其顏色強(qiáng)度也即吸光度與樣品中氨含量成正比，由反射光度計在605nm進(jìn)行吸光度檢測，與經(jīng)同樣檢測的氨校準(zhǔn)品進(jìn)行比較，得到樣品中氨的濃度。血氨測定的分析參數(shù)很簡單：樣品10μl，反應(yīng)時間5min，波長605nm。第123頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月第六節(jié)自動生化分析儀性能評價

全自動分析儀將取樣至出結(jié)果的全過程都自動完成。操作者只要把樣品放在分析儀一定的位置上，輸入要測定的項目代號，儀器就會根據(jù)分析程序自動地進(jìn)行操作，并打印出測定結(jié)果。舉例來說，一臺分析速度為1600測試/h的分析儀，工作4小時所完成的工作量，如果用手工操作，一般需要10到15個人工作1天。另外由于全自動化操作，并且分析儀設(shè)有完善的測定過程監(jiān)測功能，因此人為主觀誤差因素很小，檢測精密度大大提高。第124頁，課件共139頁，創(chuàng)作于2023年2月

半自動分析儀根據(jù)其工作原理叫自動比色儀可能更恰當(dāng)，其共用流動式比色杯，反應(yīng)液之間互染率大。其優(yōu)點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡單，價格便宜。缺點(diǎn)有：①交叉污染較重，反應(yīng)液間相互影響不可避免。②每個項目檢測后均需沖洗才能進(jìn)行下一個項目測定，速度慢。③分析過程中的某些步驟需手工完成（如加試劑、取樣、