高效液相色譜

高效液相色譜第1頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9第三章

高效液相色譜分析法一、高效液相色譜儀HPLC二、高效液相色譜法的特點(diǎn)featureofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第一節(jié)

高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器highperformanceliquidchromatographfeatureandinstrumentofHPLC第2頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9一、液相色譜儀器

highperformanceliquidchromatograph第3頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9液相色譜儀（2）第4頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9液相色譜儀（3）第5頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9液相色譜儀（4）第6頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9二、高效液相色譜法的特點(diǎn)

featureofHPLC

特點(diǎn)：高壓、高效、高速高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。第7頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9三、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程第8頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/92.主要部件(1)高壓輸液泵主要部件之一，壓力：150～350×105

Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液體的流動相高速通過時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性第9頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9(2)梯度淋洗裝置外梯度:

利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。內(nèi)梯度:一臺高壓泵,通過比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。第10頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9(3)進(jìn)樣裝置

流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置，其結(jié)構(gòu)如圖所示：第11頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9(4)高效分離柱

柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長5～40cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。第12頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9(5)液相色譜檢測器

a.紫外檢測器應(yīng)用最廣，對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。特點(diǎn)：

靈敏度高；線形范圍高；流通池可做的很?。?mm×10mm，容積8μL）；

對流動相的流速和溫度變化不敏感；波長可選，易于操作；可用于梯度洗脫。

第13頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9b.光電二極管陣列檢測器紫外檢測器的重要進(jìn)展；光電二極管陣列檢測器：1024個(gè)二極管陣列，各檢測特定波長，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如圖所示。第14頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9第15頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9光電二極管陣列檢測器第16頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9c.示差折光檢測器

（differentialrefractiveindexdetector）除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器；可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；通用型檢測器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）；靈敏度低、對溫度敏感、不能用于梯度洗脫；偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種；第17頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9示差折光檢測器第18頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9d.熒光檢測器

（fluorescencedetector）高靈敏度、高選擇性；對多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)；第19頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四2023/5/9電導(dǎo)檢測器結(jié)構(gòu)第