一、細菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)觀察

學(xué)習(xí)要求1、初步了解病原生物學(xué)和免疫學(xué)實驗技術(shù)的概念和內(nèi)容；2、熟悉病原生物學(xué)實驗室的本卷須知；3、掌握顯微鏡的使用和保護方法；4、掌握細菌的根本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)；5、掌握細菌的革蘭染色法；6、了解細菌的運動特點。5/8/20231第二頁，共四十七頁。介紹實驗室有關(guān)的內(nèi)容1、總論微生物實驗寄生蟲實驗免疫學(xué)技術(shù)2、實驗室本卷須知評分標(biāo)準(zhǔn)清潔衛(wèi)生操作規(guī)程顯微鏡管理等5/8/20232第三頁，共四十七頁。實驗內(nèi)容1、顯微鏡使用和保護〔錄像〕2、細菌的鏡下形態(tài)觀察〔學(xué)生操作〕3、細菌的特殊結(jié)構(gòu)〔學(xué)生操作〕4、革蘭染色〔學(xué)生操作〕5、細菌的動力觀察錄像〔教師示教〕5/8/20233第四頁，共四十七頁。5/8/20234第五頁，共四十七頁。實驗小結(jié)1、顯微鏡油鏡的使用和保護2、細菌的根本形態(tài)①球菌②桿菌③螺形菌3、細菌的特殊結(jié)構(gòu)①莢膜②鞭毛③芽胞④菌毛4、細菌的革蘭染色法5、本卷須知：評分、衛(wèi)生、操作、管理。5/8/20235第六頁，共四十七頁。end5/8/20236第七頁，共四十七頁。細菌的根本形態(tài)觀察(發(fā)片)1、球菌鏡下形態(tài)：①葡萄球菌②鏈球菌③肺炎鏈球菌④腦炎奈瑟菌2、桿菌鏡下形態(tài)：①大腸埃希菌②破傷風(fēng)梭菌③產(chǎn)氣莢膜梭菌④變形桿菌3、螺形菌革蘭染色片：

霍亂弧菌或水弧菌

5/8/20237第八頁，共四十七頁。細菌的特殊結(jié)構(gòu)(示教片)1．肺炎球菌莢膜染色示教片〔示莢膜〕2．變形桿菌鞭毛染色示教片〔示鞭毛〕3．破傷風(fēng)梭菌芽胞染色或革蘭染色示教片〔示芽胞〕5/8/20238第九頁，共四十七頁。

細菌的革蘭染色革蘭染色法是細菌檢驗中最常用的一種染色法。利用革蘭染色法，可將細菌分為兩大類，有助于鑒別細菌和選擇用藥等。1、革蘭染色法原理

2、革蘭染色法操作步驟3、革蘭染色結(jié)果通過革蘭染色可以觀察到什么？細菌的形態(tài)、排列、莢膜、芽胞5/8/20239第十頁，共四十七頁。革蘭陰性菌因其細胞壁中肽聚糖含量少，結(jié)構(gòu)疏松，脂類物質(zhì)含量高而被酒精脫色，經(jīng)復(fù)染呈紅色。革蘭染色原理：革蘭陽性菌因細胞壁中含有大量的肽聚糖和磷壁酸，且結(jié)構(gòu)致密，可保存結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，并不被酒精脫色而顯示為紫藍色。5/8/202310第十一頁，共四十七頁。

革蘭染色方法(錄像）

涂片自然干燥火焰固定染色染色過程：

已固定的涂片加結(jié)晶紫1分鐘，水沖洗滴加碘液1分鐘，水沖洗95%酒精20~30秒稀釋石炭酸復(fù)紅1分鐘，水沖洗待干鏡檢初染媒染脫色復(fù)染一般用室溫枯燥，注意必須完全枯燥前方可固定。涂片在酒精燈火焰上快速通過3～4次以固定細菌，并使其不易從玻片上脫落。注意不要將涂片直接放在火焰上烤，以免破壞細菌結(jié)構(gòu)。

5/8/202311第十二頁，共四十七頁。用滅菌的接種環(huán)取無菌生理鹽水1-2環(huán)，置于玻片中。接種環(huán)滅菌，待接種環(huán)冷卻后，挑取適量培養(yǎng)物混合于鹽水中，涂抹均勻使成一層薄膜〔假設(shè)檢材是液體那么不必加生理鹽水〕薄膜涂抹的面積約1.5×2.0cm。按上法制備大腸桿菌涂膜。5/8/202312第十三頁，共四十七頁。5/8/202313第十四頁，共四十七頁。葡萄球菌〔革蘭染色〕5/8/202314第十五頁，共四十七頁。葡萄球菌〔革蘭染色〕5/8/202315第十六頁，共四十七頁。葡萄球菌電鏡照片5/8/202316第十七頁，共四十七頁。鏈球菌〔革蘭染色〕5/8/202317第十八頁，共四十七頁。鏈球菌〔革蘭染色〕5/8/202318第十九頁，共四十七頁。鏈球菌電鏡照片5/8/202319第二十頁，共四十七頁。奈瑟菌〔革蘭染色〕5/8/202320第二十一頁，共四十七頁。雙球菌〔革蘭染色〕5/8/202321第二十二頁，共四十七頁。雙球菌電鏡照片5/8/202322第二十三頁，共四十七頁。大腸埃希菌〔革蘭染色〕5/8/202323第二十四頁，共四十七頁。大腸埃希菌〔革蘭染色〕5/8/202324第二十五頁，共四十七頁。大腸埃希菌電鏡照片5/8/202325第二十六頁，共四十七頁。霍亂弧菌〔革蘭染色〕霍亂弧菌電鏡照片5/8/202326第二十七頁，共四十七頁。莢膜莢膜5/8/202327第二十八頁，共四十七頁。莢膜5/8/202328第二十九頁，共四十七頁。莢膜5/8/202329第三十頁，共四十七頁。變形桿菌鞭毛染色〔示鞭毛〕5/8/202330第三十一頁，共四十七頁。變形桿菌鞭毛電鏡照片〔示鞭毛〕

5/8/202331第三十二頁，共四十七頁。破傷風(fēng)梭菌〔示芽胞〕革蘭染色和芽胞染色5/8/202332第三十三頁，共四十七頁。破傷風(fēng)梭菌芽胞染色〔示芽胞〕5/8/202333第三十四頁，共四十七頁。破傷風(fēng)梭菌革蘭染色〔示芽胞〕5/8/202334第三十五頁，共四十七頁。破傷風(fēng)梭菌芽胞電鏡照片〔示芽胞〕5/8/202335第三十六頁，共四十七頁。產(chǎn)氣莢膜梭菌革蘭染色〔示莢膜〕5/8/202336第三十七頁，共四十七頁。5/8/202337第三十八頁，共四十七頁。5/8/202338第三十九頁，共四十七頁。5/8/202339第四十頁，共四十七頁。5/8/202340第四十一頁，共四十七頁?；魜y弧菌〔革蘭染色〕霍亂弧菌電鏡照片5/8/202341第四十二頁，共四十七頁。5/8/202342第四十三頁，共四十七頁。5/8/202343第四十四頁，共四十七頁。5/8/202344第四十五頁，共四十七頁。1、實驗時不遲到、不早退。2、實驗時要保持實驗室內(nèi)的整潔、安靜。3、正確使用顯微鏡，觀察完畢應(yīng)把鏡頭和載玻片上的鏡油擦凈。

4、各實驗小組的實驗用品、由各組保管使用，不得隨意與他組調(diào)換或挪用。如需補發(fā)或增添，應(yīng)說明原因。5、每次實驗后應(yīng)清點實驗器材、用品數(shù)量，如有遺失或損壞應(yīng)按規(guī)定賠償。動物及標(biāo)本要按規(guī)定處理，不可擅自拿走。6、實驗結(jié)束后，各組應(yīng)自覺清理實驗器材，值日生做好全室清潔工作，關(guān)好門窗、水電，經(jīng)指導(dǎo)教師檢查合格前方可離開實驗室。1、要按時完成實驗報告。2、實驗報告要保證準(zhǔn)確、工整、美觀。3、實驗課結(jié)束要將實驗報告交病原生物學(xué)實驗室評分存檔。

1、操作考核。2、大體標(biāo)本考核。3、鏡下標(biāo)本考核。

病原生物學(xué)與醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗是獨立計分的學(xué)科總評分為100分〔平時成績40分+考核成績60分〕1、平時成績40分〔其中平時表現(xiàn)占40%，實驗報告占60%〕2、實驗考核60分〔其中操作考核占25%，標(biāo)本考核占75%〕5/8/202345第四十六頁，共四十七頁。內(nèi)容總結(jié)第一次實驗

細菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)觀察。3/9/2022。革蘭染色法是細菌檢驗中最常用的一種染色法。利用革