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文檔簡介

1實(shí)驗(yàn)一 DNA重組與細(xì)胞轉(zhuǎn)化復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院分子生物學(xué)室謝佐俊

;2一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．CaCl2法制備感受態(tài)細(xì)胞；2．目的基因與載體的連接；

（c-myc＋pBR322；粘端連接）3．重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌并篩選轉(zhuǎn)化體。 （HB101；Ampr）

3二、實(shí)驗(yàn)原理質(zhì)粒載體（pBR322）的構(gòu)建目的基因（c-myc基因片段）的獲取載體與目的基因的連接（粘端連接）感受態(tài)細(xì)胞的制備（CaCl2法）重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞4EcoRI：GAATT ClaI：ATCGATpBR322質(zhì)粒圖譜5pBR322pBR3224.3kb重組體EcoRIClaIEcoRIClaIc-mycDNA片段1.4kbT4DNA連接酶大腸桿菌HB101CaCl2法感受態(tài)細(xì)胞擴(kuò)增、提取、鑒定??????培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)化氨芐青霉素抗性LB板6三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑（詳見實(shí)驗(yàn)講義）7恒溫氣浴搖床8電熱恒溫培養(yǎng)箱9無菌操作超凈工作臺(tái)10臺(tái)式（低溫）離心機(jī)11旋渦振蕩器12移液槍和槍頭13離心管14接種環(huán)、推棒15長玻璃試管、滴管16刻度吸管17四、實(shí)驗(yàn)步驟目的基因c-myc與pBR322質(zhì)粒載體的粘端連接CaCl2法制備感受態(tài)細(xì)胞重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞（詳見實(shí)驗(yàn)講義）18五、注意事項(xiàng)無菌操作高壓消毒器械、培養(yǎng)液等紫外線照射消毒實(shí)驗(yàn)空間酒精棉球擦手、臺(tái)面等實(shí)驗(yàn)

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