保健食品毒理和功能

保健食品毒理和功能保健食品毒理和功能第1頁主要內(nèi)容提要

中國保健食品介紹保健食品安全性毒理學(xué)檢驗與評價保健食品新原料安全性毒理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)保健食品安全性毒理學(xué)評價中存在問題保健食品功效性檢驗與評價保健食品功效評價方法更改情況保健食品毒理和功能第2頁第一個別中國保健食品介紹保健食品毒理和功能第3頁第二個別保健食品安全性毒理學(xué)

檢驗及評價保健食品毒理和功能第4頁主要內(nèi)容

檢驗評價依據(jù)審評基礎(chǔ)要求選擇毒理學(xué)試驗基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)試驗動物選擇樣品預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)毒理學(xué)試驗項目關(guān)鍵點介紹毒理學(xué)安全性評價時應(yīng)考慮問題審評結(jié)論判定保健食品毒理和功能第5頁毒性及功效檢驗評價依據(jù)1996年3月衛(wèi)生部《保健食品管理方法》

保健食品標(biāo)準(zhǔn)、功效評價、審批程序和監(jiān)督管理方法1996年7月GB15193《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》

衛(wèi)生部《保健食品功效學(xué)評價程序和檢驗方法》

僅包含了12項功效檢驗及評價方法年7月衛(wèi)生部《保健食品功效學(xué)評價程序和檢驗方法》

可受理和評價功效調(diào)整到31項年2月衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》

將功效學(xué)、毒理學(xué)、功效成份及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗評價方法三者合一保健食品毒理和功能第6頁審評基礎(chǔ)要求1.配方原（輔）料、用量、理化性質(zhì)2.劑量食用方法及用量3.工藝規(guī)格化產(chǎn)品符合配方、工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)4.批號注意批號是否一致,益生菌、奶制品等保質(zhì)期短除外保健食品毒理和功能第7頁1.毒理學(xué)評價四個階段第一階段：急性毒性試驗經(jīng)口急性毒性試驗：LD50，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗第二階段：遺傳毒性試驗，30天喂養(yǎng)試驗，傳統(tǒng)致畸試驗遺傳毒性試驗：原核細(xì)胞和真核細(xì)胞，體內(nèi)試驗和體外試驗相結(jié)合Ames或基因突變試驗；微核試驗或染色體畸變試驗；精子畸變試驗等第三階段：亞慢性毒性試驗

90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗、代謝試驗第四階段：慢性毒性試驗（包含致癌試驗）選擇毒理學(xué)試驗基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)保健食品毒理和功能第8頁2.無需進(jìn)行毒性試驗保健食品以普通食品和衛(wèi)生部要求藥食同源物質(zhì)為原料生產(chǎn)；

1）以傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)且食用方式與傳統(tǒng)方式相同

2）以水提物配制生產(chǎn)、服用量為原料常規(guī)用量，且資料未提醒含有不安全性用已列入營養(yǎng)強(qiáng)化劑或營養(yǎng)素補(bǔ)充劑名單營養(yǎng)素化合物為原料，如其原料起源、生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量均符合國家相關(guān)要求；選擇毒理學(xué)試驗基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)保健食品毒理和功能第9頁3.需進(jìn)行一階段和三項致突變毒性試驗保健食品屬于普通食品和衛(wèi)生部要求藥食同源物質(zhì)且用水提以外其它常見工藝生產(chǎn)：（1）服用量與常規(guī)用量相同急性毒性、三項致突變試驗（2）服用量大于常規(guī)用量還需加做30天喂養(yǎng)試驗，必要時進(jìn)行傳統(tǒng)致畸試驗和第三階段毒性試驗選擇毒理學(xué)試驗基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)保健食品毒理和功能第10頁選擇毒理學(xué)試驗基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)4.

需進(jìn)行一、二階段毒性試驗保健食品

以普通食品和衛(wèi)生部要求藥食同源物質(zhì)以及允許用作保健食品物質(zhì)以外動植物或動植物提取物、微生物、化學(xué)合成物等為原料生產(chǎn)保健食品，標(biāo)準(zhǔn)上須進(jìn)行第一、二階段毒性試驗，必要時進(jìn)行下一階段毒性試驗。衛(wèi)生部要求允許使用動植物及其提取物或微生物為原料。保健食品毒理和功能第11頁5.需進(jìn)行一至三階段毒性試驗情況：一、二階段試驗結(jié)果與國外產(chǎn)品不一致國外少數(shù)國家或地域食用原料或成份水提取物，大于常規(guī)服用量用水提以外其它常見工藝生產(chǎn)，大于常規(guī)用量選擇毒理學(xué)試驗基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)保健食品毒理和功能第12頁6.需進(jìn)行一至四階段毒性試驗原料和成份

我國外均無食用先例7.敏感指標(biāo)及敏感試驗保健食品

不一樣食用人群和（或）不一樣功效保健食品選擇毒理學(xué)試驗基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)保健食品毒理和功能第13頁對受試保健食品要求

單一已知化學(xué)成份，應(yīng)提供物理和化學(xué)性質(zhì)各種原料配方產(chǎn)品，應(yīng)提供配方配方產(chǎn)品，必要時還應(yīng)提供各組分，功效成份物理和化學(xué)性質(zhì)及其檢測匯報提供原料起源、生產(chǎn)工藝、人可能攝入量。使用說明書等相關(guān)資料受試物應(yīng)符合既定配方和生產(chǎn)工藝規(guī)格化產(chǎn)品保健食品毒理和功能第14頁試驗動物選擇及給樣量1.依據(jù)各項試驗詳細(xì)要求，合理選擇試驗動物

常見大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。2.動物應(yīng)符合《試驗動物管理條例》

清潔級或清潔級以上動物合格證號及動物試驗室合格證號3.灌胃量

大鼠：10ml/kg?BW（若以水為溶劑，推薦20ml/kg?BW）小鼠：20ml/kg?BW保健食品毒理和功能第15頁樣品預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)1.介質(zhì)選擇

應(yīng)選擇適合于受試動物溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無毒、與受試物不發(fā)生反應(yīng)、穩(wěn)定性好。常見介質(zhì)有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基纖維素等。2.液體類

受試物濃縮倍數(shù)應(yīng)符合試驗要求。濃縮方法不應(yīng)破壞其有效成份，常見有60℃～70℃減壓或常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。按工藝要求。保健食品毒理和功能第16頁樣品預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)3.袋泡茶類

處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同推薦用：80℃--90℃常壓用水浸泡30min

水量為受試物10倍，提取2次，2次提取液合并濃縮至所需濃度標(biāo)明該濃縮液與受試物百分比保健食品毒理和功能第17頁樣品預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)4.含乙醇類（1）不需濃縮受試物乙醇濃度<15％直接進(jìn)行試驗乙醇濃度>15％乙醇濃度應(yīng)調(diào)至15％（2）需濃縮受試物乙醇濃度<15％濃縮后調(diào)至原乙醇濃度乙醇濃度>15％濃縮后調(diào)至15％乙醇濃度在進(jìn)行乙醇濃度調(diào)整時必須用原酒基保健食品毒理和功能第18頁樣品預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)5.膨脹系數(shù)較高受試物選擇可溶性介質(zhì)給受試物方法：灌胃其最高濃度最大灌胃量時達(dá)不到人體推薦量100倍，按采取實際到達(dá)倍數(shù)標(biāo)明受試物膨脹系數(shù)保健食品毒理和功能第19頁樣品預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)6.益生菌等微生物類保健食品在進(jìn)行Ames試驗或體外細(xì)胞試驗時需將受試物滅活。需濃縮應(yīng)采取低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度受試物（附方法、技術(shù)參數(shù)）。7.以食品為載體受試物

（1）有營養(yǎng)價值：按設(shè)計量進(jìn)行飼料營養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細(xì)說明。（2）大豆蛋白、乳清蛋白如質(zhì)量、工藝等符合食品標(biāo)準(zhǔn)和安全要求，允許去除。如僅以該原料生產(chǎn)，可申請免做毒理學(xué)試驗。保健食品毒理和功能第20頁毒理學(xué)試驗項目關(guān)鍵點介紹

急性經(jīng)口毒性試驗鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗骨髓細(xì)胞微核試驗哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗小鼠精子畸形試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗

30天喂養(yǎng)試驗保健食品毒理和功能第21頁急性經(jīng)口毒性試驗?zāi)繕?biāo)：測定LD50，毒性分級。了解毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能靶器官，為深入毒性試驗提供劑量和觀察指標(biāo)選擇依據(jù)。原理：急性毒性：經(jīng)口一次性、24h內(nèi)屢次給予，短時間內(nèi)毒性反應(yīng)。致死劑量通常見半數(shù)致死劑量LD50表示。急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同聯(lián)合方式，能夠依據(jù)一定公式計算和判定標(biāo)準(zhǔn)來確定這三種不一樣作用。保健食品毒理和功能第22頁急性經(jīng)口毒性試驗時間周期：普通為3周

3-5天，大、小鼠適應(yīng)期

7-14天，染毒及試驗觀察期 發(fā)生動物死亡時，應(yīng)進(jìn)行大致解剖觀察和評價指標(biāo)：毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)異常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重改變死亡情況：死亡時間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。大致尸檢結(jié)果：假如發(fā)生死亡動物保健食品毒理和功能第23頁急性毒性（LD50）劑量分級表級別大鼠口服LD50，mg/kg相當(dāng)于人致死量mg/kgg/人極毒<1稍嘗0.05劇毒1-50500-40000.5中等毒51-5004000-300005低毒501-500030000-25000050實際無毒5001500000500無毒>15000>5000002500保健食品毒理和功能第24頁急性經(jīng)口毒性試驗試驗結(jié)果判定：1.LD50＜人可能攝入量100倍，放棄；反之繼續(xù)下一步試驗。2.LD50≥10g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動物死亡，可繼續(xù)下一步試驗。保健食品毒理和功能第25頁鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗?zāi)繕?biāo)：檢測受試物誘變性，預(yù)測其遺傳危害和潛在致癌作用可能性。時間周期：普通為2周

第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準(zhǔn)備 第二周，染毒，培養(yǎng)48h，菌落計數(shù)劑量設(shè)計：決定受試物最高劑量原因是對細(xì)菌毒性及其溶解度。最低劑量為0.2ug/皿；最高劑量為5mg/皿，或最大溶解劑量，最大飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O(shè)五個劑量組，組間距不超出5倍。同時設(shè)：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。保健食品毒理和功能第26頁鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗觀察及評價指標(biāo)：各受試物組及三個對照組四種菌株（TA97a，TA98，TA100和TA102）分別在加和不加S9情況下菌落計數(shù)。結(jié)果評價（摻入法）：受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)≥2×未處理對照組數(shù)），并有劑量反應(yīng)關(guān)系或有可重復(fù)陽性反應(yīng)，即可判試驗陽性。保健食品毒理和功能第27頁骨髓細(xì)胞微核試驗?zāi)繕?biāo)：檢測整體動物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率，以評價受試物致突變可能性。原理：微核是在細(xì)胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進(jìn)入子細(xì)胞形成細(xì)胞核時，依然留在細(xì)胞質(zhì)中色單體或染色體無著絲點斷片。末期之后，單獨(dú)形成一個或幾個規(guī)則次核，被包含在細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。保健食品毒理和功能第28頁骨髓細(xì)胞微核試驗時間周期：普通為2周

3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口染毒，30h給受試物法 取胸骨或股骨，搜集骨髓，涂片，染色，鏡檢劑量設(shè)計：最少設(shè)置3個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴(yán)重中毒表現(xiàn)和/或個別動物出現(xiàn)死亡劑量。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒性反應(yīng)。普通取LD501/2、1/4、1/8作為三個劑量。當(dāng)受試物L(fēng)D50≥10g/kg.bw時，最高劑量通常采取10g/kg.bw。同時設(shè)陽性對照組和溶劑對照組。保健食品毒理和功能第29頁骨髓細(xì)胞微核試驗觀察及評價指標(biāo)：每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細(xì)胞，統(tǒng)計含有微核細(xì)胞數(shù)，并計算微核千分率。同時觀察嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞百分比。結(jié)果評價：受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。保健食品毒理和功能第30頁哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗?zāi)繕?biāo)：檢測受試物對整體動物骨髓細(xì)胞染色體畸變致突變性，以評價其致突變可能性。原理：當(dāng)受試物作用于細(xì)胞周期G1期和S期時，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細(xì)胞分裂時紡錘體形成，增加中期分裂相細(xì)胞百分比，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清楚。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。保健食品毒理和功能第31頁哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗時間周期：普通為3周

3-5天適應(yīng)期 小鼠或大鼠經(jīng)口染毒2-4次，每次間隔24h，在末次染毒18-24h進(jìn)行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，搜集骨髓，制片，染色，鏡檢劑量設(shè)計：同骨髓細(xì)胞微核試驗保健食品毒理和功能第32頁哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗觀察及評價指標(biāo)：每只動物分析100個中期相細(xì)胞，每個劑量組不少于1000個。統(tǒng)計染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果評價：受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。保健食品毒理和功能第33頁小鼠精子畸形試驗?zāi)繕?biāo)：檢測整體動物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體內(nèi)生殖細(xì)胞致突變作用。原理：小鼠精子畸形受基因控制，含有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因決定精子形態(tài)。精子畸形主要是指形態(tài)異常，已知精子畸形是決定精子形成基因發(fā)生突變結(jié)果。所以形態(tài)改變提醒相關(guān)基因及其蛋白產(chǎn)物改變。保健食品毒理和功能第34頁小鼠精子畸形試驗時間周期：普通為7周

3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，于首次給樣后35天處死動物 取兩側(cè)附睪，搜集精子，滴片，染色，鏡檢劑量設(shè)計：同骨髓細(xì)胞微核試驗保健食品毒理和功能第35頁小鼠精子畸形試驗觀察及評價指標(biāo)：每只動物檢驗1000個精子，統(tǒng)計精子畸形數(shù)目及類型。結(jié)果評價：受試物組與對照組精子畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。保健食品毒理和功能第36頁小鼠睪丸染色體畸變試驗?zāi)繕?biāo)：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評價受試物對整體哺乳動物睪丸生殖細(xì)胞致突變性。原理：不一樣周期雄性生殖細(xì)胞對化學(xué)物質(zhì)敏感性不一樣，多數(shù)情況下化學(xué)誘變劑誘發(fā)染色體畸變必須經(jīng)過DNA復(fù)制期，故在前細(xì)線期處理。第12～14d采樣，以觀察作用于前細(xì)線期引發(fā)精母細(xì)胞染色體畸變效應(yīng)。保健食品毒理和功能第37頁小鼠睪丸染色體畸變試驗時間周期：普通為7周

3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，與首次給樣后12-14天處死動物取材，（取材前6h，腹腔注射秋水仙素）。取兩側(cè)睪丸，搜集生殖細(xì)胞，滴片，染色，鏡檢劑量設(shè)計：同骨髓細(xì)胞微核試驗保健食品毒理和功能第38頁小鼠睪丸染色體畸變試驗觀察及評價指標(biāo)：每只動物分析100個中期相細(xì)胞，統(tǒng)計染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)改變（包含斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常染色體單價體、性染色體單價體等）。結(jié)果評價：受試物組與對照組斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常染色體單價體、性染色體單價體等差異有統(tǒng)計學(xué)意義，試驗結(jié)果為陽性。保健食品毒理和功能第39頁遺傳毒性試驗組合試驗結(jié)果判定：如三項致突變試驗（Ames試驗，微核或骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗，精子畸形或睪丸染色體畸變試驗）中，體外或體內(nèi)有一項或以上陽性，普通應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。如三項試驗均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步毒性試驗。保健食品毒理和功能第40頁30天喂養(yǎng)試驗?zāi)繕?biāo)：急性毒性試驗基礎(chǔ)上，此試驗可深入了解毒性作用，尤其是觀察對生長發(fā)育影響，并可初步預(yù)計最大觀察到無作用劑量，預(yù)計亞慢性攝入危害性。原理：以不一樣劑量受試物每日經(jīng)口給予各組試驗動物，連續(xù)30天。染毒期間每日親密觀察動物毒性反應(yīng)，染毒結(jié)束后進(jìn)行大致解剖、血生化及病理檢驗，以此觀察重復(fù)喂食不一樣劑量受試物對動物引發(fā)有害作用。保健食品毒理和功能第41頁30天喂養(yǎng)試驗時間周期：在取得了急性毒性數(shù)據(jù)后，普通為2月

3-5天，大鼠適應(yīng)期

30天，染毒及試驗觀察期 再進(jìn)行大致解剖、血液、生化、器官病理檢驗。保健食品毒理和功能第42頁30天喂養(yǎng)試驗劑量設(shè)計：最少設(shè)三個劑量組和一個對照組。高劑量應(yīng)能引發(fā)動物顯著毒效應(yīng)但不造成動物死亡。低劑量應(yīng)不出現(xiàn)任何毒作用，同時在這二劑量之間設(shè)幾個中間劑量組。

對于能取得LD50受試物：最高劑量為10％～25％LD50，最低劑量組最少為人可能攝入量3倍。

對于不能取得LD50受試物：最高劑量為人可能攝入量100倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中最大摻入量。保健食品毒理和功能第43頁30天喂養(yǎng)試驗觀察及評價指標(biāo)：普通情況觀察：每日表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每七天1次體重及2次食物攝入量，計算食物利用率。血液學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測定血紅蛋白、紅和白細(xì)胞總數(shù)及分類，必要時測定血小板或網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)。生化學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、總蛋白、膽固醇和甘油三酯。病理檢驗：大致解剖、臟器稱重、組織病理學(xué)檢驗。保健食品毒理和功能第44頁30天喂養(yǎng)試驗試驗結(jié)果判定：對于只要求進(jìn)行一、二階段試驗者，最大未觀察到有害作用劑量≥人可能攝入量100倍，綜合其它試驗結(jié)果可初步做出安全性評價。最小觀察到有害作用劑量≤人可能攝入量100倍，或觀察到毒性反應(yīng)最小劑量組其受試物在飼料中百分比≤10％，放棄。在中低劑量組中個別指標(biāo)與對照組相比有差異，應(yīng)綜合分析，決定取舍或進(jìn)行下一步毒理試驗。保健食品毒理和功能第45頁其它試驗結(jié)果判斷

傳統(tǒng)致畸試驗：需大于或等于人攝入量100倍。在50倍至100倍之間需進(jìn)行安全性評價，小于50倍需放棄。

90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗：1.僅在國外少數(shù)國家或我國局部地域有食用歷史原料或成份，需大于或等于人攝入量100倍。2.我國外均無食用歷史原料或成份時，需大于或等于人攝入量300倍。在100倍至300倍之間需進(jìn)行慢性毒性試驗，小于100倍需放棄。保健食品毒理和功能第46頁其它試驗結(jié)果判斷

慢性毒性試驗：以LD50或30天喂養(yǎng)試驗最大未觀察到有害作用劑量設(shè)計受試物各劑量組，未見有毒性作用。

致癌試驗陽性判定依據(jù)：腫瘤只發(fā)生在試驗組動物，對照組中無腫瘤發(fā)生。試驗組和對照組均發(fā)生腫瘤，但試驗組發(fā)生率高。試驗組和對照組腫瘤發(fā)生率無顯著差異，但試驗組發(fā)生時間較早。符合以上三項中情況之一，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有統(tǒng)計學(xué)意義，可認(rèn)為致癌試驗陽性。保健食品毒理和功能第47頁安全性評價科學(xué)性和藝術(shù)性安全性評價藝術(shù)性：1.動物試驗結(jié)果外推到人必須考慮動物與人種屬差異；2.安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)、技術(shù)能力相符性；3.安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會和公眾利益之間平衡性。結(jié)論：在對化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行科學(xué)地安全性評價之后，應(yīng)結(jié)合試驗不足，社會經(jīng)濟(jì)情況，大家生活習(xí)慣等原因，對評價結(jié)果作出一個合理分析，為衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制訂提供含有實際指導(dǎo)意義依據(jù)。保健食品毒理和功能第48頁應(yīng)綜合考慮問題1.試驗指標(biāo)統(tǒng)計學(xué)意義和生物學(xué)意義在分析試驗組與對照組指標(biāo)統(tǒng)計學(xué)顯著性時，應(yīng)依據(jù)其有沒有劑量反應(yīng)關(guān)系及與本試驗室歷史性對照值范圍比較標(biāo)準(zhǔn),來綜合考慮指標(biāo)差異有沒有生物學(xué)意義。2.生理作用與毒性作用對試驗中一些指標(biāo)異常改變，在結(jié)果分析時要注意區(qū)分是生理學(xué)表現(xiàn)還是受試物毒性作用。保健食品毒理和功能第49頁應(yīng)綜合考慮問題3.時間-毒性效應(yīng)關(guān)系對由受試物引發(fā)毒性效應(yīng)進(jìn)行分析評價時，要考慮在同一劑量水平下毒性效應(yīng)隨時間改變情況。4.特殊人群和敏感人群對孕婦、乳母或兒童食用保健食品，應(yīng)尤其注意其胚胎毒性或生殖發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性和免疫毒性。保健食品毒理和功能第50頁應(yīng)綜合考慮問題5.人可能攝入量較大保健食品應(yīng)考慮給予受試物量過大時，可能影響營養(yǎng)素攝入量及其生物利用率，從而造成一些毒理學(xué)表現(xiàn)，而非受試物本身毒性作用所致。6.含乙醇保健食品對試驗中出現(xiàn)一些指標(biāo)異常改變，在結(jié)果分析評價時應(yīng)注意區(qū)分是乙醇本身還是其它成份作用。保健食品毒理和功能第51頁應(yīng)綜合考慮問題7.動物年紀(jì)對試驗結(jié)果影響

對試驗中出現(xiàn)一些指標(biāo)異常改變，要考慮是否因動物年紀(jì)選擇不妥所致。8.安全系數(shù)

鑒于動物、人種屬和個體之間生物學(xué)差異，安全系數(shù)通常為100。保健食品毒理和功能第52頁應(yīng)綜合考慮問題9.人體資料

在評價保健食品安全性時，應(yīng)盡可能搜集人群食用受試物后反應(yīng)資料。10.綜合評價

在對保健食品進(jìn)行最終評價時，必須綜合考慮受試物原料起源、理化性質(zhì)、毒性大小、代謝特點、蓄積性、接觸人群范圍、食品中使用范圍、人可能攝入量及保健功效等原因，確保其對人體健康安全性。保健食品毒理和功能第53頁應(yīng)綜合考慮問題11.保健食品安全性重新評價：很早毒性評價可能因為當(dāng)初科學(xué)水平和技術(shù)條件限制，現(xiàn)已不適用需重新評價。12.若受試物摻入飼料最大加入量（10％）或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達(dá)不到最大觀察到有害作用劑量為人可能攝入量要求倍數(shù)時，怎樣綜合其它毒性試驗結(jié)果進(jìn)行安全性評價。保健食品毒理和功能第54頁審評結(jié)論判定1.認(rèn)可毒理學(xué)試驗：試驗設(shè)計合理，操作規(guī)范，試驗結(jié)果能夠證實受試物安全性。2.屬以下幾個情況之一，補(bǔ)充資料后提議同意：（1）檢驗匯報格式不規(guī)范，需要重新出具檢驗匯報毒理學(xué)試驗匯報。（2）數(shù)據(jù)偏離歷史對照較大，需檢驗機(jī)構(gòu)做出解釋。（3）未提供一些試驗數(shù)據(jù)，需要補(bǔ)充提供。保健食品毒理和功能第55頁審評結(jié)論判定3.重做試驗，大會再審，屬以下幾個情況之一：（1）因為試驗操作不規(guī)范，依據(jù)提供檢驗匯報無法評價產(chǎn)品安全性，需要做除30天/90天喂養(yǎng)試驗以外毒理學(xué)試驗；（2）已經(jīng)有數(shù)據(jù)提醒可能存在安全性問題，但難以下結(jié)論，需要重復(fù)試驗。保健食品毒理和功能第56頁（1）毒理學(xué)評價結(jié)果表明產(chǎn)品在推薦劑量下對人體含有一定毒性，存在安全性問題。（2）產(chǎn)品原料、配方存在顯著安全性問題，如配方含有“可用于保健食品原料”名單以外原料，且未進(jìn)行新資源食品安全性毒理學(xué)評價。（3）選擇安全性毒理學(xué)試驗不符合程序要求，未完成對應(yīng)階段毒理學(xué)試驗。4.對產(chǎn)品安全性不予認(rèn)可情況以下（一）：保健食品毒理和功能第57頁（4）毒理、功效、興奮劑與衛(wèi)生學(xué)、穩(wěn)定性試驗樣品批號不一致。（5）未按要求提供安全性毒理學(xué)評價資料。（6）30天/90天喂養(yǎng)試驗劑量設(shè)計不合理或一些指標(biāo)異常，結(jié)果不可信。4.對產(chǎn)品安全性不予認(rèn)可情況以下(二)：保健食品毒理和功能第58頁第三個別保健食品新原料安全性

毒理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)保健食品毒理和功能第59頁

保健食品新原料（以下簡稱新原料）是指不在國家食品藥品監(jiān)督管理局公布可用于保健食品、衛(wèi)生部公布或同意能夠食用以及生產(chǎn)普通食品范圍內(nèi)，擬用于保健食品原料。國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家相關(guān)部門要求不可用于保健食品以及禁止使用物品，不得作為新原料。保健食品新原料定義保健食品毒理和功能第60頁

在已同意保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已同意為新資源食品原料，符合以下情況仍按新原料進(jìn)行管理：未列入國家食品藥品監(jiān)督管理局公布可用于保健食品物品名單；還未列入衛(wèi)生部公布或同意食品新資源或新資源食品名單內(nèi)；衛(wèi)生部已同意為食品新資源或新資源食品，但保健食品注冊申請人與食品新資源或新資源食品生產(chǎn)批件中載明申報單位不一致。保健食品新原料定義保健食品毒理和功能第61頁評價新原料安全性基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)符合國家標(biāo)準(zhǔn)和衛(wèi)生要求，無國家標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該提供行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或自行制訂并在相關(guān)部門立案質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；新原料名稱、物種（基源）、生物學(xué)或生態(tài)學(xué)特征、起源及使用部位應(yīng)確切；加工工藝安全合理，質(zhì)量穩(wěn)定、可控；主要成份（或組成）、化學(xué)結(jié)構(gòu)明確，含量穩(wěn)定；適宜人群范圍和可能攝入量明確，確定依據(jù)充分；保健食品毒理和功能第62頁評價新原料安全性基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)我國外安全性毒理學(xué)文件資料、人體食用情況檢索匯報及流行病學(xué)資料顯示，該新原料無食用中毒或有害作用史；安全性毒理學(xué)試驗結(jié)果顯示，該原料在可能攝入量下對人體不產(chǎn)生急性、慢性或其它潛在健康危害；微生物類新原料必須有食用習(xí)慣和安全食用歷史，培養(yǎng)基、菌種及其代謝產(chǎn)物必須無毒無害。保健食品毒理和功能第63頁新原料安全性毒理學(xué)試驗項目標(biāo)選擇①無食用史需做四階段試驗②局部地域有食用史需做三階段試驗

可只做一、二階段試驗包含

1）推薦食用量未超出人群常規(guī)用量新原料，若依據(jù)相關(guān)文件資料及成份分析，未發(fā)覺有毒或毒性甚微不至對健康組成損害，或者較大數(shù)量人群有長久食用歷史且未發(fā)覺有害作用

2）已經(jīng)有權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)毒理學(xué)安全性評價，且有資料證實所用原料與其一致

如試驗結(jié)果與權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行評價不一致，需進(jìn)入下階段試驗新原料安全性毒理學(xué)試驗要求

保健食品毒理和功能第64頁新原料安全性毒理學(xué)試驗項目標(biāo)選擇③多個國家或我國多數(shù)地域廣泛食用

1）推薦食用量未超出人群常規(guī)用量：先進(jìn)行第一、二階段毒性試驗，依據(jù)試驗結(jié)果決定是否進(jìn)行下一階段毒理學(xué)試驗

2）推薦食用量超出人群常規(guī)用量：進(jìn)行第一、二、三階段毒性試驗，依據(jù)試驗結(jié)果決定是否進(jìn)行第四階段毒性試驗。

新原料安全性毒理學(xué)試驗要求保健食品毒理和功能第65頁新原料安全性毒理學(xué)試驗項目標(biāo)選擇④依據(jù)新原料特征、作用機(jī)制、已經(jīng)有試驗資料及產(chǎn)品適宜人群等信息，有針對性地選擇敏感試驗、敏感動物、敏感指標(biāo)，以全方面了解新原料毒性。

新原料安全性毒理學(xué)試驗要求保健食品毒理和功能第66頁新原料安全性毒理學(xué)試驗要求新原料安全性毒理學(xué)試驗項目標(biāo)選擇⑤微生物類新原料除按上述要求進(jìn)行安全性毒理學(xué)試驗外，還應(yīng)進(jìn)行以下試驗：

1）菌種毒力試驗；

2）耐藥性試驗；

3）有可能產(chǎn)生抗菌素、真菌毒素或其它活性物質(zhì)菌種，應(yīng)進(jìn)行相關(guān)抗菌素、真菌毒素或其它活性物質(zhì)檢測；

4）菌種代謝產(chǎn)物分析及其不產(chǎn)生有毒有害作用試驗。

保健食品毒理和功能第67頁新原料安全性毒理學(xué)試驗要求毒性試驗劑量設(shè)計1、高劑量組應(yīng)出現(xiàn)毒性作用但不引發(fā)動物死亡，低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒性作用，并求出未觀察到有害作用劑量（NOAEL）。2、若依據(jù)已掌握資料（包含第一、二階段毒性試驗及預(yù)試驗結(jié)果等）判定新原料毒性較小，或人體推薦量較大，則試驗最高劑量應(yīng)為可給予最大劑量（即：飼料中最大摻入量或最大灌胃濃度下一次最大灌胃量）。保健食品毒理和功能第68頁新原料安全性毒理學(xué)試驗要求毒理學(xué)試驗結(jié)果新原料未觀察到有害作用劑量（NOAEL）應(yīng)大于或等于人群可能攝入量100倍；假如人體推薦攝入量較大，試驗中可給予最大劑量小于人群可能攝入量100倍，則在可給予最大劑量下不應(yīng)觀察到有害作用。保健食品毒理和功能第69頁第四個別保健食品安全性毒理學(xué)

評價中存在問題保健食品毒理和功能第70頁存在問題

鑒于制訂此程序歷史背景與當(dāng)前情況有所不一樣，所以，對保健食品安全性評價時，出現(xiàn)了選擇毒理試驗項目、劑量、樣品前處理等問題，現(xiàn)就上述問題一并提出供討論。保健食品毒理和功能第71頁存在問題

充分了解受試物1.要求提供規(guī)格化產(chǎn)品，最少是中試產(chǎn)品。符合既定配方，生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2.仔細(xì)閱讀配方以了解受試物物理、化學(xué)性質(zhì)（包含化學(xué)結(jié)構(gòu)、純度、穩(wěn)定性等）。3.了解生產(chǎn)工藝。4.按產(chǎn)品說明書最大人體推薦量進(jìn)行劑量設(shè)計。保健食品毒理和功能第72頁存在問題

動物年紀(jì)主要指30天和90天喂養(yǎng)試驗，“程序”中要求用離乳大鼠，而保健食品應(yīng)視詳細(xì)情況而異。最經(jīng)典是人參、鹿茸、減肥產(chǎn)品，并非受試物本身有毒影響了動物生長發(fā)育，而是因為這類產(chǎn)品服用對象是成人，所用動物是離乳大鼠。保健食品毒理和功能第73頁存在問題試驗項目標(biāo)選擇配方中含有僅限局部地域人群食用而又不在“51號”名單上原料，只對產(chǎn)品進(jìn)行了兩階段毒理試驗，而未對原料本身按要求進(jìn)行毒理學(xué)評價，有進(jìn)行了評價但給予動物受試物方式與實際食用方式不一樣，如袋泡茶摻在飼料中給予動物。含“51號”文附錄二名單上原料產(chǎn)品只做了LD50和三項致空變試驗。保健食品毒理和功能第74頁存在問題試驗項目標(biāo)選擇藥食同源產(chǎn)品經(jīng)有機(jī)溶劑提取未做毒理試驗，或只做LD50和微核試驗。從食品中提取某一成份粗提物只做了LD50和三項致突變試驗，如大豆異黃酮。配方中僅有單一成份，如人參、西洋參、蜂王漿無須進(jìn)行全部二階段毒理試驗。保健食品毒理和功能第75頁存在問題樣品前處理（一）液體類（二）酒類（三）固體類（四）菌類（五）以一些食品為載體保健食品：如富含微量元素雞蛋、南瓜粉等保健食品毒理和功能第76頁存在問題LD50中存在問題

1.經(jīng)口LD50還用對照組。

2.不寫禁食時間。

3.做到了21.5g/KgBW,結(jié)論是﹥10g/KgBW。

4.將受試物摻入飼料吃24小時。保健食品毒理和功能第77頁存在問題Ames試驗

1.以油為載體產(chǎn)品直接倒入平皿

2.工藝是低溫提取或低溫冷凍干燥產(chǎn)品用8磅15分鐘高壓滅菌。

3.有溶劑對照而無自發(fā)回變對照。

4.菌落回變數(shù)隨劑量增加而增多已超出正常值而不是二倍而出具了合格匯報保健食品毒理和功能第78頁存在問題Ames試驗

5.有抑菌作用產(chǎn)品不進(jìn)行預(yù)試驗找出抑菌劑量而出具了5mg/皿菌落回變數(shù)正常匯報。

6.產(chǎn)品中顯著含有組氨酸，而不進(jìn)行除組氨酸前處理。

7.應(yīng)該用XAD-2樹脂對樣品進(jìn)行前處理

8.沒有了解5mg/皿含義：系指有效成份，如一些產(chǎn)品含有80%糖，沒進(jìn)行樣品前處理或向送樣方提出要求，直接用產(chǎn)品做5mg/皿，實際上是1mg/皿。保健食品毒理和功能第79頁存在問題

微核、精子畸形以及睪丸染色體畸變試驗

1.微核試驗：幾份匯報中都有陽性對照數(shù)據(jù)，而這幾份原始統(tǒng)計中皆無陽性對照。

2.精子畸形試驗：陽性對照組精子畸形率﹤3.4%，即判斷陰性對照組與陽性對照組相比差異有顯著性P﹤0.05。（正?；温蕿?.8-3.4%）。

3.睪丸染色體畸變試驗：陽性對照連續(xù)應(yīng)用一年以上。保健食品毒理和功能第80頁存在問題30天或90天喂養(yǎng)試驗1.雌性鼠體重比雄性鼠還重或一樣重

148.33±8.38172.28±10.93194.82±10.92215.46±14.68231.50±15.15189.83±14.66239.52±17.56288.33±16.92324.14±19.80357.24±22.7267891014.03±2.0330.68±3.2247.61±5.3579.52±6.70118.53±7.1214.44±2.0730.62±4.5649.02±6.1986.86±8.98137.72±11.6912345雄（n=30)雌（n=30)雄（n=30)雌（n=30)體重(g)周齡（周）體重(g)周齡（周）上表為SD大鼠正常體重保健食品毒理和功能第81頁存在問題30天或90天喂養(yǎng)試驗2.食物利用率雌雄分不開，或為將雌、雄性大鼠食物利用率拉開差距，雌性和雄性大鼠進(jìn)食量基礎(chǔ)一致。3.大鼠進(jìn)食量越來越高，雌性大鼠700多克、4.雄性大鼠600多克，而體重與食物利用率和以前差不多。5.劑量設(shè)計：相當(dāng)于推薦量（以g/KgBW計）6.56、26和105倍，這是先設(shè)計再做試驗，還是先做試驗再設(shè)計？6.受試物摻入飼料量高達(dá)18%，袋泡茶摻入飼料給予動物。

保健食品毒理和功能第82頁存在問題30天或90天喂養(yǎng)試驗7.動物攝入飼料量在30天喂養(yǎng)試驗以體重10%計，90天喂養(yǎng)試驗以體重8%計，這是經(jīng)過大量資料統(tǒng)計得出，但將受試物以10-20%濃度飲水給予動物，又不計飲水量，與匯報劑量設(shè)計是否基礎(chǔ)一致？有按每100gBw給10ml含有受試物水，飲畢再給飲用水？8.有試驗動物體重增加遲緩，解釋是受試物不好吃。9.生化指標(biāo)：不做TG、AST；TC高達(dá)2.8mmol/L；BUN12.9mmol/L。保健食品毒理和功能第83頁存在問題30天或90天喂養(yǎng)試驗10.以大鼠為試驗動物測尿酸，大鼠代謝與人不完全一樣，可將尿酸轉(zhuǎn)化為尿囊素排出。11.病理匯報：心肝脾無毒性損傷，兩個產(chǎn)品，兩份匯報來自同一檢測單位；A4紙寫了一大篇，詳細(xì)描述了病理組織結(jié)構(gòu)，沒有一點異常，四個產(chǎn)品、四份匯報起源同一檢驗單位；寫一小段也比較詳細(xì)描述了病理組織結(jié)構(gòu)，亦無任何異常三個產(chǎn)品、三份匯報亦起源于同一檢驗單位。保健食品毒理和功能第84頁存在問題

傳統(tǒng)致畸試驗其劑量設(shè)計比30天喂養(yǎng)還高，程序已明確以亞急性試驗最大無作用劑量為高劑量，目標(biāo)是：找強(qiáng)致畸物，即含有致畸作用，但無母體毒性出現(xiàn)，這種受試物致畸作用往往較強(qiáng)保健食品毒理和功能第85頁存在問題

其它經(jīng)典問題推薦量較大產(chǎn)品，同一檢測單位，30天喂養(yǎng)試驗進(jìn)行了樣品前處理到達(dá)足夠倍數(shù)，但LD50、三項致突變試驗未進(jìn)行樣品前處理，相當(dāng)于人推薦量倍數(shù)很低；樣品進(jìn)行了前處理但折合到樣品量不一致；樣品進(jìn)行了前處理，但匯報中寫取一定量樣品用盤旋蒸發(fā)儀濃縮至所需濃度，劑量設(shè)計寫是25、50、100ml/KgBw；有匯報要從字里行間為依據(jù)替檢測單位計算出劑量設(shè)計是否正確；Ames試驗劑量以每皿百分之多少計。保健食品毒理和功能第86頁第五個別保健食品功效性檢驗及評價保健食品毒理和功能第87頁主要內(nèi)容

基礎(chǔ)要求（普通程序）動物功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求人體功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求各功效學(xué)試驗主要指標(biāo)評審要求保健食品毒理和功能第88頁保健食品功效評價基礎(chǔ)要求1.對受試樣品要求提供樣品物理、化學(xué)性質(zhì)相關(guān)資料必須是規(guī)格化定型產(chǎn)品提供衛(wèi)生學(xué)和毒理學(xué)檢驗匯報，樣品必須同一批次提供功效成份和特征成份或營養(yǎng)成份名稱及含量2.對受試樣品載體要求以乙醇和糖為載體樣品必須提供乙醇和糖含量保健食品毒理和功能第89頁1.受試物所提供受試物為組成成份、百分比及純度與實際產(chǎn)品相同樣品；必須在保質(zhì)期內(nèi)。2.受試物預(yù)處理（詳細(xì)方法同安全性毒理學(xué)評價）處理方法需在試驗匯報中詳細(xì)描述必須說明受試物濃縮或稀釋倍數(shù)、濃度，據(jù)此計算出給予劑量動物功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求保健食品毒理和功能第90頁

3.試驗動物、受試物給予方式及時間（1）試驗動物：性別單一性別年紀(jì)依試驗要求進(jìn)行選擇數(shù)量大鼠每組8-12只小鼠每組10-15只其余要求同安全性毒理學(xué)評價要求動物功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求保健食品毒理和功能第91頁（2）受試物給予方式：必須經(jīng)口給予，首選灌胃；若選擇飲水或摻入飼料，最高劑量不超出10％；提供每日每劑量組平均飲水量、食物攝入量及周食物利用率（3）給樣時間：依據(jù)詳細(xì)功效主要指標(biāo)而定，7天-120天，普通為30天。動物功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求保健食品毒理和功能第92頁

4.劑量設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)（1）依據(jù)產(chǎn)品說明書注明食用方法及用量，確定功效學(xué)試驗劑量設(shè)計是否合理。（2）進(jìn)行動物試驗時最少設(shè)三個劑量組，一個陰性對照組，必要時設(shè)陽性對照組或空白對照組。以大鼠為試驗動物必須有相當(dāng)于人體推薦量（折算為每千克體重）5倍劑量組。以小鼠為試驗動物必須有相當(dāng)于人體推薦量（折算為每千克體重）10倍劑量組。最高劑量組不超出30倍，還必須在毒理學(xué)評價確定安全劑量范圍內(nèi)。當(dāng)載體或輔料本身可能含有與受試物相同功效時，應(yīng)設(shè)載體對照。動物功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求保健食品毒理和功能第93頁人體功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求1.觀察對象選擇

（1）合理選擇受試者按照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范（年）》要求試驗對象納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，并同時考慮試食設(shè)計要求、受試樣品性質(zhì)等原因。（2）人數(shù)試食組和對照組有效例數(shù)不少于50人，且試驗脫離率普通不得超出10%。試驗匯報中必須注明脫離率，不然應(yīng)給予補(bǔ)充說明。（3）均衡性試驗組間年紀(jì)、性別、社會情況組成、身體情況以及試驗開始時各項功效主要指標(biāo)均衡可比。保健食品毒理和功能第94頁人體功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求2.倫理學(xué)審查關(guān)鍵點（1）確保受試對象食用安全。必須在衛(wèi)生學(xué)試驗、動物毒理學(xué)安全性試驗及興奮劑檢測（僅限改進(jìn)生長發(fā)育、減肥功效)完成之后確定產(chǎn)品是安全，符合相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求情況下再進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)上還應(yīng)在動物功效學(xué)試驗證實其有效前提下進(jìn)行。注意：匯報中應(yīng)注明試驗開始日期和匯報日期。開始時間應(yīng)晚于其它試驗匯報時間。假如試驗在不一樣單位進(jìn)行，必須提供同批號受試樣品。人體試驗必須得到檢驗單位倫理學(xué)審查委員會同意方能進(jìn)行，送審資料必須有審查委員簽字。保健食品毒理和功能第95頁人體功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求（2）受試者在試驗開始前應(yīng)進(jìn)行常規(guī)體檢主觀感覺生理指標(biāo)，癥狀和體征。常規(guī)血液學(xué)指標(biāo)生化指標(biāo)功效性指標(biāo)，即與保健作用相關(guān)指標(biāo)，如抗氧化、減肥等方面指標(biāo)。兒童普通不要求測心電圖、胸透、腹部B超及肝、腎功效項改進(jìn)生長發(fā)育、緩解視疲勞、輔助改進(jìn)記憶功效不要求便常規(guī)，其它人體試驗便常規(guī)為必做項目。保健食品毒理和功能第96頁人體功效學(xué)試驗基礎(chǔ)要求（3）匯報中需提供必要體檢常規(guī)項目資料及詳細(xì)數(shù)據(jù)。（4）對于選擇受試人群需要長久服藥試驗，受試者必須在服藥基礎(chǔ)上進(jìn)行試食試驗。（5）如需與醫(yī)院共同完成試驗，必須選擇三級甲等醫(yī)院，匯報中應(yīng)同時加蓋兩單位公章，同時需提供三級甲等醫(yī)院等級證實。（6）改進(jìn)生長發(fā)育和減肥功效產(chǎn)品在人體功效試驗進(jìn)行前需提供興奮劑檢測匯報。保健食品毒理和功能第97頁各功效試驗審評關(guān)鍵點（一）只要求動物試驗項目有：1.增強(qiáng)免疫力功效檢驗方法主要指標(biāo)：細(xì)胞免疫功效體液免疫功效單核－巨噬細(xì)胞功效

NK細(xì)胞活性測定判定：四項指標(biāo)中任兩項結(jié)果陽性。注意事項：不認(rèn)可增強(qiáng)單項免疫力功效。保健食品毒理和功能第98頁各功效試驗審評關(guān)鍵點2.改進(jìn)睡眠功效檢驗方法主要指標(biāo)：戊巴比妥納睡眠時間試驗巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠試驗判定：3項試驗中任2項陽性，且直接睡眠作用。注意事項：對動物進(jìn)行直接睡眠試驗時，也要一樣注意進(jìn)行30天灌胃。保健食品毒理和功能第99頁各功效試驗審評關(guān)鍵點3.緩解體力疲勞檢驗方法主要指標(biāo)：血乳酸血清尿素肝糖原/肌糖原動物負(fù)重游泳試驗判定：負(fù)重游泳試驗結(jié)果陽性，血乳酸曲線下面積、血清尿素、肝糖/肌糖原3項生化指標(biāo)中任2項指標(biāo)陽性。注意事項：（1）對同批受試樣品進(jìn)行違禁藥品檢測。（2）在負(fù)重游泳試驗時，酒類樣品測試當(dāng)日能夠不灌胃。保健食品毒理和功能第100頁各功效試驗審評關(guān)鍵點4.提升缺氧耐受力功效檢驗方法主要指標(biāo)：常壓耐缺氧試驗亞硝酸鈉中毒存活試驗急性腦缺血性缺氧試驗判定：三項試驗中任二項試驗結(jié)果陽性。注意事項：每批試驗動物體重盡可能保持一致。保健食品毒理和功能第101頁各功效試驗審評關(guān)鍵點5.對輻射危害有輔助保護(hù)功效檢驗方法主要指標(biāo)：外周血白細(xì)胞計數(shù)骨髓細(xì)胞DNA含量或骨髓有核細(xì)胞數(shù)小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗血/組織中SOD活性試驗血清溶血素含量試驗判定：以上5項試驗中任3選項進(jìn)行試驗，3項試驗中任何2項試驗結(jié)果陽性。注意事項：選取小鼠，受試樣品于照射前給予14～30天，照射后依然給予受試物，必要時可延至45天。保健食品毒理和功能第102頁各功效試驗審評關(guān)鍵點6.增加骨密度功效檢驗方法依據(jù)受試樣品作用原理不一樣，分為方案一（補(bǔ)鈣為主受試物）和方案二（不含鈣或不以補(bǔ)鈣為主受試物）兩種。主要指標(biāo)：體重骨鈣含量骨密度判定：（方案一）骨鈣含量/骨密度顯著高于低鈣對照組且不低于對應(yīng)劑量碳酸鈣對照組，鈣吸收率不低于碳酸鈣對照組。保健食品毒理和功能第103頁各功效試驗審評關(guān)鍵點

（方案二）①不含鈣產(chǎn)品：骨鈣含量/骨密度較模型對照組顯著增加，其它指標(biāo)（體重除外）不顯著低于卵巢切除＋溶劑組。②不以補(bǔ)鈣為主（可少許含鈣）產(chǎn)品：骨鈣含量/骨密度較模型對照組顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且不低于對應(yīng)劑量碳酸鈣對照組，其它指標(biāo)（體重除外）不顯著低于卵巢切除＋溶劑組。注意事項：（1）使用未同意用于食品鈣化合物，除必做主要指標(biāo)外，還必須進(jìn)行鈣吸收率測定；使用屬營養(yǎng)強(qiáng)化劑范圍內(nèi)鈣源及來自普通食品鈣源能夠不進(jìn)行鈣吸收率試驗。（2）必須使用單光子骨礦密度儀或雙能X線骨密度儀或其它相關(guān)儀器測量股骨中點及股骨遠(yuǎn)心端單位面積骨礦含量。保健食品毒理和功能第104頁各功效試驗審評關(guān)鍵點7.對化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用檢驗方法依據(jù)樣品用途進(jìn)行選擇，方案一（四氯化碳肝損傷模型）和方案二（酒精肝損傷模型）方案一主要指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶+谷草轉(zhuǎn)氨酶+肝組織病理學(xué)檢驗判定：模型成立前提下，ALT或AST任一項指標(biāo)陽性，病理結(jié)果陽性。方案二主要指標(biāo)：丙二醛+還原型谷胱甘肽+甘油三酯+肝組織病理學(xué)檢驗判定：滿足以下任一條件，可判定該受試物含有對酒精性肝損傷有輔助性保護(hù)作用①肝臟MDA、GSH、TG三項指標(biāo)結(jié)果陽性；②肝臟MDA、GSH、TG三指標(biāo)中任2項指標(biāo)陽性，且肝臟病理結(jié)果陽性。注意事項：匯報中需提供列表詳細(xì)描述肝臟病理情況。保健食品毒理和功能第105頁各功效試驗審評關(guān)鍵點（二）只要求人體試驗項目有：1.緩解視疲勞功效試驗受試對象：為兒童、青少年或成人，長久用眼，視力易疲勞者。排除患有眼部疾病者、短期內(nèi)服用與受試物功效相關(guān)物品者或長久服用其它相關(guān)治療視力藥品或使用其它治療方法者。要求：考慮年紀(jì)、性別等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。保健食品毒理和功能第106頁各功效試驗審評關(guān)鍵點2.祛痤瘡功效試驗受試對象：選擇臨床痤瘡I－III度自愿健康受試者，排除因病理性原因及妊娠及哺乳期婦女。要求：盡可能考慮年紀(jì)、性別、病程等原因，進(jìn)行均衡性檢驗受試者在試驗期間停頓使用其它口服及外用相關(guān)養(yǎng)顏祛痤瘡用具。保健食品毒理和功能第107頁各功效試驗審評關(guān)鍵點3.祛黃褐斑功效試驗受試對象：選擇無顯著自覺癥狀，無顯著內(nèi)分泌疾病，并排除其它疾病引發(fā)色素從容健康受試者。要求：盡可能考慮戶外活動、年紀(jì)、性別等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。受試者在試驗期間停頓使用其它口服及外用相關(guān)養(yǎng)顏祛斑用具。本身前后對照，不產(chǎn)生新黃褐斑。保健食品毒理和功能第108頁各功效試驗審評關(guān)鍵點4.改進(jìn)皮膚水份功效試驗受試對象：受試者年紀(jì)為30～50歲，皮膚水分≦12。要求：盡可能考慮年紀(jì)等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。在試驗期間不得服用其它保持皮膚水分物品及影響結(jié)果判定化裝品。測定前額眉間皮膚水份。保健食品毒理和功能第109頁各功效試驗審評關(guān)鍵點5.改進(jìn)皮膚油份功效試驗受試對象：受試者年紀(jì)為30～50歲，皮膚油份≦10或皮膚油份≥27。要求：考慮年紀(jì)等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。受試者在試驗期間不得服用其它保持保持油份物品及影響結(jié)果判定化裝品。測定前額眉間皮膚油份。保健食品毒理和功能第110頁各功效試驗審評關(guān)鍵點（三）動物試驗和人體試驗都要求項目有：1.輔助降血脂功效檢驗方法動物試驗主要指標(biāo)：血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇判定：任兩項指標(biāo)成立，輔助降血脂功效成立。注意事項：（1）保留降低甘油三酯和血清總膽固醇單項功效。（2）試驗開始前，所選動物血清總膽固醇一定要均衡，喂飼高脂飼料后，總膽固醇與甘油三酯一定都要陽性。人體試驗受試對象：單純血脂異常人群，最好為非住院高血脂癥患者。要求：（1）在試驗分組時，盡可能考慮如年紀(jì)、性別、飲食等原因，進(jìn)行均衡性檢驗（2）受試期間受試者保持平日生活和飲食習(xí)慣，空腹取血測定各項主要指標(biāo)。保健食品毒理和功能第111頁各功效試驗審評關(guān)鍵點2.輔助降血糖功效檢驗方法動物試驗主要指標(biāo)：空腹血糖、糖耐量判定：在模型成立前提下，兩項指標(biāo)中一項陽性，且對正常動物空腹血糖無影響。注意事項：在糖耐量試驗中，不但要計算血糖值，更要對血糖曲線下面積進(jìn)行計算。人體試驗受試對象：選擇經(jīng)飲食控制或口服降糖藥治療后病情較穩(wěn)定，不需要更換藥品品種及劑量，僅服用維持量成年Ⅱ型糖尿病病人。要求：（1）在試驗分組時，盡可能考慮如病程、服藥種類等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。（2）試食間堅持飲食控制。保健食品毒理和功能第112頁各功效試驗審評關(guān)鍵點3.抗氧化功效檢驗方法動物試驗主要指標(biāo)：過氧化脂質(zhì)含量（MDA等）抗氧化酶活性（SOD、GSH-Px）判定：過氧化脂質(zhì)含量中任一指標(biāo)和抗氧化酶活性中任一指標(biāo)同為陽性。注意事項：選取12月齡以上老齡大鼠或8～12月齡老齡小鼠，也可用成年小鼠造模。人體試驗受試對象：選則年紀(jì)在45－65歲身體健康者要求：（1）盡可能考慮如年紀(jì)、性別、飲食等原因。（2）與動物試驗不一樣，過氧化質(zhì)含量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶三項試驗中任一項試驗結(jié)果陽性，可判定受試物含有抗氧化功效。保健食品毒理和功能第113頁各功效試驗審評關(guān)鍵點4.輔助改進(jìn)記憶功效檢驗方法動物試驗主要試驗：跳臺試驗避暗試驗穿梭箱試驗水迷宮試驗判定：4項動物試驗中任2項陽性,重復(fù)試驗結(jié)果一致（所重復(fù)同一項試驗兩次結(jié)果均為陽性）。注意事項：（1）用于改進(jìn)兒童記憶產(chǎn)品須用斷乳鼠；用于改進(jìn)老年人記憶產(chǎn)品必須采取成年鼠。（2）試驗動物不能夠重復(fù)使用，重復(fù)試驗時必須采取另外一批動物。保健食品毒理和功能第114頁各功效試驗審評關(guān)鍵點4.輔助改進(jìn)記憶功效檢驗方法人體試驗試驗設(shè)計：對照、雙盲、隨機(jī)受試對象：從比較集中、各方面影響原因大致相同群體中挑選受試者，比如學(xué)校、部隊。文化程度基礎(chǔ)一致，且未接收過類似測試。要求：（1）分組時考慮如年紀(jì)、性別、文化水平、工作性質(zhì)等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。（2）屬同一年紀(jì)組，如不在同一年紀(jì)組，則應(yīng)對量表分進(jìn)行校正。（3）施測次序是先聽覺測試后視覺測試。保健食品毒理和功能第115頁各功效試驗審評關(guān)鍵點5.促進(jìn)排鉛功效檢驗方法動物試驗：預(yù)防性高鉛動物模型和治療性高鉛動物模型選其一主要指標(biāo)：血鉛骨鉛肝組織鉛判定：骨鉛或肝組織鉛有一項陽性。注意事項：設(shè)陽性對照時，推薦使用二丁基巰二酸或Na2CaEDTA。人體試驗受試對象：選擇血鉛含量較高自愿受試者，兒童血鉛100μg/L以上，成人血鉛200μg/L以上。要求：盡可能考慮如鉛接觸史、年紀(jì)、性別等原因，進(jìn)行均衡檢驗。保健食品毒理和功能第116頁各功效試驗審評關(guān)鍵點6.清咽功效檢驗方法動物試驗：大鼠棉球植入試驗或大鼠足趾腫脹試驗任選其一主要指標(biāo)：肉芽腫凈量（棉球植入試驗）致炎劑刺激前后足跖厚度差異（足趾腫脹試驗）判定：肉芽腫凈量或致炎劑刺激前后足跖厚度差異陽性。注意事項：動物攝食量降低和體重減輕，亦可降低肉芽重量，故應(yīng)以mg（肉芽腫）/100g（體重）表示。人體試驗受試對象：慢性咽炎人群，咽炎急性發(fā)作期及病變轉(zhuǎn)移至咽部人應(yīng)排除。要求：盡可能考慮如病程、年紀(jì)、性別等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。保健食品毒理和功能第117頁各功效試驗審評關(guān)鍵點7.輔助降血壓功效檢驗方法動物試驗主要指標(biāo)：血壓、心率判定：試驗動物血壓顯著低于模型對照組，差異含有顯著性，且對試驗組動物心率和正常動物血壓及心率無影響。注意事項：首選自發(fā)高血壓大鼠，雌雄能夠兼用。其次為腎血管型高血壓大鼠。人體試驗受試對象：觀察受試者為原發(fā)性高血壓患者，繼發(fā)性高血壓患者應(yīng)排除。要求：（1）受試者在試食觀察期間不該變原有抗高血壓藥品治療方案。（2）可能考慮如病程、病情、服用藥類、年紀(jì)、性別等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。保健食品毒理和功能第118頁各功效試驗審評關(guān)鍵點8.促進(jìn)泌乳功效檢驗方法動物試驗：選超負(fù)荷哺乳或乳缺模型任一個主要指標(biāo)：母鼠體重仔鼠體重判定：鼠體重顯著增加，差異含有顯著性。注意事項：（1）選取3日內(nèi)產(chǎn)仔第二胎母鼠及其仔鼠，每窩仔鼠數(shù)目應(yīng)相同。（2）推薦使用飲水或加入飼料方式給予受試樣品。（3）試驗結(jié)束期限為仔鼠斷乳（出生21天左右）。人體試驗受試對象：乳母年紀(jì)<35歲，乳量不足，嬰兒吃不飽，母子身體均健康志愿受試者。因病理性原因造成缺乳受試者應(yīng)該排除。要求：盡可能考慮如乳母年紀(jì)、嬰兒出生天數(shù)、飲食情況、家庭經(jīng)濟(jì)情況等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。保健食品毒理和功能第119頁各功效試驗審評關(guān)鍵點9.減肥功效檢驗方法動物試驗主要指標(biāo)：體重、攝食量、體內(nèi)脂肪重量、脂/體比判定：（體重和體內(nèi)脂肪重量）或（體重和脂/體比）陽性，攝食量不顯著低于模型對照組。注意事項：（1）選取雄性大鼠。（2）該試驗經(jīng)常存在著毒理學(xué)與功效學(xué)食物利用率不一致現(xiàn)象。毒理學(xué)上動物食物利用率在把握上能夠適當(dāng)放寬。動物起始體重也能夠適當(dāng)放寬。（3）必須對同批受試樣品進(jìn)行違禁藥品檢測，引發(fā)腹瀉或抑制食欲受試樣品不能作為減肥功效食品。（4）不替換主食減肥功效食品，動物試驗和人體試驗必做。替換主食減肥功效食品，能夠不做動物試驗，僅進(jìn)行人體試食試驗。保健食品毒理和功能第120頁各功效試驗審評關(guān)鍵點9.減肥功效檢驗方法人體試驗試驗設(shè)計：不替換主食減肥功效試驗采取本身對照及組間對照。替換主食減肥功效試驗只設(shè)單一試食組。受試對象：單純性肥胖人群，排除病理性肥胖人群。要求：有違禁藥品檢測匯報、規(guī)范膳食、運(yùn)動調(diào)查及評價方法。①在匯報中提供完整膳食分析（于試驗開始前、結(jié)束前進(jìn)行三天問詢法膳食調(diào)查）。②匯報中應(yīng)有對運(yùn)動情況描述。運(yùn)動耐力測試方法為功率自行車試驗，不認(rèn)可其它試驗方法。③生化主要指標(biāo)增做血尿酸、尿酮體主要指標(biāo)，④體內(nèi)脂肪總量和脂肪占體重百分率，用水下稱重法或電阻抗法。皮下脂肪厚度用B超測定法或皮卡鉗法。⑤同時匯報中還要求有對其它不良發(fā)應(yīng)觀察描述。保健食品毒理和功能第121頁各功效試驗審評關(guān)鍵點10.改進(jìn)生長發(fā)育功效檢驗方法動物試驗主要指標(biāo)：體重、身長、食物利用率判定：（1）體重、身長增加顯著高于對照組，差異含有顯著性，（2）食物利用率不顯著低于對照組。注意事項：（1）選取斷乳大鼠。（2）假如食物利用率顯著低于對照組，則該樣品含有不利于動物生長發(fā)育成份，則不具備改進(jìn)生長發(fā)育功效。保健食品毒理和功能第122頁各功效試驗審評關(guān)鍵點10.改進(jìn)生長發(fā)育功效檢驗方法人體試驗受試對象：選擇無器質(zhì)性疾病，身高或體重低于同年紀(jì)組平均水平1個標(biāo)準(zhǔn)差范圍內(nèi)6-10歲兒童。要求：（1）提供興奮劑檢測匯報（2）分組時考慮胸圍、上臂圍、體內(nèi)脂肪含量以及年紀(jì)運(yùn)動和家庭經(jīng)濟(jì)水平等，進(jìn)行組間均衡性檢驗。（3）受試物給予時間：不少于3個月，必要時延長至6個月。保健食品毒理和功能第123頁各功效試驗審評關(guān)鍵點11.改進(jìn)營養(yǎng)性貧血功效檢驗方法動物試驗主要指標(biāo)：體重血紅蛋白紅細(xì)胞內(nèi)游離原卟啉判定：血紅蛋白和紅細(xì)胞內(nèi)游離原卟啉2項主要指標(biāo)陽性注意事項：（1）本項試驗關(guān)鍵在于貧血模型建立。（2）低鐵飼料含量最好控制在9mg/kg以下。（3）動物飲用水應(yīng)為去離子水或雙蒸水。保健食品毒理和功能第124頁各功效試驗審評關(guān)鍵點11.改進(jìn)營養(yǎng)性貧血功效檢驗方法人體試驗試驗設(shè)計：采取本身和組間兩種對照設(shè)計。受試對象：為小細(xì)胞低色素貧血，且有明確缺鐵原因和臨床表現(xiàn)成人和兒童。排除因病理性原因造成貧血及嚴(yán)重貧血患者。要求：（1）分組時考慮年紀(jì)、性別、經(jīng)濟(jì)情況等原因，進(jìn)行均衡性檢驗。（2）于試驗開始前、結(jié)束前進(jìn)行三天問詢法膳食調(diào)查，觀察飲食原因?qū)υ囼灲Y(jié)果影響。（3）匯報中應(yīng)表達(dá)篩除其類型貧血方法。保健食品毒理和功能第125頁各功效試驗審評關(guān)鍵點12.