食品的測定 實驗急性毒性實驗

食品的測定實驗急性毒性實驗第1頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日一、目的與要求1、學習急性毒性試驗的方法，掌握LD50的測定方法。2、觀察馬錢子的毒性反應。二、實驗原理急性毒性試驗是指受試動物在一次大劑量給藥后所產(chǎn)生的毒性反應和死亡情況。藥物毒性的大小，常用動物的致死量來表示，因為動物生與死的生理指標較其他指標明顯、客觀、容易掌握。致死量的測定也較準確。在測定致死量的同時，還應仔細觀察動物是否出現(xiàn)聳毛、倦臥、耳殼蒼白或充血、突眼、步履蹣跚、肌肉癱瘓、呼吸困難、昏迷、驚厥、大小便失禁等不良反應。第2頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日致死量的測定常以半數(shù)致死量為標準。半數(shù)致死量是指能夠引起試驗動物一半死亡的劑量，媽藥物致死量對數(shù)值，用符號LD50表示。由于LD50的測定較簡便、可靠，而且穩(wěn)定，現(xiàn)已成為標志動物急性中毒程度的重要常數(shù)。LD50測定的方法有多種，如Bliss法、改進寇氏法、簡化機率單位法、累積插值法、機率單位-加權(quán)直線加歸法等等。以上方法雖各有特點，但都有共同的要求：（1）動物：均選用體重17～22克健康小鼠（同次試驗體重相差不得超過4克），或選用體重120～150克（同次試驗體重相差不得超過10克）健康大鼠作實驗動物。性別相同或雌雄各半。第3頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日（2）給藥途徑：要求采用兩種給藥途徑，其中必須有一種與臨床所采用的相同。溶于水的藥物沿須測定靜脈注射的LD50。值得提出的是，臨床上雖然不用腹腔注射，但動物實驗因腹腔注射給藥方便，吸收迅速，頗為常用。若供試藥物在腹腔內(nèi)不引起強烈刺激或局部變化（如纖維性病變等），那么嚙齒類動物腹腔注射的LD50，參數(shù)很接近于靜脈給藥的LD50?？诜苿o法通過注射給藥途徑時，可只用胃腸給藥。（3）試驗周期和觀察指標：給藥后至少觀察7天。觀察期間應逐日記錄動物的毒性反應情況和死亡動物的分布。第4頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日（4）正式試驗前，均須先用少量動物進行預試試驗，大致測出受試藥物引起0%和100%死亡率的致死量范圍，然后安排正式試驗。正式試驗組數(shù)不得少于三個劑量組，一般選用4～5個劑量組，每組動物數(shù)為10～20只。（5）報告LD50時需注明實驗動物的種屬及品系、性別、體重范圍、給藥途徑及每個劑量組動物數(shù)等，還需注明受試藥物的配制方法、給藥劑量、各組劑量間的比值（一般以0.65～0.85為宜）、給藥容積、觀察時間及計算方法。還須標出LD50的95%可信限。

第5頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日三、實驗材料和試劑動物：小鼠藥品：馬錢子水煎液器材：注射器、灌胃針頭、鼠籠第6頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日四、操作方法1、預試實驗：預試實驗目的是為了找出引起動物0%（Dn）和100%（Dm）死亡的劑量，以便安排正式實驗。預試實驗一般采用少量動物（6～9只小鼠）進行，將動物隨機分為3組，組間劑量比值一般以1：0.5或1：0.7為宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g體重為度。預試實驗應進行到找出Dn和Dm后方可安排正式實驗。2、正式實驗：在預試實驗測得Dn和Dm的劑量范圍內(nèi)設4～6個劑量組，最多10組。最理想的結(jié)果是使LD50的上下各有2～3組。組數(shù)愈少，準確性愈差。各劑量組的動物要求相等，至少10只動物（分組時應注意分層隨機均勻化的原則）。本實驗要求最大反應率為100%，最小反應率為0%，或至少反應率接近100%或0%。組間劑量比值（1：K），常用1：0.8或1：0.75。如實驗中出現(xiàn)相鄰劑量有重復的100%和0%反應率時，應將靠邊的組棄去不計，使大劑量組只有一個100%的反應率，小劑量組也只有一個0%的反應率。第7頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日分組完畢和各組劑量算出后，分組灌服或注射不同劑量的受試藥物。為能得到理想的結(jié)果，實驗最好從中間劑量開始，以便從最初幾個劑量組動物接受藥物后的反應來判斷兩端劑量是否合適，便于調(diào)整劑量和組數(shù)。為了提高實驗的精確度和節(jié)省藥物，受試藥物可按“低比稀釋法”配置。即使每只動物的用藥體積相等（0.2ml/10g），而溶質(zhì)不等。給藥后逐日觀察并記錄中毒反應、死亡率和死亡情況。第8頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日五、實驗結(jié)果記錄與計算組別劑量g/kg(d)Logd(X)死亡數(shù)死亡率（P）P2P-P21234第9頁，共10頁，2023年，2月20日，星期日公式1:（logLD50）X50=Xm-i(ΣP-05)

則LD50=log-1X50公式2：Sx50=i*公式3：LD50的95%可信限=lg-1（X50±1.96SX50）

LD50的平均可信限=LD50±（LD50高限-LD50低限）/2Xm：最大劑量組劑量的對數(shù)值

i：相鄰兩組劑量（d）對數(shù)值之差，或相鄰兩組高劑量與低劑量之比的對數(shù)。

P：各組動物的