生命科學(xué)部新產(chǎn)品培訓(xùn)分子病理診斷演示文稿

生命科學(xué)部新產(chǎn)品培訓(xùn)分子病理診斷演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有38頁\編輯于星期日（優(yōu)選）生命科學(xué)部新產(chǎn)品培訓(xùn)分子病理診斷現(xiàn)在是2頁\一共有38頁\編輯于星期日人體、染色體、DNA關(guān)系？每個(gè)人體細(xì)胞內(nèi)有一個(gè)細(xì)胞核，每個(gè)細(xì)胞核內(nèi)有46條染色體，每個(gè)染色體都蘊(yùn)含著具有遺傳效應(yīng)的DNA片段，正是它們決定了我們每個(gè)不同的個(gè)體?，F(xiàn)在，讓我們一起揭開染色體和DNA的結(jié)構(gòu)與功能之謎?，F(xiàn)在是3頁\一共有38頁\編輯于星期日PPT模板下載：/moban/

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目錄1.分子病理概述2.分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與環(huán)境3.病理科實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)4.分子病理學(xué)常用檢測設(shè)備5.推薦設(shè)備型號及預(yù)算6.常用試劑及價(jià)格國藥集團(tuán)聯(lián)合醫(yī)療器械有限公司7.經(jīng)濟(jì)效益分析現(xiàn)在是4頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理診斷的市場介紹分子病理學(xué)概述分子病理診斷的應(yīng)用范圍常用分子病理診斷技術(shù)分子病理診斷的現(xiàn)在和未來現(xiàn)在是5頁\一共有38頁\編輯于星期日1503億美元全球IVD市場2155億美元中國IVD市場份額35%全球分子診斷市場份額415%全球分子診斷復(fù)合增長速度55%全球IVD市場的平均增長速度620%中國分子診斷增長速度國外廠家：羅氏診斷（瑞士）、Gen-Probe（Hoiogic）（美國）、QIAGEN（荷蘭）、BD（美國）、西門子（德國）、生物梅里埃（法國）、雅培（美國）、諾華（瑞士）、Cepheid（美國）和貝克曼庫爾特（美國）國內(nèi)廠家：深圳華大、達(dá)安基因、科華生物、上海之江、北京博奧、廈門艾德、湖南圣湘、福州泰普、廣州安必平現(xiàn)在是6頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理診斷的應(yīng)用范圍腫瘤易感基因的檢測（Rb1視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；WT1腎母細(xì)胞瘤）腫瘤先關(guān)病毒的檢測(HPV病毒與宮頸癌發(fā)生有很大關(guān)系）腫瘤的早期診斷：（K-ras基因突變在結(jié)腸癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤中發(fā)生率高，結(jié)腸癌指導(dǎo)靶向用藥愛必妥，肺癌指導(dǎo)靶向用藥吉非替尼、埃羅替尼）疑難腫瘤的診斷和分類（T細(xì)胞受體基因重排具有鑒別淋巴細(xì)胞增生和淋巴瘤，Bcr區(qū)基因重排可對慢性粒細(xì)胞性白血病和急性粒細(xì)胞性白血病進(jìn)行鑒別診斷，N-myc和C-myc檢測可對鑒別神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)上皮瘤有應(yīng)用價(jià)值）腫瘤的預(yù)后監(jiān)測腫瘤個(gè)體化和預(yù)見性治療提供依據(jù)腫瘤的預(yù)后判斷：(HER2基因陽性表達(dá)表示乳腺癌治療預(yù)后不良需要改變治療方案，指導(dǎo)靶向用藥赫賽?。┈F(xiàn)在是7頁\一共有38頁\編輯于星期日常用分子病理診斷技術(shù)免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC)----檢測蛋白質(zhì)分子原位雜交------檢測DNA、RNA熒光原位雜交技術(shù)（FISH)----檢測DNA、RNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(PCR)----檢測DNA、RNA熒光定量PCR技術(shù)-----檢測DNA、RNADNA測序技術(shù)-----檢測DNA突變生物芯片技術(shù)-----檢測DNA、RNA、蛋白質(zhì)DNA印跡技術(shù)(southernblot)---檢測DNA微衛(wèi)星不穩(wěn)定性檢測技術(shù)（MSI)現(xiàn)在是8頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理診斷的現(xiàn)在和未來現(xiàn)在（弊端）未來（突破）自動(dòng)化不足（限制檢測通量）檢測技術(shù)難以突破，產(chǎn)品同質(zhì)化嚴(yán)重儀器一體化、自動(dòng)化、操作簡便增強(qiáng)研發(fā)能力，革新技術(shù)，研發(fā)新品二代測序技術(shù)突破提升，提高檢測速度，降低檢測成本現(xiàn)在是9頁\一共有38頁\編輯于星期日熒光原位雜交技術(shù)（FISH)原理：通過熒光標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交，在熒光顯微鏡下能原位顯示細(xì)胞核內(nèi)雜交信號的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)。步驟：FISH樣本制備探針的制備探針標(biāo)記雜交染色體顯帶熒光顯微鏡檢測結(jié)果分析在醫(yī)院中的使用：病理科、血液科、婦產(chǎn)科、生殖中心（產(chǎn)前診斷，植入前診斷）產(chǎn)品種類及廠家品牌：細(xì)胞類探針---白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、產(chǎn)前診斷和產(chǎn)后篩查類

實(shí)體腫瘤類探針----乳腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、肺癌、軟組織肉瘤、前列腺瘤、甲狀腺癌等方面實(shí)驗(yàn)室基本要求：環(huán)境---樣本準(zhǔn)備區(qū)、暗室（10-15平米左右）

設(shè)備---熒光顯微鏡以及熒光成像分析系統(tǒng)、水浴鍋、原位雜交儀、冰箱、離心機(jī)、恒溫箱

辦公設(shè)備----電腦、打印機(jī)

實(shí)驗(yàn)耗材----FISH探針、普通實(shí)驗(yàn)耗材技術(shù)人員：1人現(xiàn)在是10頁\一共有38頁\編輯于星期日實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)原理：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過探針與擴(kuò)增產(chǎn)物的結(jié)合釋放出熒光信號，再通過專門的儀器對信號進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測，經(jīng)過軟件分析可以準(zhǔn)確計(jì)算出目的基因的初始數(shù)量，實(shí)現(xiàn)定量檢測。步驟：提取樣本核酸反轉(zhuǎn)錄成CDNA設(shè)計(jì)引物和探針制備探針標(biāo)記RT-PCR反應(yīng)進(jìn)行分析熒光實(shí)驗(yàn)圖應(yīng)用范圍：臨床疾病診斷、動(dòng)物疾病檢測、食品安全、科學(xué)研究、應(yīng)用行業(yè)檢測腫瘤的項(xiàng)目：CEA(mRNA）、AFP(mRNA）、UPA(mRNA）、CK19(mRNA）、CK20(mRNA）、MDRI(mRNA）優(yōu)點(diǎn)：特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化，可以在一個(gè)試管內(nèi)將目的基因數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至百萬倍，可從一根毛發(fā)、一滴血、一個(gè)細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增出足量的DNA進(jìn)行研究和檢測鑒定。實(shí)驗(yàn)室基本要求：需要避光的暗室；有熒光顯微鏡觀察室技術(shù)人員：1人現(xiàn)在是11頁\一共有38頁\編輯于星期日現(xiàn)在是12頁\一共有38頁\編輯于星期日DNA一代測序技術(shù)原理：（sanger雙脫氧核苷酸末端終止法）利用DNA聚合酶，以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設(shè)立四種相互獨(dú)立的測序反應(yīng)體系，在體系中加入不同的ddNTP作為鏈延伸終止劑。在測序引物指導(dǎo)下，按照堿基配對原則，每個(gè)反應(yīng)體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過凝膠電泳后，可以讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列。步驟：測序模板的純化與定量、測序反應(yīng)、測序反應(yīng)產(chǎn)物純化與變性、上樣電泳、分析結(jié)果應(yīng)用范圍：尋找與疾病相關(guān)的突變信息、指導(dǎo)靶向用藥、尋找致病基因、各種基因作用的破解，提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量、明白個(gè)人基因信息，選擇投保臨床檢測項(xiàng)目：K-RAS基因突變檢測（結(jié)直腸癌、胃癌、頭頸部癌及肺癌，愛必妥類靶向治療）EGFR基因突變檢測（肺癌，易瑞沙和特羅凱靶向治療）Bcr-Ab1融合基因和C-KIT、PDGFR基因突變檢測（白血病、胃腸道間質(zhì)瘤，格列衛(wèi)靶向治療）

乳腺癌化療、結(jié)直腸腺癌化療的個(gè)體化治療方案技術(shù)人員：1-2人現(xiàn)在是13頁\一共有38頁\編輯于星期日DNA二代測序技術(shù)原理：（大規(guī)模平行測序法）單鏈DNA文庫被固定在芯片上并帶有合成引物，用不同顏色的熒光標(biāo)記四種不同的dNTP，逐一加入DNA芯片上，當(dāng)聚合酶合成互補(bǔ)鏈時(shí)，每添加一種dNTP就會釋放不同的熒光，根據(jù)捕捉的熒光信號并經(jīng)過特定的計(jì)算機(jī)軟件處理，從而獲得待測DNA的序列信息。步驟：文庫制備DNA芯片創(chuàng)建進(jìn)行測序數(shù)據(jù)分析公司平臺名稱測序方法檢測方法大約讀長優(yōu)點(diǎn)局限性第一代ABI3130XL-3730XLSanger法熒光/光學(xué)600-1000bp高讀長，準(zhǔn)確性高通量低，樣品制備成本高第二代羅氏基因組測序儀焦磷酸法光學(xué)230-400bp通量大讀長短，樣品制備難，準(zhǔn)確性差現(xiàn)在是14頁\一共有38頁\編輯于星期日三代DNA測序方法的區(qū)別第一代測序技術(shù)第二代測序技術(shù)第三代測序技術(shù)Sanger雙脫氧鏈終止法循環(huán)芯片技術(shù)實(shí)現(xiàn)了高通量、高效率、高準(zhǔn)確度的測序大大降低了測序的成本單分子測序試劑用量少，成本更低第一代測序技術(shù)憑借其長的序列片段和高的準(zhǔn)確率，適合對新物種進(jìn)行基因組長距框架的搭建以及后期GAP填補(bǔ)，但是成本昂貴，而且難以勝任微量DNA樣品的測序工作。第二代測序技術(shù)中：454序列片段最長，比較適合對未知基因組從頭測序，搭建主體結(jié)構(gòu)，但是在判斷連續(xù)單堿基重復(fù)區(qū)時(shí)準(zhǔn)確度不高。Solexa較454具有通量高、片段短、價(jià)位低的特點(diǎn)，可以用于大基因組和小基因組的測序和重測序。SOLiD基于雙堿基編碼系統(tǒng)的糾錯(cuò)能力以及較高的測序通量，適合轉(zhuǎn)錄本研究以及比較基因組學(xué)特別是SNP檢測等，但是測序的片段短限制了該技術(shù)在基因組拼接中的廣泛應(yīng)用。（可以完成一個(gè)人整體遺傳組的測序）第三代測序技術(shù)目前正在發(fā)展中，在未來會成為主導(dǎo)?，F(xiàn)在是15頁\一共有38頁\編輯于星期日？哪種檢測技術(shù)才是現(xiàn)在臨床使用最廣的技術(shù)成熟、定量準(zhǔn)確特異性、敏感性高；成本低廉、儀器價(jià)格適中產(chǎn)品種類能夠滿足相關(guān)疾病檢測以及科研研究使用PCR技術(shù)尚未克服技術(shù)缺陷、無法做到準(zhǔn)確定量檢測特異性、敏感性低；成本高昂、儀器價(jià)格昂貴產(chǎn)品種類少，只用于科研和藥物篩選等用途，無法滿足疾病檢測基因芯片熒光定量PCR技術(shù)是臨床疾病基因診斷的主要手段，有廣闊的市場容量和良好的發(fā)展前景總結(jié)現(xiàn)在是16頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施與環(huán)境1.布局合理，實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域的正確劃分3.消防設(shè)施安全消防通道暢通4.石蠟組織、DNA樣本的存放2.水電、照明、通風(fēng)符合實(shí)驗(yàn)室基本要求5.實(shí)驗(yàn)室記錄、操作手冊等文件存放7.安裝生物安全防護(hù)措施8.實(shí)驗(yàn)室的清潔日常消毒、有相關(guān)記錄6.實(shí)驗(yàn)室耗材試劑的存放廢棄物的處理現(xiàn)在是17頁\一共有38頁\編輯于星期日病理科實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)衛(wèi)生部【2009】31號文件（病理科建設(shè)與管理指南）2006年6月1日實(shí)施的（醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法）全國各省市的關(guān)于臨床病理專業(yè)質(zhì)量檢查及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)美國CAP認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)歐洲NordiQC認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)國際標(biāo)準(zhǔn)化組織制定并與2003年正式發(fā)布醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的管理標(biāo)準(zhǔn)，ISO15189：2003(醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求）現(xiàn)在是18頁\一共有38頁\編輯于星期日IHCISH現(xiàn)在是19頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備免疫組化染色所需試劑：

機(jī)用緩沖液機(jī)用清洗液機(jī)用抗原修復(fù)液一抗試劑機(jī)用二抗檢測系統(tǒng)現(xiàn)在是20頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備原位雜交所需試劑：

原位雜交試劑盒二甲苯無水乙醇

PBS清洗液現(xiàn)在是21頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備熒光原位雜交（FISH)HyChrome是一個(gè)創(chuàng)新產(chǎn)品，用于完成高溫原位變性和退火雜交探針過程。HyChrome由一個(gè)單獨(dú)的平板加熱模塊和一個(gè)濕度箱組成：平板加熱模塊的溫度是由一個(gè)數(shù)字微處理器來控制，濕度箱為了減少脫水，最終實(shí)現(xiàn)高信號和低背景雜交。在一個(gè)模塊中完成標(biāo)本變性和雜交的溫度控制技術(shù)以及可能性已被驗(yàn)證了，該技術(shù)以及可能性保證了片子之間溫度的可變性和一個(gè)好的再現(xiàn)性所需試劑：

一抗探針二抗試劑蛋白酶變性液二甲苯無水乙醇

PBS清洗液現(xiàn)在是22頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備DM2500熒光顯微鏡部分?jǐn)?shù)碼成像系統(tǒng)部分細(xì)胞染色體核型分析軟件熒光原位雜交分析軟件現(xiàn)在是23頁\一共有38頁\編輯于星期日熒光定量PCR儀顯示器核酸電泳儀椅子空氣流向擴(kuò)增和分析區(qū)金屬浴水槽離心機(jī)生物安全柜冰箱椅子空氣流向樣本制備區(qū)廢液缸振蕩器天平離心機(jī)椅子試劑準(zhǔn)備區(qū)空氣流向?qū)Ｓ米呃绕胀≒CR儀凝膠成像系統(tǒng)核酸提取儀DNA測序儀現(xiàn)在是24頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備核酸提純儀博日GenePure核酸提純儀采用磁珠分離技術(shù)，提取過程自動(dòng)化多選擇性試劑盒可以從多種樣品材料中分離純化高純度的核酸省時(shí)、省力、高效、準(zhǔn)確現(xiàn)在是25頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備PCR擴(kuò)增儀博日GeneMax所需試劑：

PCRMIX引物雙蒸水

現(xiàn)在是26頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備生物安全柜高效循環(huán)空氣過濾器自適應(yīng)壓力調(diào)整功能微機(jī)控制大屏幕液晶顯示配重前窗環(huán)境安全配備有紫外燈照明系統(tǒng)現(xiàn)在是27頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備離心機(jī)產(chǎn)品特征：適應(yīng)于DNA的分離、提純及后處理清潔工作最大轉(zhuǎn)速達(dá)15000rpm無需手動(dòng)，自動(dòng)關(guān)門運(yùn)行安靜，無碳刷感應(yīng)電機(jī)溫度范圍：從-20度

到40度，保證樣品的生物活性適用于0.25ml到500ml的樣品運(yùn)行時(shí)間：9h59min，連續(xù)離心貝克曼Allegra25R臺式高速冷凍離心機(jī)

現(xiàn)在是28頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備熒光定量PCR儀采用熒光實(shí)時(shí)檢測方式，實(shí)現(xiàn)在同一管內(nèi)同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增和檢測，無須后處理先進(jìn)的熱電制冷技術(shù)，保證了超高速的熱循環(huán)系統(tǒng)加熱，制冷迅速、穩(wěn)定穩(wěn)定、準(zhǔn)確的1～36℃梯度功能，確保PCR條件更優(yōu)化，SOAK的恒溫功能，實(shí)現(xiàn)了PCR試劑的低溫保存l對PCR擴(kuò)增全過程進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測線型范圍大，可達(dá)到10個(gè)數(shù)量級的起始DNA拷貝數(shù)無需梯度稀釋無需開啟PCR反應(yīng)管，可避免在PCR期間及PCR之后產(chǎn)物污染，確保結(jié)果準(zhǔn)確多色熒光檢測，在單一反應(yīng)中取得更多信息自動(dòng)化的熱蓋技術(shù)，無需手動(dòng)開/閉，保證熱蓋在不同高度試管使用時(shí)的壓力可打印多個(gè)或單個(gè)樣本先進(jìn)的模塊底部熒光檢測技術(shù)，受發(fā)明專利保護(hù)l支持RS232、USB、Bluetooth接口博日LineGene9600所需試劑：

待測樣本核酸提取試劑盒待測樣本濃度測定逆轉(zhuǎn)錄試劑盒熒光定量PCR試劑盒其他試劑

現(xiàn)在是29頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備ABIStepOnepPlus熒光定量PCR儀性價(jià)比極高的三色/48孔(StepOne)或四色/96孔(StepOnePlus)系統(tǒng)基于使用壽命長的LED的光學(xué)系統(tǒng)，可以檢測多種熒光染料，用于基因表達(dá)分析、病原體定量檢測、SNP(單核苷酸多態(tài)性)基因分型、以及陰性/陽性分析等多種實(shí)驗(yàn)可以進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)模式和快速模式PCR反應(yīng)，快速模式可以在40分鐘內(nèi)完成PCR反應(yīng)LCD觸摸屏和支持USB存儲，使得系統(tǒng)配置更靈活，并且可以實(shí)現(xiàn)無PC操作具有獨(dú)特的VeriFlexTM加熱塊，極大地提高了系統(tǒng)的功能和溫控的精度現(xiàn)在是30頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備核酸電泳儀外形尺寸（L×W×H）：242×132×105mm凝膠板規(guī)格(L×W)：85×80mm試樣格：12、15齒，1.0、2.0mm厚重量：約1Kg緩沖液總?cè)萘浚杭s500m

適用于鑒定、分離、制備DNA以及測定其分子量。有冷卻裝置，可做雙排膠。此型號適用PCR電泳或RNA電泳。北京六一電泳儀現(xiàn)在是31頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備核酸凝膠成像系統(tǒng)暗箱式，無需暗室，可全天候使用抽屜式燈箱互換，使用方便，防止污染具有實(shí)時(shí)預(yù)覽、自動(dòng)對焦功能紫外濾光鏡：EB專用超多層鍍膜濾光鏡（M52×0.75）*兼容tif、jpg、bmp、gif等諸多圖像格式高清晰度130萬像素?cái)z像頭，高品質(zhì)成像質(zhì)量，遙控電動(dòng)變焦，智能化控制專用拍攝軟件與分析軟件一體操作，使“觀察、拍攝、分析一氣呵成通過USB接口與計(jì)算機(jī)連接，不觸動(dòng)計(jì)算機(jī)內(nèi)部硬件，便于維護(hù)和保修紫外/白光轉(zhuǎn)換屏。用途：

主要用于核酸、蛋白質(zhì)電泳觀察、照像和實(shí)驗(yàn)結(jié)果科學(xué)分析。

現(xiàn)在是32頁\一共有38頁\編輯于星期日分子病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測設(shè)備DNA一代測序儀ABI3730XLsanger法毛細(xì)管電泳分離電腦熒光檢測數(shù)據(jù)分析可得到DNA堿基序列性能特點(diǎn)：毛細(xì)管規(guī)格:96道毛細(xì)管毛細(xì)管長度:50cm凝膠的規(guī)格:POP-7液體分離膠配套的試劑:基因測序(BigDye3.1v和5×Sequencebuffer)

基因分型(Liz120,Liz500,ROX500)基因測序及分型的運(yùn)行時(shí)間時(shí)間：96樣本~2h

通量：（94-96）/384*12優(yōu)點(diǎn)：方法可