變應(yīng)性鼻炎患者敏感穴位貼敷療法對鼻腔菌群變化的影響

變應(yīng)性鼻炎患者敏感穴位貼敷療法對鼻腔菌群變化的影響

基金：2020年珠海市醫(yī)療衛(wèi)生科技計劃項(xiàng)目ZH2202200053HJL[Summary]目的通過比較治療前后患者鼻腔菌群的情況，探討敏感穴位貼敷療法對變應(yīng)性鼻炎患者鼻腔菌群的影響。方法選擇2020年9月-2021年7月我院收治的確診為肺脾氣虛型變應(yīng)性鼻炎患者40例，并按照隨機(jī)單盲對照分組，分到治療組和對照組，各20例。有患者均選取大椎、肺俞、脾俞、腎俞（7個）穴位進(jìn)行穴位貼敷。對照組采用安慰劑貼敷，治療組采用敏感穴位藥物貼敷。兩組患者均每次貼藥1小時（受試者如有不適隨時停止貼藥并記錄），1周貼2次。2次為一個療程，共3個療程，共6次。比較兩組患者鼻腔菌群的變化情況。結(jié)果治療前，治療組樣本中操作分類單元(OperationalTaxonomicUnit，OTU)的是數(shù)量為（204.14±75.03）；而在對照組組樣本中OTU數(shù)量為（203.65±74.28），兩組OTU數(shù)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，治療組與對照組樣本中共計獲得66213條有效序列，治療組共計獲得條序列、對照組獲得條有效序列，序列的有效長度在410~431bp。治療組樣本中OTU的是數(shù)量為（188.46±64.35）；而在對照組組樣本中OTU數(shù)量為（147.59±58.86），治療組OTU數(shù)量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。根據(jù)OTU物種注釋結(jié)果，為了便于后續(xù)分析和比較，選取待測樣本中豐度較大Top10的物種進(jìn)行分析比較。治療組患者與對照組患者相比放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、梭桿菌門豐度相對增加，而厚壁菌門、藍(lán)藻、TM7、嗜熱菌門等豐度與對照組患者相比減少。結(jié)論變應(yīng)性鼻炎患者敏感穴位貼敷療法可改善患者鼻腔菌群。[Keys]變應(yīng)性鼻炎；中醫(yī)；敏感穴位貼敷療法；鼻腔菌群變應(yīng)性鼻炎也稱過敏性鼻炎，作為一種常見的變態(tài)反應(yīng)性疾病，其具有復(fù)發(fā)性和漫長性的特點(diǎn)。臨床研究顯示[1]，鼻腔內(nèi)的微生態(tài)平衡失調(diào)，這可能是導(dǎo)致患者出現(xiàn)變應(yīng)性鼻炎癥狀的重要原因。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為變應(yīng)性鼻炎主要是由于機(jī)體虛弱，又受到外界風(fēng)寒，出現(xiàn)主要鼻部不適癥狀為主的疾病。治療上應(yīng)從肺、脾、腎三臟論治[2]。在長期的實(shí)踐中，摸索出來對變應(yīng)性鼻炎的中醫(yī)外治法，具有“廉、便、效、驗(yàn)”的特點(diǎn)，易于被廣大患者所接受。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，經(jīng)絡(luò)有溝通內(nèi)外、聯(lián)通上下的作用，臟腑之氣匯聚于腧穴，腧穴通過經(jīng)絡(luò)的連接發(fā)揮治療作用[3]。穴位貼敷療法作為傳統(tǒng)的中醫(yī)外治法，利用其溫?zé)岬男再|(zhì)，通過對經(jīng)絡(luò)穴位的溫?zé)岽碳ざl(fā)揮調(diào)節(jié)臟腑生理的作用[4-5]，對變應(yīng)性鼻炎的治療效果顯著，且安全可靠?；诖?，本次研究通過比較治療前后患者鼻腔菌群的情況，探討敏感穴位貼敷療法對變應(yīng)性鼻炎患者鼻腔菌群的影響。報道如下。1資料與方法1.1一般資料本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，選擇2020年9月-2021年7月我院收治的確診為肺脾氣虛型變應(yīng)性鼻炎患者40例，并按照隨機(jī)單盲對照分組，分到治療組和對照組，各20例。對照組男12例，女8例；年齡18~65歲，平均年齡（34.19±3.27）歲；病程6個月~5年，平均病程（2.46±0.86）年。治療組男13例，女7例；年齡18~65歲，平均年齡（34.23±33.24）歲；病程7個月~5年，平均病程（2.51±0.84）年。比較兩組患者一般資料，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可對比性。且患者及其家屬均自愿簽署知情同意書。1.2入選標(biāo)準(zhǔn)（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合變應(yīng)性鼻炎中西診斷標(biāo)準(zhǔn)者，中醫(yī)辨證為虛證者（肺、脾、腎三臟任一臟虧虛或多臟虧虛者），且符合持續(xù)性變應(yīng)性鼻炎標(biāo)準(zhǔn)；②能夠按要求完成病例觀察表等相關(guān)記錄；③能夠充分配合鼻腔分泌物的取樣工作。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①急性鼻炎(傷風(fēng))，血管運(yùn)動性鼻炎，自主神經(jīng)性鼻炎，嗜酸性粒細(xì)胞增多性非變態(tài)反應(yīng)性鼻炎，變應(yīng)性鼻竇炎；②膠布過敏史；③局部皮膚病變?nèi)鐭齻?、濕疹、潰瘍、凍瘡破潰者；④孕婦、婦女月經(jīng)期暫停（經(jīng)后可補(bǔ)貼，但應(yīng)注明貼敷日期）；⑤由于智力或行為障礙不能充分配合試驗(yàn)和調(diào)查者；⑥因工作環(huán)境經(jīng)常變動等易造成失訪的患者。1.3方法不允許受試者在觀察期間采用針對變應(yīng)性鼻炎的藥物療法，但出于倫理學(xué)考慮，以及考慮到來院就診患者的心理傾向，研究者將為患者提供統(tǒng)一的藥物，以供患者在癥狀發(fā)作時服用。提供藥物：鹽酸左西替利嗪分散片5mgpo/qd。受試者并被要求及時記錄用藥日記，該服藥記錄將作為療效指標(biāo)之一進(jìn)行統(tǒng)計分析。所有患者均選取大椎、肺俞、脾俞、腎俞（7個）穴位進(jìn)行穴位貼敷。1.3.1對照組采用安慰劑貼敷（安慰劑由淀粉構(gòu)成，并用醬油調(diào)色成類似中藥色）。1.3.2治療組采用敏感穴位藥物貼敷（貼敷藥物由白芥子、細(xì)辛、延胡索三味組成，并用生姜汁調(diào)和）。兩組患者均每次貼藥1小時（受試者如有不適隨時停止貼藥并記錄），1周貼2次。2次為一個療程，共3個療程，共6次。1.3.3鼻腔菌群測定方法一.樣本采集：耳鼻喉科門診醫(yī)生嚴(yán)格按照技術(shù)操作規(guī)范，充分消毒雙手，無菌棉拭子置于受檢者的中鼻道，旋轉(zhuǎn)3周擦取黏膜表面菌群，整個取樣過程避免接觸鼻腔側(cè)壁及鼻前庭。采得樣本置于3mL塑料離心管中，離心管內(nèi)含有1.5mL還原性硫乙醇酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)液。轉(zhuǎn)移樣本于４°C保存不超過24小時，經(jīng)冰盒轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行后續(xù)操作。二.樣本處理：（一）DNA提?。菏褂每侱NA提取試劑盒按說明提取總DNA，檢測濃度后于-80℃保存。（二）PCR擴(kuò)増：使用16SrRNAV1-V2區(qū)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列為27F及338R，反應(yīng)條件為：初始變性溫度為94℃3min，94℃變性30s，55℃退火45s，72℃延伸60ｓ，共28個循環(huán)，72℃最終延伸7min后于10℃保存。（三）髙通量測序：使用Hiseq第二代高通量測序平臺對PCR產(chǎn)物進(jìn)行250bpX2雙末端測序，測序完成后進(jìn)行操作分類單元的生成和注釋，構(gòu)建微生物多樣性分析，主成分分析及線性判別分析。1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以表示計量資料，組間用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.結(jié)果2.1鼻腔菌群多樣性分析治療前，治療組樣本中操作分類單元(OperationalTaxonomicUnit，OTU)的是數(shù)量為（204.14±75.03）；而在對照組組樣本中OTU數(shù)量為（203.65±74.28），兩組OTU數(shù)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，治療組與對照組樣本中共計獲得66213條有效序列，治療組共計獲得條序列、對照組獲得條有效序列，序列的有效長度在410~431bp。治療組樣本中OTU的是數(shù)量為（188.46±64.35）；而在對照組組樣本中OTU數(shù)量為（147.59±58.86），治療組OTU數(shù)量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。表1兩組患者鼻腔菌群多樣性分析對比（±s）組別治療前治療后tP對照組(n=20)203.65±74.28147.59±58.862.6450.012治療組(n=20)204.14±75.03188.46±64.350.7090.482t0.0212.096P0.9830.0432.2鼻腔菌群物種組成分析根據(jù)OTU物種注釋結(jié)果，為了便于后續(xù)分析和比較，選取待測樣本中豐度較大Top10的物種進(jìn)行分析比較。對照組患者鼻腔中菌群按豐度遞減Top10依次為：厚壁菌門(Firmicutes)(52.50%)、變形菌門(Proteobacteria)(17.86%)、放線菌門(Actinobacteria)(17.45%)、藍(lán)藻(Cyanobacteria)(8.7%)、擬桿菌門(Bacteroidetes)(2.70%)、TM7(0.17%)、梭桿菌門(Fusobacteria)(0.15%)、嗜熱菌門(Thermi)(0.11%)、酸桿菌門(Acidobacteria)(0.11%)、疣微菌門(Verrucomicrobia)(0.09%)；治療組患者Top10依次遞減為：厚壁菌門(47.96%)、放線菌門(22.59%)、變形菌門(20.72%)、擬桿菌門(3.86%)、藍(lán)藻(2.74%)、梭桿菌門(1.87%)、TM7(0.09%)、嗜熱菌門(0.05%)、綠彎菌門(Chloroflexi)(0.04%)、酸桿菌門(0.04%)。治療組患者與對照組患者相比放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、梭桿菌門豐度相對增加，而厚壁菌門、藍(lán)藻、TM7、嗜熱菌門等豐度與對照組患者相比減少。3討論變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，就現(xiàn)有資料來看，該病是由于多種致病因素共同作用而發(fā)病的，明確發(fā)病的機(jī)制，對于臨床治療起到更好的效果。有研究表明[6]，在疾病的發(fā)病中，非變應(yīng)原性致病因素起著重要的作用，可以誘導(dǎo)發(fā)生變態(tài)反應(yīng)。微生物的組成對于維持鼻粘膜正常的免疫應(yīng)答具有重要作用，鼻腔菌群中某些微生物可能與疾病的發(fā)生有關(guān)。在正常情況下，平衡的鼻腔微生物共同參與了粘膜屏障功能的維持，當(dāng)菌群失調(diào)時，粘膜對外來變異原敏感性增加而抵抗性下降，促進(jìn)炎癥的發(fā)生。此外某些條件致病菌的代謝產(chǎn)物也可促進(jìn)包括白介素在內(nèi)的炎癥因子釋放，進(jìn)一步加重Th1/Th2免疫失衡。有實(shí)驗(yàn)針對過敏性鼻炎患者菌群定植利用PCR-DGGE法進(jìn)行對比分析，驗(yàn)證了菌群定植的差異性，證實(shí)了過敏性鼻炎患者鼻腔菌群存在紊亂。因此鼻腔微環(huán)境中微生態(tài)菌群的失調(diào)會導(dǎo)致發(fā)病率的升高。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，經(jīng)絡(luò)有溝通內(nèi)外、聯(lián)通上下的作用，臟腑之氣匯聚于腧穴，腧穴通過經(jīng)絡(luò)的連接發(fā)揮治療作用。穴位貼敷療法作為傳統(tǒng)的中醫(yī)外治法，利用其溫?zé)岬男再|(zhì)，通過對經(jīng)絡(luò)穴位的溫?zé)岽碳ざl(fā)揮調(diào)節(jié)臟腑生理的作用，對變應(yīng)性鼻炎的治療效果顯著，且安全可靠。穴位貼敷療法使用的藥物，大多數(shù)是溫?zé)峄钛?。臨床運(yùn)用敏感穴位貼敷療法對變應(yīng)性鼻炎的治療有著令人滿意的效果[7-8]，而本研究結(jié)果顯示，治療組OTU數(shù)量高于對照組，而治療組患者與對照組患者相比放線菌門、變形菌門、擬桿菌門、梭桿菌門豐度相對增加，而厚壁菌門、藍(lán)藻、TM7、嗜熱菌門等豐度與對照組患者相比減少。提示變應(yīng)性鼻炎患者敏感穴位貼敷療法可改善患者鼻腔菌群。穴位貼敷療法具有“廉、便、效、驗(yàn)”的特點(diǎn)，且鼻腔分泌物的取樣為非創(chuàng)傷性，易于被廣大患者所接受，提高了患者的依存性。但對于敏感穴位貼敷治療變應(yīng)性鼻炎影響鼻腔菌群的機(jī)理尚不明確，未來可進(jìn)行深入研究。綜上所述，本研究運(yùn)用敏感穴位貼敷療法對變應(yīng)性鼻炎的治療有著令人滿意的效果，那個有效改變鼻腔菌群。Reference[1]王巍,邢秀玲,劉偉然,等.益氣養(yǎng)陰方聯(lián)合穴位貼敷治療兒童變應(yīng)性鼻炎氣陰兩虛型臨床療效及相關(guān)機(jī)制研究[J].河北中醫(yī),2019,41(12):1795-1798+1804.[2]成雅,蔡嘉洛,廖富,等.穴位貼敷治療肺氣虛寒型變應(yīng)性鼻炎藥物組合與敷貼時長選擇的臨床研究[J].河北中醫(yī),2020,42(9):1305-1308+1405.[3]姜青云.敏感穴位藥物貼敷對變應(yīng)性鼻炎患者癥狀及外周血T細(xì)胞亞群的影響[D].廣州中醫(yī)藥大學(xué),2018.[4]壽崟,張必萌,張翠紅,等.鼻三針聯(lián)合穴位貼敷治療肺虛感寒型變應(yīng)性鼻炎的臨床研究[J].上海針灸雜志,2022,41(2)：185-190.[5]王巍,劉偉然,孫映雪,等.益氣養(yǎng)陰方聯(lián)合穴位貼敷和中藥香囊治療氣陰兩虛型變應(yīng)性鼻炎的臨床研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2021,30(30):3334-3338+3343.[6]魏強(qiáng),李小