瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)專家講座

全球基金瘧疾項(xiàng)目

鏡檢技術(shù)培訓(xùn)（二）戶縣疾病預(yù)防控制中心年3月28日瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第1頁(yè)瘧原蟲檢驗(yàn)技術(shù)

采集血樣血片制作血片染色瘧原蟲鏡檢瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第2頁(yè)采集血樣采血部位：耳垂或無(wú)名指，取血方法：通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指緊捏耳垂上方或無(wú)名指指尖，右手持消毒針快速刺入皮膚，不宜過(guò)深或過(guò)淺。然后用右手中指輕輕擠壓出血。厚血膜血量約一粒米大小,薄血膜血量為厚血膜二分之一或1/3。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第3頁(yè)厚血膜：用推片一角，取血一小滴（約4－4.5微升），置于平置載玻片上，由里向外一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)，涂成直徑0.8~1厘米大小圓形厚血膜。薄血膜：以推片一端中部取血一小滴，使血滴與載玻片接觸，血液沿推片邊緣向兩側(cè)展開，將推片與載玻片保持300-450，均勻而快速適當(dāng)?shù)赜昧ο蚯巴瞥缮嘈伪⊙?。血片制作（一）厚血膜薄血膜瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第4頁(yè)血片制作（二）標(biāo)準(zhǔn)瘧疾厚薄血膜片：把載玻片分成六等份，把厚血膜涂在從右到左第三格中央，薄血膜涂在第四格前緣至第六格中部，第一、二格備貼標(biāo)簽編號(hào)用。厚、薄血膜間用蠟筆劃線分開厚血膜血量不宜過(guò)多或過(guò)少薄血膜平整,無(wú)皺折和空泡.顯微鏡下紅細(xì)胞單層排列瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第5頁(yè)血片制作（三）不一樣血片涂布法：標(biāo)準(zhǔn)血片門診發(fā)燒病人血片居民普查血片瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第6頁(yè)血片染色（一）染色方法:吉氏染色法瑞氏染色法

WHO推薦使用吉氏染色法瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第7頁(yè)血片染色（二）吉氏原液配制：吉氏染粉(AzureBtype)１g甘油(純)

50ml甲醇

(純)

50ml把吉氏粉置于研缽中，加少許甘油充分研磨,

然后邊加邊磨，直至50ml甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后在研缽中加入少許甲醇清洗研缽，洗液倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，重復(fù)數(shù)次，直至甲醇用完。蓋好瓶蓋，充分搖勻，置于65℃溫箱中24小時(shí)，或室溫陰暗處1-2周后過(guò)濾，備用。整個(gè)染色液配制時(shí)間不能少于5個(gè)小時(shí)時(shí)間越長(zhǎng)染色效果越好。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第8頁(yè)血片染色（三）吉氏染液配制：把吉氏原液用PH7.0±0.2緩沖液稀釋，百分比約為1:15～20，稀釋后方可用于厚薄血片染色。吸收原液時(shí)，不要晃動(dòng)瓶子,以免沉淀物泛起影響染色效果.瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第9頁(yè)血片染色（四）血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚血膜上滴加蒸餾水進(jìn)行溶血，到血膜呈灰白色時(shí)，將水倒去，晾干后再用甲醇固定。注意：①薄血膜固定時(shí)，甲醇不可觸碰未溶血厚血膜。

②厚血膜溶血時(shí)，蒸餾水不可觸碰薄血膜。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第10頁(yè)血片染色（五）血片染色：1.吉氏染色法：把吉氏染液滴加于已固定厚、薄血膜上，室溫染色30分鐘，用緩沖液沖洗潔凈。血片晾干后鏡檢。2.快速吉氏染色法：取吉氏原液1ml，加緩沖液5ml，混勻后，滴加于厚、薄血膜上染色5分鐘，用緩沖液沖洗，晾干后鏡檢。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第11頁(yè)血片染色（六）3.成批血片染色：將已固定血片插入染色缸，加入吉氏染液浸沒血片，對(duì)厚、薄血膜同時(shí)染色30分鐘。注意：假如吉氏染液是從市場(chǎng)上購(gòu)置成品試劑，請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第12頁(yè)血片染色（七）血片染色結(jié)果：染色質(zhì)量好血片：顯微鏡下核呈紅色，胞漿呈藍(lán)色，薄血膜平整，紅細(xì)胞單層排列。假如血片偏紅,說(shuō)明染液偏酸性假如血片偏藍(lán),說(shuō)明染液偏堿性

吉氏染色血片外觀瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第13頁(yè)血片染色（八）血片制作與染色注意事項(xiàng)：１、載玻片必須清潔無(wú)油污；２、固定薄血膜時(shí)，甲醇不要觸碰到厚血膜；３、厚血膜在染色之前先用清水滴加在上面進(jìn)行溶血，以防厚血膜染色后顏色發(fā)黑，影響鏡檢；４、血片充分干燥后方可染色，預(yù)防沖洗染液時(shí)厚血膜脫落。5、未染色血膜放置時(shí)間夏天不宜超出48小時(shí)，冬天不宜超出72小時(shí)，不然厚血膜會(huì)自然固定，影響鏡檢。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第14頁(yè)瘧原蟲鏡檢（一）

厚血膜

薄血膜

優(yōu)點(diǎn)血量多，面積小，原蟲較為集中。原蟲檢出率高血量少，面積大，干燥快紅細(xì)胞完整，原蟲形態(tài)極少變形。用于觀察原蟲形態(tài)與判別蟲種。缺點(diǎn)原蟲在干燥過(guò)程中皺縮，紅細(xì)胞消失，原蟲變形較大，原蟲判定困難血量比厚血膜少許多，但面積是厚血膜8-10倍。檢驗(yàn)費(fèi)時(shí)，原蟲檢出率較低用途用于瘧疾病人檢驗(yàn)蟲種、蟲期判定及初學(xué)者教學(xué)標(biāo)本瘧原蟲厚、薄血膜鏡檢優(yōu)缺點(diǎn)瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第15頁(yè)顯微鏡下厚血膜讀片次序瘧原蟲鏡檢（二）讀片次序：顯微鏡鏡下按由上而下、之字形次序讀片瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第16頁(yè)瘧原蟲鏡檢（三）鏡檢瘧原蟲結(jié)果判斷：陰性血片：①檢驗(yàn)全部厚血膜視野未查見瘧原蟲；②最少檢驗(yàn)100個(gè)厚血膜視野未查見瘧原蟲（臨床病人）。陽(yáng)性血片：檢出各期瘧原蟲（環(huán)狀體、裂殖體、配子體）?；旌细腥荆涸谝粋€(gè)血膜上有2種以上瘧原蟲感染稱為混合感染，較常見是間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲混合。鏡檢判斷P.v+P.f混合感染：必須是看到P.v各期原蟲和P.f配子體。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第17頁(yè)間日瘧和惡性瘧判定關(guān)鍵點(diǎn)瘧原蟲鏡檢（四）瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第18頁(yè)瘧原蟲鏡檢（五）瘧原蟲形態(tài)特征：間日瘧（P.vivax）判定關(guān)鍵點(diǎn)紅細(xì)胞通常漲大薛氏點(diǎn)顯著成熟環(huán)狀體粗大滋養(yǎng)體胞漿有阿米巴樣偽足血片中可見各期原蟲形態(tài)成熟裂殖體約含12-24個(gè)裂殖子

瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第19頁(yè)瘧原蟲鏡檢（六）瘧原蟲形態(tài)特征：惡性瘧（P.falciparum）判定關(guān)鍵點(diǎn)：紅細(xì)胞不漲大小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體）纖細(xì),常有多重感染，環(huán)狀體內(nèi)可有2個(gè)核

環(huán)狀體可貼在紅細(xì)胞邊緣

血片中沒有其它發(fā)育期大滋養(yǎng)體配子體呈新月形或臘腸形成熟裂殖體約含16-32個(gè)裂殖子可出現(xiàn)茂氏點(diǎn)瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第20頁(yè)鏡檢示教以下血片采自現(xiàn)癥病例瘧原蟲鏡檢（七）瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第21頁(yè)瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第22頁(yè)瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第23頁(yè)間日瘧環(huán)狀體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第24頁(yè)2.Intermittentfever;arrivedfromIndia2monthsago.間日瘧滋養(yǎng)體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第25頁(yè)3.HistoryofroundtheworldsafariincludingS.America,AsiaandAfrica.Generalmalaise.惡性瘧雄配子體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第26頁(yè)4.Unspecifiedoverseastravel.Presentedwithtemperature38.4C三日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第27頁(yè)5.MalerecentlyreturnedtoAustraliaafterbackpackingthroughAsia.Historyofflulikesymptoms.白細(xì)胞瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第28頁(yè)6."NewAustralian"previouslyfromMalaysia.Intermittenttemperaturesandheadaches.白細(xì)胞瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第29頁(yè)7.Achesandpains,withfever.?GlandularFever,?malaria.間日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第30頁(yè)惡性瘧環(huán)狀體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第31頁(yè)18.RecenttriptoSouthernIndia-headachesandvaguelyunwell.間日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第32頁(yè)19.PatienthasbeenholidayingintheDominicanRepublic,nowfeverish.惡性瘧雄配子體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第33頁(yè)21.AmemberoftheUNforcesinEastTimor.Presentedwithhightemperature.惡性瘧雌雄配子體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第34頁(yè)間日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第35頁(yè)惡性瘧雌配子體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第36頁(yè)間日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第37頁(yè)血檢質(zhì)量考評(píng)

試驗(yàn)室條件血檢工作要求考評(píng)標(biāo)準(zhǔn)瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第38頁(yè)試驗(yàn)室條件人員：各單位最少有1名專職或兼職經(jīng)過(guò)瘧原蟲檢驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)人員。熟悉瘧疾血片制作，瘧原蟲鏡下特征，能負(fù)擔(dān)瘧疾血檢工作。環(huán)境：試驗(yàn)室相對(duì)獨(dú)立，可做瘧疾血檢。設(shè)備：顯微鏡、玻片、玻片架、玻片合、染色缸。試劑：吉氏染液、甲醇、二甲苯、鏡油。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第39頁(yè)血檢工作要求制訂《瘧原蟲鏡檢試驗(yàn)室管理制度》、《瘧原蟲鏡檢操作規(guī)程》對(duì)血檢對(duì)象進(jìn)行認(rèn)真登記，填寫《瘧原蟲鏡檢記錄表》，按接樣次序編號(hào)。編號(hào)：醫(yī)院名稱代碼＋序號(hào)。保留鏡檢過(guò)全部血片，以備上級(jí)抽樣復(fù)查，經(jīng)上一級(jí)機(jī)構(gòu)同意后方可清洗。陽(yáng)性血片須專員管理。血液標(biāo)本有潛在生物危害，在試驗(yàn)室血檢工作、標(biāo)本保留中應(yīng)嚴(yán)格恪守《試驗(yàn)室生物安全通用要求》。瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第40頁(yè)縣（市/區(qū)）全球基金瘧疾項(xiàng)目發(fā)燒病人瘧原蟲血檢記錄表血檢單位：、序號(hào)姓名年紀(jì)性別居住地址外出史及地點(diǎn)職業(yè)發(fā)病日期體溫（oC)臨床初診血檢日期血檢方法血檢結(jié)果檢驗(yàn)人署名血樣編號(hào)鏡檢RDT陰性PfPvPmPo混合1234累計(jì)瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第41頁(yè)瘧原蟲血檢考評(píng)標(biāo)準(zhǔn)(1)項(xiàng)目檢驗(yàn)內(nèi)容質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考評(píng)分值好分值中分值差分值血片制作厚血膜(25分）血量（5分）4～5цl5略多或略少3過(guò)多或過(guò)少1位置（5分）玻片右1/35稍偏右4偏右過(guò)多3直徑（5分）0.8～1.0cm50.7～0.8或1.0～1.2cm3<0.7或>1.2cm1外觀(10分)圓形厚膜均勻,邊緣整齊10圓形稍不均不整齊8厚薄不勻影響著色5薄血膜(25分）血量（5分）1～1.5цl5略多或略少3過(guò)多或過(guò)少1位置（5分）直徑（5分）外觀(10分）玻片1/2～1/3處5稍偏右或偏左4偏右或偏左過(guò)多32.5～2.0cm5稍大或稍小3過(guò)多或過(guò)少1舌狀厚薄均勻10舌狀稍不均5厚薄不勻呈波浪型3考評(píng)標(biāo)準(zhǔn)瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第42頁(yè)瘧原蟲血檢考評(píng)標(biāo)準(zhǔn)（2）項(xiàng)目檢驗(yàn)內(nèi)容質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考評(píng)分值好分值中分值差分值血片染色質(zhì)量(15分)外觀（5分）藍(lán)紫色5深藍(lán)色3紅色或灰白色2鏡下(10分)白細(xì)胞、瘧原蟲胞漿藍(lán)色，核紅色10染色過(guò)深，原蟲胞漿與核均呈深藍(lán)色8染色過(guò)淺，胞漿藍(lán)色不易顯見，核淡紅5血片清潔度(10分)外觀（5分）光潔無(wú)油灰5稍有油污2油灰粘連2鏡下（5分）無(wú)沉渣5稍有沉渣2沉渣多或有雜菌2瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)第43頁(yè)瘧原蟲血檢考評(píng)標(biāo)準(zhǔn)（3）項(xiàng)目檢驗(yàn)內(nèi)容使用標(biāo)準(zhǔn)扣分標(biāo)準(zhǔn)考評(píng)分值顯微鏡使用（25分）使用前（10分）顯微鏡潔凈，有綢布遮蓋，接物鏡不與聚光器對(duì)接顯微鏡稍有灰（-2分），無(wú)綢布遮蓋