實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌鑒定中的幾種生化試驗(yàn)詳解演示文稿

實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌鑒定中的幾種生化試驗(yàn)詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有26頁\編輯于星期五優(yōu)選實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌鑒定中的幾種生化試驗(yàn)現(xiàn)在是2頁\一共有26頁\編輯于星期五

常見的生化反應(yīng)碳水化合物代謝試驗(yàn)碳源和氮源利用試驗(yàn)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)各種酶類試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)（MR）V-P試驗(yàn)檸檬酸鹽利用試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)IMViC試驗(yàn)硝酸還原酶試驗(yàn)，淀粉水解試驗(yàn)現(xiàn)在是3頁\一共有26頁\編輯于星期五內(nèi)容一、糖發(fā)酵試驗(yàn)2、V-P試驗(yàn)1、吲哚試驗(yàn)三、淀粉水解試驗(yàn)二、IMViC試驗(yàn)3、MR試驗(yàn)現(xiàn)在是4頁\一共有26頁\編輯于星期五說明2、本次實(shí)驗(yàn)均按傳統(tǒng)的生化試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)現(xiàn)代快速生化檢測(cè)1、本次細(xì)菌的生化試驗(yàn)僅選擇5項(xiàng)代表性試驗(yàn)現(xiàn)在是5頁\一共有26頁\編輯于星期五現(xiàn)代快速生化檢測(cè)現(xiàn)代快速生化檢測(cè)采用的方式：

簡(jiǎn)化試劑配制簡(jiǎn)化操作過程底物，指示劑、抑制劑的改良操作、檢測(cè)的高度自動(dòng)化現(xiàn)在是6頁\一共有26頁\編輯于星期五4、自動(dòng)化微生物鑒定系統(tǒng)

現(xiàn)代快速生化檢測(cè)1、顯色培養(yǎng)基3、快速檢測(cè)試紙2、生化鑒定管現(xiàn)在是7頁\一共有26頁\編輯于星期五海博金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基環(huán)凱沙門氏菌顯色培養(yǎng)基顯色培養(yǎng)基現(xiàn)在是8頁\一共有26頁\編輯于星期五生化鑒定管檸檬酸鹽生化鑒定管木糖生化鑒定管現(xiàn)在是9頁\一共有26頁\編輯于星期五大盒生化鑒定管現(xiàn)在是10頁\一共有26頁\編輯于星期五快速檢測(cè)試紙現(xiàn)在是11頁\一共有26頁\編輯于星期五使用生化鑒定試劑盒對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌進(jìn)行細(xì)菌鑒定。全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)VITEK?全自動(dòng)化微生物鑒定系統(tǒng)現(xiàn)在是12頁\一共有26頁\編輯于星期五1、掌握細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理，掌握細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)的測(cè)定方法；2.通過不同細(xì)菌對(duì)不同含碳、含氮化合物的分解利用情況，了解細(xì)菌代謝類型的多樣性；3、了解細(xì)菌在不同培養(yǎng)基中的不同生長(zhǎng)現(xiàn)象及其代謝產(chǎn)物在鑒別細(xì)菌中的意義。[目的要求]現(xiàn)在是13頁\一共有26頁\編輯于星期五一、糖發(fā)酵試驗(yàn)[實(shí)驗(yàn)原理]根據(jù)細(xì)菌分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。各種糖細(xì)菌有機(jī)酸（乳酸、醋酸、丙酸等）氣體

（氫氣，二氧化碳等）產(chǎn)酸：指示劑（溴甲酚紫），由紫色（pH6.8以上)變?yōu)辄S色（pH5.4以下)產(chǎn)氣

倒置的德漢氏小管現(xiàn)在是14頁\一共有26頁\編輯于星期五二、IMViC試驗(yàn)是一組試驗(yàn)；

IMViC是靛基質(zhì)試驗(yàn)或稱吲哚試驗(yàn)（I）、甲基紅試驗(yàn)（M）、V-P試驗(yàn)（V）和檸檬酸鹽利用試驗(yàn)（C）的縮寫，i是為了發(fā)音的需要加上的；常用于革蘭氏陰性的腸道細(xì)菌檢測(cè)中，可用于區(qū)分產(chǎn)氣桿菌屬和大腸桿菌屬。現(xiàn)在是15頁\一共有26頁\編輯于星期五

1、吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)

[原理]色氨酸幾乎存在所有蛋白質(zhì)中，某些細(xì)菌如大腸桿菌等具有色氨酸酶。蛋白胨中的色氨酸色氨酸酶靛基質(zhì)（無色吲哚）吲哚試劑（對(duì)二甲基氨基苯甲醛）

玫瑰吲哚（陽性反應(yīng)）現(xiàn)在是16頁\一共有26頁\編輯于星期五

2、V-P試驗(yàn)

[原理]葡萄糖丙酮酸縮合乙酰乳酸脫羧乙酰甲基甲醇?jí)A性條件二乙酰與培養(yǎng)基中精氨酸的胍基結(jié)合紅色化合物（陽性反應(yīng)）現(xiàn)在是17頁\一共有26頁\編輯于星期五3、MR試驗(yàn)

[原理]葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH值降至4.5以下培養(yǎng)基變紅(陽性反應(yīng))甲基紅指示劑非酸性末端產(chǎn)物(醇、醛等）pH值＞6.2甲基紅指示劑培養(yǎng)基橘黃色(陰性反應(yīng))現(xiàn)在是18頁\一共有26頁\編輯于星期五淀粉三、淀粉水解試驗(yàn)

[原理]檢測(cè)細(xì)菌是否可以產(chǎn)生分泌到胞外的淀粉酶。淀粉酶糊精，雙糖和單糖等碘液不出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)，菌落周圍呈現(xiàn)透明圈藍(lán)色現(xiàn)在是19頁\一共有26頁\編輯于星期五

[實(shí)驗(yàn)材料]培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基，乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，蛋白胨水培養(yǎng)基，固體淀粉培養(yǎng)基。菌種：大腸桿菌，枯草桿菌，普通變形菌，產(chǎn)氣腸桿菌試劑：盧戈氏碘液，甲基紅指示劑，40%KOH，5%α-萘酚，吲哚試劑，1.6%溴甲酚紫儀器：略現(xiàn)在是20頁\一共有26頁\編輯于星期五[方法和步驟]1、

試管（平板）標(biāo)記

葡萄糖發(fā)酵管乳糖發(fā)酵管吲哚試驗(yàn)管V-P試驗(yàn)管淀粉水解試驗(yàn)平板：4個(gè)各9支用記號(hào)筆或者標(biāo)簽紙?jiān)谄桨宓撞縿澇苫蛘邊^(qū)分為2部分現(xiàn)在是21頁\一共有26頁\編輯于星期五

2、接種培養(yǎng)

試管接種：以無菌操作分別接種少量待測(cè)菌到以上相應(yīng)試管中，每菌接2支管,留1管作空白對(duì)照不接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。

葡萄糖和乳糖微量發(fā)酵管接種:采用接種針平板接種：以無菌操作分別接種少量待測(cè)菌到以上相應(yīng)平板中,每平板接2種菌,將平板倒置在37℃溫箱中培養(yǎng)24h.

現(xiàn)在是22頁\一共有26頁\編輯于星期五

①確定有無細(xì)菌生長(zhǎng)？②確定各菌對(duì)糖的分解利用情況：不利用：用

“－”

表示產(chǎn)酸：用“+”表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣：用⊕

表示3、

觀察記錄（直接觀察記錄或加入試劑反應(yīng)后再觀察記錄）

糖發(fā)酵試驗(yàn)（直接觀察記錄）現(xiàn)在是23頁\一共有26頁\編輯于星期五

1、確定有無細(xì)菌生長(zhǎng)？2、向蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入乙醚1-2mL，用力振蕩，靜置分層后，沿管壁緩緩加入5-10滴吲哚試劑，若上層乙醚層呈玫瑰紅色者，為吲哚試驗(yàn)反應(yīng)陽性。吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)

3、“+”表示陽性反應(yīng)，“-”表示陰性反應(yīng)?，F(xiàn)在是24頁\一共有26頁\編輯于星期五1、確定有無細(xì)菌生長(zhǎng)？并用空試管將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液分為2半；2、將其中1半葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入5-10滴

40%KOH，然后加入等量的5%α-萘酚溶液，用力振蕩，再放入37℃溫箱中保溫15-30min。若培養(yǎng)物呈紅色者，為VP試驗(yàn)反應(yīng)陽性V-P試驗(yàn)

3、“+”表示陽性反應(yīng)，“-”表示