實驗植物細(xì)胞切片的制作

實驗植物細(xì)胞切片的制作第1頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六二、實驗用品和材料1、顯微鏡、尖嘴鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、吸水紙、解剖針、紗布、碘液。2、蠶豆（芹菜）莖和葉3、洋蔥或玉米根尖縱切永久制片4、南瓜或向日葵莖橫、縱切永久制片.5、洋蔥鱗葉、馬鈴薯塊莖。第2頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六三、內(nèi)容與方法（一）臨時切片制作１、徒手切片法（重點）２、整體裝片

適合于植物體形小而扁平的材料。如菌絲、孢子束、蘚類。３、涂抹法

用于極小的植物體或組織。如細(xì)菌，酵母，花粉，淀粉，晶體等。第3頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六4、撕片法

適用于某些植物莖、葉容易撕下表皮的植物，如洋蔥鱗莖、蠶豆葉等。5、壓片法適用于幼嫩組織中細(xì)胞的觀察，如根尖，莖尖生長點的細(xì)胞有絲分裂及花粉母細(xì)胞染色體等。第4頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六徒手切片法第5頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六徒手切片法

1、取材選取待觀察的植物材料，初步切取大約3cm長的小塊，再依切片的具體要求，將組織塊修整為0.5cm的材料塊。第6頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六2、切片1）以左手夾住材料，用右手平穩(wěn)地握住刀片。2）使刀片與材料的斷面保持平行，刀口自左上方斜向右下方，動作要均勻有力。3）材料與刀片須常以水濕潤。4）切下的薄片，立即用毛筆蘸水后粘取，移入盛有清水的培養(yǎng)皿內(nèi)。第7頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六3、選片1）切片完整，在培養(yǎng)皿中選擇薄而均勻，且切面完整的組織切片撈出;2）放在載玻片上作臨時水裝片，然后置于顯微鏡下觀察；3）如果結(jié)構(gòu)能被清晰地顯示出來，則可制成永久保存封片。第8頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六石蠟切片機第9頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六（二）永久裝片的制作1、材料預(yù)處理

將材料裝在25ml規(guī)格的小指管，加入甘油—酒精軟化劑（甘油1份，70%酒精1份）8ml封蓋后在電熱恒溫水浴鍋50℃18h，第二天升溫至60℃8h進(jìn)行軟化。第10頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六2、蠟塊制取1）逐級脫水

將上述經(jīng)軟化的材料轉(zhuǎn)入250ml已洗凈的輸液瓶中加入40ml，70%酒精脫水24h。分別加入各級酒精40ml，70%酒精脫水24h，85%酒精脫水12h，95%酒精脫水2h，無水酒精脫水1h。同時回收各級酒精。2）染色

番紅酒精染液染色（1g番紅溶于100ml50%酒精中，紗布過濾）染色24h。第11頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六3）透明

轉(zhuǎn)入1/2二甲苯＋1/2無水酒精混合液20ml透明1h，純二甲苯20ml透明1h,再用純二甲苯20ml透明40min，并回收各液。4）浸蠟

將透明過的材料轉(zhuǎn)入50ml小燒杯,在恒溫箱內(nèi)加入預(yù)先在溫度保持在56～58℃恒溫箱溶化并過濾的石蠟15ml，使材料完全被純二甲苯與石蠟浸沒，并使溫度保持在36～38℃,過夜浸蠟24h，待二甲苯完全揮發(fā)，回收石蠟,再加入溶化并過濾的純石蠟40ml，溫度保持在36～38℃1h，升溫至56℃，使石蠟保持溶化狀態(tài)。第12頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六5）包埋：將浸蠟完全的材料倒入預(yù)先制成的光滑的硬紙（10.0×1.0×1.0㎝）制成的紙盒中制取蠟塊，在恒溫箱門的低坎處擺好紙盒，并寫上名稱，使其一面緊貼恒溫箱的受熱金屬板，紙盒底面緊貼恒溫箱底面金屬板，倒入溶化石蠟0.2～0.3㎝厚的薄層，2min后待薄層稍有凝固時將材料依次排列于其上，再倒入溶化石蠟，并用燒熱的解剖針刺破其中的氣泡，提著紙盒兩端預(yù)留的盒耳將紙盒浸入盛有冷水的盆中冷卻制成石蠟塊。第13頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六6）石蠟塊的修整：剝?nèi)ゼ埡?，用銳利的單面刀片把石蠟塊切分為2㎝長的小蠟塊，并將各小蠟塊的各面修整平，再將其修成長楔形。3、切片1）固定石蠟塊：用在酒精燈上預(yù)熱好的解剖刀，融化修整好的石蠟塊中少許蠟后，立即粘牢在小木塊（2.5

×2×1.5cm）上，待蠟完全凝固結(jié)實后，將小木塊夾入切片機的固定夾板中固定；2）切片：調(diào)整切片機的切片厚度為8～14μm,切取石蠟塊薄片。第14頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六4、粘貼展平

選取潔凈的載玻片，于中央用火柴棒粘取明膠粘貼劑（明膠2g電熱恒水浴鍋60℃水浴溶于1000ml蒸餾水，紗布過濾），展成一薄層或滴加一滴蛋白甘油（取雞蛋一個敲破流出蛋清，甘油即丙三醇，此粘貼劑較明膠粘貼劑理想），用細(xì)玻棒展成一薄層，加蒸餾水一滴，挑取理想的蠟帶貼于粘貼劑上，在酒精燈火焰稍過3～4來回，或恒溫37℃展片臺6min，使蠟展在粘貼劑上并展平。將展平的材料連同一側(cè)貼有標(biāo)簽的載玻片，置于37℃電熱恒溫箱24h，使水分蒸干，或恒溫37℃展片臺12h，或室內(nèi)自然晾干。第15頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六5、染色制片1）脫蠟：將粘有蠟片的載玻片排列在裝片架上，轉(zhuǎn)入盛有400ml純二甲苯的1000ml大燒杯中20min，杯口用塑料袋封嚴(yán)，再轉(zhuǎn)入盛有400ml純二甲苯的1000ml大燒杯中10min，杯口同樣用塑料袋封嚴(yán)，使石蠟完全溶解。2）過渡：將脫蠟完全的裝片架轉(zhuǎn)入盛有400ml1/2二甲苯＋1/2純酒精混合液的1000ml大燒杯中過渡5min，杯口仍用塑料袋封嚴(yán)。第16頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六3）下降至70%酒精（水）：分別經(jīng)400ml純酒精、95%、85%、70%酒精割400ml（50%及30%酒精下降至蒸餾水），并回收各液。4）番紅復(fù)染色：400ml1%番紅酒精（水液）再染色2h。回收染液，并用自來水洗去多余的染液。5）繼續(xù)脫水：用30%、50%和70%酒精400ml各處理30s～1min，并回收各液。6）固綠復(fù)染：用0.1%固綠的95%酒精400ml復(fù)染10～30s，回收染液。第17頁，共18頁，2023年，2月20日，星期六7）再繼續(xù)脫水：用95%酒精和兩次純酒精徹底脫水，每次10s～1min，回收各液。8）透明：用純酒精和二甲苯各半的