高級組織學生殖輔助技術

生殖輔助技術人體解剖學與組織胚胎學系高級組織學生殖輔助技術第1頁生育是人類基本生理功效，是人類一個本能。高級組織學生殖輔助技術第2頁高級組織學生殖輔助技術第3頁一、男性生育能力顯著下降

國家計劃生育委員會科學技術研究所張樹成等人在論文中指出，男性精液質量隨不一樣年代呈顯著降低，而中國男性精液質量也呈顯著下降趨勢。高級組織學生殖輔助技術第4頁

張樹成等人得出了觸目驚心結論：男性精液質量顯著下降。其中以精子數目標降低最為顯著，降低40%以上，精子活動率降低8.4%；精子正常形態(tài)降低了7.3%；精液量降低了4.9%。高級組織學生殖輔助技術第5頁為何男性生育力竟下降得這么厲害？高級組織學生殖輔助技術第6頁張樹成等人認為主要是環(huán)境原因所致，即環(huán)境對生育力影響，男性比女性更敏感。

高級組織學生殖輔助技術第7頁生殖輔助技術：人工授精體外授精與胚胎移植顯微授精技術配子輸卵管移植供卵供胚胎種植前遺傳學診療高級組織學生殖輔助技術第8頁人工授精定義：由醫(yī)師將精子注入到女性生殖道內，包含陰道內、宮頸內、宮腔內、輸卵管內甚至卵泡內精子注射。分類：1、按精子起源：

夫精人工授精（AIH）：artificialinseminationwithhusband’ssperm供精人工授精（AID）：2、按精子注射部位：高級組織學生殖輔助技術第9頁人工授精適應癥一、男方原因存在妨礙正常性交時精子進入陰道解剖異常原因：精神、神經原因：中度精液異常：高級組織學生殖輔助技術第10頁二、女方原因：存在妨礙精子在女性生殖道運行原因：陰道與宮頸狹窄等宮頸原因：如宮頸粘液高級組織學生殖輔助技術第11頁人工授精實施要素：足夠數量和活力正常形態(tài)精子正常排卵最少有一條輸卵管通暢而且功效正常高級組織學生殖輔助技術第12頁人工授精方法：一、女性準備自然周期人工授精：將精子在最靠近排卵時間段注入女性生殖道內（基礎體溫測量、B超檢測、尿LH測試和宮頸粘液評分）控制性誘導排卵：FSH、hCG和黃體酮其它準備：陰道清潔度、盆腔檢驗和B超、輸卵管通水、輸卵管造影等高級組織學生殖輔助技術第13頁二、男性精子準備新鮮精液：凍存精子準備：精子洗滌高級組織學生殖輔助技術第14頁高級組織學生殖輔助技術第15頁方法：早期不清洗后穹隆注射法宮頸周圍或宮頸管內人工授精：0.5-1ml宮頸管，其余在陰道前穹隆加用宮帽人工授精宮腔內人工授精：慣用、成功率較高高級組織學生殖輔助技術第16頁供精人工授精AID適應癥不可逆無精子癥，嚴重少精癥、弱精癥和畸精癥；男方因輸精管結扎后復通失??；射精障礙男方和（或）家族有不宜生育嚴重遺傳性疾病。對1-4,要解釋同意后，行AID；高級組織學生殖輔助技術第17頁（一）女方條件年紀在生育期身體健康，完全能承受妊娠卵巢功效正常和盆腔檢驗正常輸卵管通暢高級組織學生殖輔助技術第18頁（二）供精者條件年紀、身高、五官等無全身急慢性病內外生殖器正常無性傳輸性疾病無各型肝炎本人和直系血親無遺傳病ABO及RH血型檢驗精液檢驗高級組織學生殖輔助技術第19頁（三）供精者篩選程序

1、最初評定：

供精者年紀必須是在22－45歲之間，能真實提供本人及家族組員普通病史和遺傳病史，回答醫(yī)師提出其它相關問題，按要求提供精液標本以供檢驗。精子庫人員將與供精者面談。供精者不應屬于AIDS高危人群，沒有性傳輸性疾病史，沒有全身性疾病和嚴重器質性疾病，無長久接觸放射線和有毒物質，無吸毒、酗酒、同性戀等行為。2、精液分析：

每次精液標本都必須用世界衛(wèi)生組織規(guī)范方法進行分析，包含精子密度、活動率、形態(tài)學等指標，這些標本在冷凍前后均要進行分析比較，解凍后精子活動率要到達40%以上。

高級組織學生殖輔助技術第20頁3、感染性疾病檢測：

全部供精者都要進行血清HIV抗體、乙肝兩對半、丙肝抗體、梅毒、巨細胞病毒抗體等檢測。對精液進行淋病、支原體、衣原體檢驗和細菌培養(yǎng)。4、醫(yī)學和遺傳評價：

每個供精者都將進行一次體檢，進行血型以及RH檢測，還要進行血細胞染色體檢驗。他們醫(yī)療和遺傳史將被遺傳醫(yī)生進行評價，廣東省計劃生育?？漆t(yī)院人類精子庫還依據廣東省遺傳病發(fā)病特點，增加對供精者進行地中海貧血和葡萄糖－6－磷酸脫氫酶缺乏癥篩查。必要時還進行供精者心理學評定。5、精液凍融復蘇檢驗：

成為供精者后，每次精液標本在冷凍前后均要進行評價，全部沒有到達供精最低標準標本都將被棄去。全部標本都要存放足夠時間（180天檢疫期），供精者要重復作感染性疾病檢測。

高級組織學生殖輔助技術第21頁（四）試驗室檢驗1、染色體檢驗：供精者必須染色體常規(guī)核型分析正常。2、傳染性疾病檢驗

①供精者乙肝抗原抗體及丙肝抗體檢驗正常。

②供精者梅毒、淋病、艾滋病檢驗陰性。

③供精者衣原體、支原體、巨細胞病毒檢驗陰性。3、精液常規(guī)分析及供精質量要求

對供精者精液要做常規(guī)檢驗。取精前要禁欲一周。精液質量要求高于世界衛(wèi)生組織標準：精液液化時間10-60分鐘，容積為2-6毫升，密度大于60x106/毫升，成活率大于60%，畸形率小于30%。

精液進行常規(guī)細菌培養(yǎng)，以排除致病菌感染。4、ABO血型及Rh血型高級組織學生殖輔助技術第22頁（五）供精者知情同意書

1、提供精液目標是為了治療不育癥，如同獻血一樣，是一個人道主義行為；2、提供精液應完全出于自愿，是無償，只能取得誤工、誤餐及交通補助等，不能以經濟利益而為之；3、精液只能提供給國家衛(wèi)生部同意人類精子庫，而不能提供給其它單位或個人；4、在提供精液前要經過嚴格健康檢驗，供精者要如實提供病史配合體格檢驗，提供血液、精液等標本進行檢測。健康檢驗不合格不能作為供精者，健康檢驗體格者與人類精子庫簽署《供精協(xié)議書》后，才能作為供精者；高級組織學生殖輔助技術第23頁5、供精者全部資料都由人類精子庫專員保密保留，不會向受精者泄露，更不會向其它人泄露；6、供精者最少提供30份精液標本；7、供精者精液，假如已經有5位受精者受孕，該供精者精液標本全部廢除，今后亦不再作為供精者；8、供精者不能追問受精者及出生后代任何情況，對出生后代沒有任何權利，也不負擔任何義務。高級組織學生殖輔助技術第24頁（六）捐精流程

1.首先進行捐精咨詢。2.引導排精，作精液檢驗。3.合格后抽血化驗，約7～10天出匯報。

4.精液與化驗正常者開始捐精，捐精前簽署知情同意書。5.每3－5天前來捐精一次，每次均給予對應交通、營養(yǎng)等補助。6.六個月后再次復查，給予交通、營養(yǎng)等補助。

高級組織學生殖輔助技術第25頁（七）AID方法女方準備：檢驗正常相關文件簽署精液準備授精方法：1ml（陰道部宮頸處或宮頸管內）隨訪高級組織學生殖輔助技術第26頁體外授精和胚胎移植

（invitrofertilizationandembryotransfer）原理：將女方卵巢內成熟卵母細胞取出，在體外與來自配偶精子共同培養(yǎng)，發(fā)生授精過程。受精卵發(fā)育到胚胎階段后，再將其種植到子宮腔中繼續(xù)發(fā)育生長成胎兒。高級組織學生殖輔助技術第27頁（一）適應癥女方各種原因造成配子運輸障礙子宮內膜異位癥男方原因：少、弱、畸精癥等原因不明性不孕癥頑固性多囊卵巢綜合征高級組織學生殖輔助技術第28頁1、控制性超排卵在實施IVF-ET手術中，利用促排卵藥品來增強與改進現(xiàn)存卵巢功效，企圖到達不受自然周期所限制，獲取多個健康卵子提供受精后胚胎移植并盡可能使黃體與內膜功效同時能對妊娠發(fā)生與妊娠維持想適應。（二）基本步驟高級組織學生殖輔助技術第29頁高級組織學生殖輔助技術第30頁高級組織學生殖輔助技術第31頁高級組織學生殖輔助技術第32頁2、取卵在陰道B超引導下用穿刺針抽取卵泡。3、找卵在顯微鏡下將抽取卵泡液置于器皿中快速尋找卵冠丘復合體（OCCCS）。高級組織學生殖輔助技術第33頁高級組織學生殖輔助技術第34頁高級組織學生殖輔助技術第35頁4、受精（精液處理同人工授精）卵冠丘復合體經孵育4~6h后加入適當數量獲能精子進行授精。5、觀察

16h后剝除顆粒細胞，鏡下觀察見兩原核者為受精。繼續(xù)培養(yǎng)36~42小時觀察胚胎分裂到4~8細胞可考慮行胚胎移植。需要者也可培養(yǎng)到第5~6天，做囊胚移植。高級組織學生殖輔助技術第36頁5、種植將胚胎吸入移植管中，經宮頸管將胚胎送入宮腔臥床1~3h。6、黃體支持移植后注射黃體酮，14天后行血β-hCG測定確定是否妊娠。高級組織學生殖輔助技術第37頁IVF高級組織學生殖輔助技術第38頁高級組織學生殖輔助技術第39頁高級組織學生殖輔助技術第40頁胚胎宮內移植移植時間：體外受精后42-45h?，F(xiàn)多在體外受精后3天，有時培養(yǎng)到5天至囊胚。移植方法：檢驗是否移植進去。高級組織學生殖輔助技術第41頁高級組織學生殖輔助技術第42頁代孕母親（衛(wèi)生部暫禁）先天性子宮缺如；因病行子宮切除術；女方有妊娠或分娩禁忌癥；高級組織學生殖輔助技術第43頁胚胎冷凍1983年人類第一次冷凍胚胎成功適應癥IVF或ICSI治療中多出胚胎；胚胎移植發(fā)生困難；胚胎種植前診療等候結果；人工贈卵等候受者子宮內膜同時；建立胚胎庫；高級組織學生殖輔助技術第44頁顯微操作技術顯微受精技術：透明帶部分切割、透明帶下受精法及單精子卵胞漿顯微注射極體與卵裂球活檢卵漿置換、細胞核移植輔助孵出嵌合體技術高級組織學生殖輔助技術第45頁高級組織學生殖輔助技術第46頁機械法PZD高級組織學生殖輔助技術第47頁顯微操作輔助受精高級組織學生殖輔助技術第48頁ICSI受精生物學特點：正常受精：產生頂體反應精子與卵膜融合，卵子激活以及女性、男性原核形成。ICSI：注射時精子頂體狀態(tài)不明，而卵與精子質膜融合也不存在。單精子卵漿內注射高級組織學生殖輔助技術第49頁適應癥嚴重少精癥弱畸精癥少弱畸精癥無精癥（阻塞性及非阻塞性）以往IVF時卵母細胞均不受精或受精率低下其它：高級組織學生殖輔助技術第50頁ICSI禁忌癥染色體異常嚴重先天畸形高級組織學生殖輔助技術第51頁ICSI技術操作精子起源及處理手淫法取精。附睪取精:適合用于阻塞性無精癥。近期有些人用經皮精子抽吸法。高級組織學生殖輔助技術第52頁PESA法附睪取精高級組織學生殖輔助技術第53頁MESA及附睪精子高級組織學生殖輔助技術第54頁

睪丸取精：主要適合用于非阻塞性無精癥，切取一小塊睪丸組織方法獲取精子或精子細胞（開放式活檢）。也可用細針組織抽吸睪丸活檢法。高級組織學生殖輔助技術第55頁活檢槍及抽吸法睪丸取精高級組織學生殖輔助技術第56頁卵子起源與處理卵子普通在促超排卵后,經陰道B超介導,用16G或17G穿刺針經陰道獲取。取卵后4小時，進行去卵丘結構處理。高級組織學生殖輔助技術第57頁設備；顯微操作皿準備；顯微注射；精子制動與獲??；固定卵子與注射；顯微注射高級組織學生殖輔助技術第58頁設備高級組織學生殖輔助技術第59頁高級組織學生殖輔助技術第60頁ICSI示意圖高級組織學生殖輔助技術第61頁ICSI操作過程高級組織學生殖輔助技術第62頁ICSI過程(A)高級組織學生殖輔助技術第63頁ICSI過程(B)高級組織學生殖輔助技術第64頁注射15-18小時后，檢驗是否受精（ICSI后精卵結合過程普通較正常為快，6小時內33%可出現(xiàn)原核，8-20小時89%-91%出現(xiàn)原核）。受精卵繼續(xù)培養(yǎng)24小時，觀察有沒有卵裂,然后經陰道移植3-4個質量優(yōu)良胚胎。剩下胚胎冷凍保留。高級組織學生殖輔助技術第65頁高級組織學生殖輔助技術第66頁高級組織學生殖輔助技術第67頁ICSI妊娠后代隨訪對ICSI安全性憂慮：ICSI操作對卵子是具創(chuàng)傷性；ICSI在全方面動物試驗之前就廣泛應用于人類；選取精子原是屬于被自然淘汰；睪丸采集精子可能未發(fā)育成熟，基因印跡還未發(fā)育完成；少弱及無精子缺點是否會殃及后代。高級組織學生殖輔助技術第68頁輔助“破殼”高級組織學生殖輔助技術第69頁輔助孵出(AH)8細胞期AH晚期囊胚AH高級組織學生殖輔助技術第70頁高級組織學生殖輔助技術第71頁種植前遺傳學診療高級組織學生殖輔助技術第72頁1.PGD指征:不孕夫婦中女方年紀較大(如>35歲,也有人認為年紀更大者)；不孕夫婦患X-伴性遺傳病或為X-伴性遺傳病攜帶者，有X-伴性遺傳病家族史;胚胎質量差，重復IVF失?。慌咛シ至堰^快；嚴重男性原因不育；高級組織學生殖輔助技術第73頁夫婦中任何一方或雙方有染色體核型異常(數目及結構異常)；習慣性流產患者；不孕夫婦中一方或雙方患有已明確為基因突變所致疾病(單基因遺傳病)，或為攜帶者，或有家族史者，如染色體顯性遺傳病；染色體微缺失綜合征；與精子發(fā)生相關染色體微缺失。

高級組織學生殖輔助技術第74頁2.PGD方法取材:內徑為5~40m活檢針。極體、2-10細胞(或更多)胚胎卵裂球細胞、胚囊壁滋養(yǎng)外胚層細胞。高級組織學生殖輔助技術第75頁取卵裂球過程高級組織學生殖輔助技術第76頁卵裂球活檢高級組織學生殖輔助技術第77頁高級組織學生殖輔助技術第78頁聚合酶鏈反應(PCR)：單細胞PCR、巢式PCR、半巢式PCR，結合(linkage)PCR，熒光PCR等。PCR擴增成功率在90%以上，個別71%，極體66.1%左右。PCR優(yōu)點：需要樣本量少，快速。高級組織學生殖輔助技術第79頁高級組織學生殖輔助技術第80頁熒光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)固定，特異探針(已標上熒光素)去