1基因工程的基本操作程序課件

一、基因工程別名、操作對象、操作水平、操作環(huán)境、實質(zhì)或原理各是什么二、限制酶的作用三、DNA連接酶的作用四、運輸基因的載體必須具備的條件五、DNA連接酶有連接單鏈DNA的本領(lǐng)嗎六、DNA連接酶與DNA聚合酶的異同點點生物學教學濟寧一中生物教研室2010.3.3基因工程的操作程序主要包括四個基本步驟：1）目的基因的獲取2）基因表達載體的構(gòu)建3）將目的基因?qū)胧荏w細胞4）目的基因的檢測與鑒定2、目的基因的獲得方法：①從基因文庫獲取目的基因未知序列②利用PCR技術(shù)擴增目的基因③通過化學方法直接人工合成

已知序列①從基因文庫中獲取目的基因：基因文庫:將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因,稱為基因文庫(genelibrary)基因組文庫:基因文庫中包含了一種生物所有的基因,這種基因文庫叫做基因組文庫.部分基因文庫:基因文庫中包含了一種生物的一部分基因,這種基因文庫叫做部分基因文庫.②利用PCR技術(shù)擴增目的基因

原理：DNA雙鏈復制的原理過程：熱解旋（90℃－95℃）→引物與單鏈互補結(jié)合（55℃－60℃）→DNA聚合酶作用下延伸（70℃－75℃）條件：DNA模板、引物、DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸③通過DNA合成儀直接人工合成條件：基因比較小且已知其序列

根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸順序推算出信使RNA核苷酸順序，然后按照堿激互補配對原則，推算出基因DNA的脫氧核苷酸順序。用游離脫氧核苷酸直接合成相應(yīng)的基因。2、目的：

①使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以復制遺傳給下一代②使目的基因能表達和發(fā)揮作用3、組成：目的基因；啟動子；終止子；標記基因啟動子終止子目的基因標記基因表達載體模式圖常用的受體細胞：有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細胞等。將目的基因?qū)胧荏w細胞的原理借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。

將目的基因?qū)胫参锛毎r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（感染雙子葉植物和裸子植物，對大多單子葉植物沒有感染力）基因槍法（常用于單子葉植物）花粉管通道法（轉(zhuǎn)基因抗蟲棉）

將目的基因?qū)雱游锛毎@微注射技術(shù)（“超級小鼠”）

受體細胞：受精卵

將目的基因?qū)胛⑸锛毎麑氪竽c桿菌的方法：鈣離子處理法

首先用Ca2+處理細胞,以增大細菌細胞壁的通透性,使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),這種細胞稱為感受態(tài)細胞.第二步是將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合,在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程.第三步目的基因在受體細胞內(nèi)，隨其繁殖而復制，由于細菌繁殖的速度非?？?，在很短的時間內(nèi)就能獲得大量的目的基因。2、層次：檢測目的基因是否插入了轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上①分子水平的檢測：檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)②個體生物學水平的鑒定檢測是否插入了目的基因原理：分子雜交技術(shù)過程：將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來→標記目的基因作探針→使其雜交檢測是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA原理：分子雜交技術(shù)檢測是否翻譯成蛋白質(zhì)原理：抗原--抗體雜交個體生物學水平的檢測（做抗蟲或抗病的接種實驗）1.運用現(xiàn)代生物技術(shù)，將蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因整合到棉花細胞中，為檢測實驗是否成功，最方便的方法是檢測棉花植株是否有（）A.抗蟲基因B