1基因工程的基本操作程序課件

一、基因工程別名、操作對象、操作水平、操作環(huán)境、實質(zhì)或原理各是什么二、限制酶的作用三、DNA連接酶的作用四、運輸基因的載體必須具備的條件五、DNA連接酶有連接單鏈DNA的本領(lǐng)嗎六、DNA連接酶與DNA聚合酶的異同點點生物學(xué)教學(xué)濟(jì)寧一中生物教研室2010.3.3基因工程的操作程序主要包括四個基本步驟：1）目的基因的獲取2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4）目的基因的檢測與鑒定2、目的基因的獲得方法：①從基因文庫獲取目的基因未知序列②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因③通過化學(xué)方法直接人工合成

已知序列①從基因文庫中獲取目的基因：基因文庫:將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因,稱為基因文庫(genelibrary)基因組文庫:基因文庫中包含了一種生物所有的基因,這種基因文庫叫做基因組文庫.部分基因文庫:基因文庫中包含了一種生物的一部分基因,這種基因文庫叫做部分基因文庫.②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

原理：DNA雙鏈復(fù)制的原理過程：熱解旋（90℃－95℃）→引物與單鏈互補結(jié)合（55℃－60℃）→DNA聚合酶作用下延伸（70℃－75℃）條件：DNA模板、引物、DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸③通過DNA合成儀直接人工合成條件：基因比較小且已知其序列

根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸順序推算出信使RNA核苷酸順序，然后按照堿激互補配對原則，推算出基因DNA的脫氧核苷酸順序。用游離脫氧核苷酸直接合成相應(yīng)的基因。2、目的：

①使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以復(fù)制遺傳給下一代②使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用3、組成：目的基因；啟動子；終止子；標(biāo)記基因啟動子終止子目的基因標(biāo)記基因表達(dá)載體模式圖常用的受體細(xì)胞：有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細(xì)胞等。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。

將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（感染雙子葉植物和裸子植物，對大多單子葉植物沒有感染力）基因槍法（常用于單子葉植物）花粉管通道法（轉(zhuǎn)基因抗蟲棉）

將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞顯微注射技術(shù)（“超級小鼠”）

受體細(xì)胞：受精卵

將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞導(dǎo)入大腸桿菌的方法：鈣離子處理法

首先用Ca2+處理細(xì)胞,以增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞.第二步是將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程.第三步目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)，隨其繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌繁殖的速度非?？?，在很短的時間內(nèi)就能獲得大量的目的基因。2、層次：檢測目的基因是否插入了轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上①分子水平的檢測：檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)②個體生物學(xué)水平的鑒定檢測是否插入了目的基因原理：分子雜交技術(shù)過程：將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來→標(biāo)記目的基因作探針→使其雜交檢測是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA原理：分子雜交技術(shù)檢測是否翻譯成蛋白質(zhì)原理：抗原--抗體雜交個體生物學(xué)水平的檢測（做抗蟲或抗病的接種實驗）1.運用現(xiàn)代生物技術(shù)，將蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因整合到棉花細(xì)胞中，為檢測實驗是否成功，最方便的方法是檢測棉花植株是否有（）A.抗蟲基因B