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萃取1、安排定律安排常數(shù)安排系數(shù)萃取因子2、1〕溶劑萃?。骸不蛭⑷堋车娜軇┲械娜芙舛然虬才畔禂?shù)的不同,使化合物從一種溶劑內(nèi)轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中,經(jīng)反復(fù)屢次萃取,局部化合物提取出來?!病巢僮鬟B續(xù)化,速度快,生產(chǎn)周期短;對(duì)熱敏物質(zhì)破壞少;承受多級(jí)萃取時(shí),溶質(zhì)濃縮倍數(shù)大,純化度高?!秤捎谟袡C(jī)溶劑使用量大,對(duì)設(shè)備和安全要求高。需要各項(xiàng)防火防水措施;〔2〕溶劑萃取會(huì)產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。2〕雙水相萃取原理:當(dāng)兩種分子聚合物之間存在相互排斥作用時(shí),即一種聚合物分子的四周將聚攏同種分子而排斥異種分子,當(dāng)?shù)竭_(dá)平衡時(shí),即形成分別富含不同聚合物的兩相?!病硰?qiáng)化相際傳質(zhì);自然分相時(shí)間段,傳質(zhì)與平衡過程速度快,回收率高,能耗低;含水量高,在接近生理環(huán)境的體系中進(jìn)展萃取,不易造成生活活性物質(zhì)失活或變性。易于連續(xù)操作,設(shè)備簡(jiǎn)潔,并且可直接與后續(xù)提純工序相連接一般不存在有機(jī)溶劑殘留問題,對(duì)環(huán)境污染小。缺點(diǎn):成相聚合物本錢較高,大多數(shù)年度較大,不肯定量掌握,水溶相聚化合物難以揮發(fā),使得需要反萃取,高聚合物回收困難。液膜萃?。涸恚菏怯伤芤夯蛴袡C(jī)溶劑構(gòu)成的液體薄膜,將與之不相溶的液體分隔開來,是其中一側(cè)中的液體中的溶質(zhì)選擇性透過液膜進(jìn)入另一側(cè),從而實(shí)現(xiàn)溶質(zhì)間的分別,做到萃取和反萃取,及目標(biāo)產(chǎn)物的分別和回收?!病臣奢腿『头摧腿∵^程;提高分別速度;降低設(shè)備投資和操作本錢?!病场?〕影響因素多,難以掌握。反膠團(tuán)萃取;原理:是利用外表活性劑在有機(jī)相中形成的反膠團(tuán),從而在有機(jī)相內(nèi)形成分散的親水性微環(huán)境,使生物分子在有機(jī)相〔萃取相〕內(nèi)存在于反膠團(tuán)的親水微環(huán)境中,消退了微生物分子,特別是蛋白類生物活性物質(zhì)難溶解在有機(jī)相或有機(jī)相中發(fā)生不行逆變性的現(xiàn)象。1〕選擇性能好,分別效果高;可提高萃取速度,與規(guī)模化的生產(chǎn);分別條件溫順,是生物物質(zhì)有較高的活性收率;分別料液處理簡(jiǎn)潔,操作便利;流等發(fā)生。缺點(diǎn):其爭(zhēng)論歷史較短,技術(shù)尚不成熟。超臨界流體萃取原理:利用超臨界流體在臨界溫度和壓力下,其密度近于液體,粘度接近于氣體,溶解力量加強(qiáng)等的特別的理化性質(zhì),使其在超臨界狀態(tài)下,與其待分別的物料接觸,萃取出目的產(chǎn)物,然后通過升溫或降壓的方法使得目標(biāo)產(chǎn)物得以分別?!齿腿∷俣雀哂谝后w萃取,特別適用于固態(tài)物質(zhì)的分別和提??;接近常溫條件下操作,能耗低于一般的精餾法,適用于熱敏感性和易氧化性物質(zhì)的分別;傳熱速度快,易于掌握溫度;適用于非揮發(fā)性物質(zhì)的分別;壓力和溫度可成為萃取過程受調(diào)整的參數(shù)。缺點(diǎn):該技術(shù)是幾十年來才進(jìn)展的一項(xiàng)高技術(shù),技術(shù)理論不成熟;其工藝要求較高,有關(guān)技術(shù)人員有待培育;萃取過程在高壓下進(jìn)展,對(duì)設(shè)備和整個(gè)系統(tǒng)耐壓行要求高。吸附分別技術(shù)和理論固定床:優(yōu)點(diǎn):流體在介質(zhì)層中根本上呈平推流,反混小。柱效率高。進(jìn)展。流化床:優(yōu)點(diǎn):A、壓降小,可處理高粘度或固定顆粒的粗料液;B、不需要特別吸附劑,設(shè)備操作簡(jiǎn)潔;缺點(diǎn):存在嚴(yán)峻的反混,特別是高徑比很小的流化床,使床層理論塔板數(shù)降低,吸附劑的利用率降低。膨脹床:優(yōu)點(diǎn):A、膨脹床中吸附劑例子的混合程度低,吸附效率高;B、兼有固定床、流化床的優(yōu)點(diǎn),流化的固相介質(zhì)根本可以懸浮在床內(nèi)的固定位置,流體流淌狀態(tài)以平推流的方式流經(jīng)床層,吸附效率高;C、集料液澄清,目標(biāo)產(chǎn)物濃縮和分別純化為一體的生物集成分別技術(shù)。缺點(diǎn):A、膨脹床操作比較簡(jiǎn)單和繁瑣,需要肯定的手工掌握,對(duì)操作人員的技能和嫻熟程度要求較高;B、膨脹床吸附直接處理含有細(xì)胞碎片的料液,料液中的核酸、細(xì)胞碎片可與介質(zhì)之間產(chǎn)生相互作用,造成介質(zhì)顆粒聚攏;C、由于料液含有大量的細(xì)胞碎片、脂類、核酸等成分,介質(zhì)污染嚴(yán)峻,需要嚴(yán)格的清洗,再生操作。移動(dòng)床:吸附操作中固相連續(xù)輸入和排出吸附塔與料液形成逆流接觸流淌吸附操作。模擬移動(dòng)床:是一種利用吸附原理進(jìn)展液體操作的設(shè)備,它以逆流連續(xù)操作方式,通過交換固定床吸附設(shè)備的物料進(jìn)出口位置,產(chǎn)生相當(dāng)于吸附劑連續(xù)向下移動(dòng),而物料連續(xù)向上移動(dòng)的效果。液相色譜理論板模型:相間到達(dá)一次平衡。通常將溶質(zhì)到達(dá)一次安排平衡的色譜柱段成為一個(gè)理論版,該色譜柱的高度稱為理論版當(dāng)量高度分別度:

又稱區(qū)分率,是表達(dá)兩種洗脫曲線相鄰的溶質(zhì)相互分別的程度,表達(dá)式為:兩個(gè)相鄰洗脫峰之間的距離和兩個(gè)峰寬的代數(shù)平均值之比。凝膠過濾色譜:〔通常為凝膠過濾介質(zhì)為固定相,是依據(jù)料液中溶質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的差異進(jìn)展分別的液相色譜法。原理:在GFC柱中,相對(duì)分子質(zhì)量大的溶質(zhì)不能進(jìn)入凝膠介質(zhì),而沿間隙孔隙精彩譜柱,其洗脫體積接近柱體積。凝膠過濾介質(zhì):SephadexGSepharose。要求:A、親水性大,外表介質(zhì)惰性,即介質(zhì)與溶質(zhì)之間不發(fā)生任何化學(xué)或物理相互作用;BpH值和離子強(qiáng)度范圍以及化學(xué)試劑中保持穩(wěn)定,使用壽命長(zhǎng);CD、具有良好的機(jī)械強(qiáng)度,允許較高的操作壓力〔流速。離子交換色譜:的差異進(jìn)展溶質(zhì)分別的洗脫色譜法。疏水性相互作用色譜:原理:組成蛋白質(zhì)的氨基酸中包括一些疏水性氨基酸基團(tuán),這些基團(tuán)大局部處于蛋白質(zhì)的內(nèi)部,但有局部疏水基團(tuán)暴漏于蛋白質(zhì)外表,在高離子強(qiáng)度下,蛋白質(zhì)外表的水化層被破壞,更多疏水性局部暴漏在外,這些暴漏在外面的疏水性基團(tuán)與介質(zhì)上的弱疏水性基團(tuán)發(fā)生疏水性作用,被固定相吸附,在低離子強(qiáng)度下,這種吸附作用減小,蛋白質(zhì)從固定相中脫落下來。特點(diǎn):A、在高鹽濃度下疏水性作用較大,HIC可將直接分別鹽析后的蛋白質(zhì)溶液;B、可通過調(diào)整疏水性配基鏈長(zhǎng)和密度調(diào)整HIC的吸附力;C、吸附劑種類多,選擇余地大。色譜聚焦:原理:利用在較寬pH值范圍內(nèi)具有緩沖作用的多緩沖離子交換劑為固定相,同時(shí)利用在較寬pH值范圍內(nèi)具有緩沖作用的多緩沖劑為流淌相,所以當(dāng)相色譜柱輸入pHpH值會(huì)緩慢地轉(zhuǎn)變,在軸向形成連續(xù)的pH梯度,使料液中溶質(zhì)依據(jù)個(gè)自的等電點(diǎn)或者吸附或者脫附,主次向下移動(dòng),彼此之間得到分別。特點(diǎn):A0.02的蛋白質(zhì);B、具有濃縮溶質(zhì)作用;C反相色譜:溶質(zhì)極性〔疏水性〕的差異進(jìn)展分別純化的洗脫色譜法。特點(diǎn):A、反相介質(zhì)性能穩(wěn)定,分別效果高;B、應(yīng)用廣泛,可用于分別蛋白質(zhì),肽,氨基酸,多糖等;C置換色譜:合位點(diǎn)額親和力比料液中各組分都要高組分區(qū)帶。特點(diǎn):A、置換列中各溶質(zhì)區(qū)帶的邊界陡直,區(qū)分率高;BC、各區(qū)帶嚴(yán)密相連,色譜柱利用率高,流淌相用量少;D、可以實(shí)現(xiàn)多個(gè)目標(biāo)產(chǎn)物的分別純化,適用于含多個(gè)目標(biāo)產(chǎn)物的物料;E親和色譜生物親合作用:生物分子能夠識(shí)別區(qū)分構(gòu)造和性質(zhì)格外相近的其他分子種分子相結(jié)合,生物分子間的這種特異性相互作用稱為生物親合作用。生物親和作用的機(jī)理:蛋白質(zhì)的立體構(gòu)造中含有某些參與親和作用的部位者該蛋白質(zhì)的凸起部位恰好能夠進(jìn)入與其發(fā)生親和作用的分子的凹陷部位氫鍵,疏水性相互作用,陪未見,弱共價(jià)鍵等。親和吸附介質(zhì)。操作包括進(jìn)料、雜質(zhì)清洗、目標(biāo)產(chǎn)物洗脫、色譜柱再生。原理:含有目標(biāo)產(chǎn)物的料液連續(xù)通入色譜柱,直至目標(biāo)產(chǎn)物在色譜柱出口穿透為止,然后利用與溶解原料的溶液組成一樣的緩沖液為清洗液,清洗色譜柱,目標(biāo)產(chǎn)物,即得到純化的目標(biāo)產(chǎn)物,最終利用清洗液清洗再生色譜柱。洗脫方法:線性梯度洗脫和逐次洗脫。親和配基:酶的抑制劑抗體A蛋白凝集素輔酶和磷酸腺苷色素配基過渡金屬離子組氨酸肝素制備方法:溴化青活化法環(huán)氧基活化法硅膠的活化間隔臂:當(dāng)配基的相對(duì)分子質(zhì)量較小時(shí),將其直接固定在載體上,會(huì)由于載體的空間位生有效的親和結(jié)合。洗脫的方法:特異性洗脫:利用含有與親和配基或目標(biāo)產(chǎn)物具有親和結(jié)合作用的小分子化合物溶液為洗脫液,通過與親和配基或目標(biāo)產(chǎn)物的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合,脫附目標(biāo)產(chǎn)物。非特異性洗脫:通過調(diào)整洗脫液的pH值、離子強(qiáng)度、離子種類或溫度等理化性質(zhì)降低目標(biāo)產(chǎn)物的親和吸附作用,是較多承受的洗脫方法。電泳和電色譜特性。凝膠電泳:主要利用凝膠的分子篩作用使分子大小不同的電解質(zhì)得到分別,在凝膠電泳過程中,相對(duì)分子質(zhì)量大的溶質(zhì)受凝膠阻滯作用大,電泳速度依據(jù)溶質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的不同,凝膠中會(huì)形成含有不同溶質(zhì)的區(qū)帶,實(shí)現(xiàn)溶質(zhì)之間的相互分別。等電點(diǎn)聚焦:pH值下呈pHpH值區(qū)域,從而形成具有不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)區(qū)帶。二維電泳:同時(shí)利用分子尺寸和等電點(diǎn)這兩種性質(zhì)的差

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