實(shí)驗(yàn)二重要功能微生物的篩選及生物學(xué)特性課件

實(shí)驗(yàn)二重要功能微生物的篩選及生物學(xué)特性重要功能微生物農(nóng)業(yè)微生物（磷細(xì)菌）環(huán)境微生物（重金屬抗性細(xì)菌）工業(yè)微生物（生物表面活性劑產(chǎn)生菌）醫(yī)藥微生物（放線菌）篩選系列稀釋?zhuān)桨迮囵B(yǎng)，選擇性培養(yǎng)基生物學(xué)特性菌落特征，菌體特征，革蘭氏反應(yīng)，功能大小等1、磷細(xì)菌的篩選磷細(xì)菌(也稱(chēng)溶磷細(xì)菌或解磷細(xì)菌)：主要是指土壤中的一類(lèi)溶解磷酸化合物能力較強(qiáng)的細(xì)菌的總稱(chēng)，可以分為無(wú)機(jī)磷細(xì)菌和有機(jī)磷細(xì)菌。本實(shí)驗(yàn)利用無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基直接從土壤中篩選無(wú)機(jī)磷細(xì)菌，培養(yǎng)出的目的菌菌落周?chē)鷷?huì)產(chǎn)生透明的溶磷圈。實(shí)驗(yàn)步驟配制無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基100ml，取250ml三角瓶，向其中加入100ml去離子水和幾顆小玻璃珠，再取三只試管各加9mL去離子水，將準(zhǔn)備好的上述材料在115℃下滅菌25分鐘。滅完菌好待培養(yǎng)基冷卻到60℃左右倒平板6塊。稱(chēng)取土壤樣品1g，加入到加有玻璃珠的100ml無(wú)菌水中，震蕩30分鐘，配成10-2菌懸液。吸取1mL菌液加入到裝有9mL無(wú)菌水的試管中，震蕩均勻，配成10-3菌懸液。如法依次制成10-4、10-5的菌懸液。吸取各稀釋度的菌懸液100μL加入到冷卻的平板中，稀釋涂布，倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待菌體長(zhǎng)出，觀察細(xì)菌菌落形態(tài)和溶磷菌溶磷圈。并測(cè)量溶磷菌菌落直徑和溶磷圈直徑，計(jì)算比值，定性比較各溶磷菌落溶磷能力。制片，革蘭氏染色，鏡檢，觀察菌體形態(tài)等特性。2、重金屬Cu抗性細(xì)菌的篩選樣品：土壤培養(yǎng)基：1/10LB(1000ml)酵母膏0.5g蛋白胨1g氯化鈉1gpH7.0

瓊脂2%，配制600ml，分裝至3個(gè)250ml的三角瓶，滅菌待用無(wú)菌水準(zhǔn)備100ml無(wú)菌水置于250ml三角瓶中，內(nèi)加5顆玻璃珠，滅菌待用。準(zhǔn)備3根試管，每根加入9ml無(wú)菌水，加塞，滅菌待用?？剐云桨宓闹苽鋵缇蟮?/10LB培養(yǎng)基融化，待溫度適宜后，與CuSO4溶液混勻，制成終濃度為2mg/L、5mg/L、10mg/L的含銅篩選平板，待用。Cu2:200ml培養(yǎng)基+40ulCuSO4Cu5:200ml培養(yǎng)基+100ulCuSO4Cu10:200ml培養(yǎng)基+200ulCuSO4土壤懸液制備，系列稀釋?zhuān)坎计桨迮囵B(yǎng)選擇10-3、10-4、10-5的稀釋度，分別吸取100ul土壤稀釋液，分別加入Cu2、Cu5、Cu10抗性平板中，每個(gè)稀釋度設(shè)置三個(gè)重復(fù)，用涂布棒涂布均勻。(3x3x3=27)觀察抗性平板上長(zhǎng)出的菌落，比較三種濃度的抗性平板，將外觀形態(tài)一致的視為同一種菌以確定抗性范圍。挑取菌落，進(jìn)行革蘭氏染色，并進(jìn)行鏡檢，對(duì)所觀察到的細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)描述。3、生物表面活性劑產(chǎn)生菌的篩選生物表面活性劑（Biosurfactants)）是一類(lèi)由微生物合成的、結(jié)構(gòu)不同的表面活性分子，具有一定表/界面活性，集親水基和疏水基結(jié)構(gòu)于一分子內(nèi)部的兩親化合物。在工業(yè)領(lǐng)域如采油和能源工業(yè)、藥物和化妝品、食品、環(huán)境工程等中的廣泛應(yīng)用。一些生物表面活性劑具有抗生性和溶解紅血球的特性，這些特性被用于建立血平板篩選模型。4、放線菌的篩選及其對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用放線菌產(chǎn)生的抗生素對(duì)細(xì)菌具有抑制作用，可以將放線菌菌液涂布在混有金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察放線菌周?chē)a(chǎn)生的抑菌圈。樣品：土壤培養(yǎng)基：LB培養(yǎng)基，高氏1號(hào)培養(yǎng)基雙層平板制備：將滅菌后的LB培養(yǎng)基融化，待溫度適宜后，與金葡菌液混勻，倒入培養(yǎng)皿，制成底層含菌培養(yǎng)基。凝固后，在上層倒入高氏1號(hào)。土壤懸液制備，系列稀釋?zhuān)坎计桨迮囵B(yǎng)觀察平板上長(zhǎng)出的菌落，比較抑菌圈的大小。挑取菌落，進(jìn)行革蘭氏染色