流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介及應(yīng)用進(jìn)展

流式細(xì)胞術(shù)簡(jiǎn)介及應(yīng)用進(jìn)展第1頁(yè)/共22頁(yè)流式細(xì)胞術(shù)在臨床及科研中的應(yīng)用第2頁(yè)/共22頁(yè)1、流式細(xì)胞術(shù)的基本原理2、流式細(xì)胞術(shù)在臨床及科研中的應(yīng)用3、流式細(xì)胞術(shù)臨床應(yīng)用的新進(jìn)展Maincontents:第3頁(yè)/共22頁(yè)一、流式細(xì)胞術(shù)的基本原理第4頁(yè)/共22頁(yè)

定義：以流式細(xì)胞儀為主要工具，對(duì)處在快速直線流動(dòng)狀態(tài)中的細(xì)胞或生物顆粒細(xì)胞的各種成分進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析和分選的技術(shù)。

FCM是諸如生物學(xué)、生物技術(shù)、計(jì)算機(jī)科學(xué)、流體力學(xué)、激光技術(shù)、高等數(shù)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)、有機(jī)化學(xué)和生物物理學(xué)等到學(xué)科知識(shí)綜合運(yùn)用的結(jié)晶?，F(xiàn)代流式細(xì)胞術(shù)，更是由于結(jié)合了單克隆抗體技術(shù)、定量細(xì)胞化學(xué)和定量熒光細(xì)胞化學(xué)的應(yīng)用，使其在生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)等等眾多研究領(lǐng)域的應(yīng)用有了更加突飛猛進(jìn)的發(fā)展

1、流式細(xì)胞術(shù)（FCM）的概述第5頁(yè)/共22頁(yè)

臨床型——小型，科研與臨床結(jié)合型科研型——大型，基礎(chǔ)研究和加速分選型FCM主要分兩種類型：第6頁(yè)/共22頁(yè)流式細(xì)胞儀——Flowcytomter,FCM流式細(xì)胞術(shù)——Flowcytometry,FCM

激發(fā)熒光細(xì)胞分選儀——Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS（BD公司）

電子程序化單細(xì)胞分選儀——Electronicallyprogrammableindividualcellsorter,

EPICS(Coulter公司）第7頁(yè)/共22頁(yè)

BDFACSCalibur型FCM（單L，3F）第8頁(yè)/共22頁(yè)CoulterEPICSXL/XL-MCL（單L，4F）第9頁(yè)/共22頁(yè)BDFACSVantageSE（14F，four-waysorting）第10頁(yè)/共22頁(yè)CoulterEPICSALTRA（空/水冷L，6F）第11頁(yè)/共22頁(yè)BDLSR（3L，6F）

第12頁(yè)/共22頁(yè)Coulter:FC500第13頁(yè)/共22頁(yè)BDFACSCountCD3\4\8

專為HIV監(jiān)測(cè)設(shè)計(jì)的經(jīng)濟(jì)普及型流式細(xì)胞儀BDFACSAria第14頁(yè)/共22頁(yè)BDFACSCanto2L6C第15頁(yè)/共22頁(yè)BD

FACSCalibur1L4C

第16頁(yè)/共22頁(yè)三、流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用的新進(jìn)展第17頁(yè)/共22頁(yè)高速度：分析細(xì)胞數(shù)：1000個(gè)/s→60000個(gè)/s高靈敏度：熒光分子數(shù)/細(xì)胞：3000→100個(gè)FITC；高準(zhǔn)確度：區(qū)分兩個(gè)細(xì)胞：參數(shù)：相差5%→1%；高精度：CV值：7%→<1%;多參數(shù)：熒光：1個(gè)→12個(gè)參數(shù)；高純度：分選細(xì)胞：80-90%→99.9%;其它：熒光信號(hào)：線性檢測(cè)→對(duì)數(shù)檢測(cè)光譜重疊：補(bǔ)償修飾剔除聯(lián)體細(xì)胞及碎片第18頁(yè)/共22頁(yè)1、QuantitativeFCM(QFCM)

定量流式細(xì)胞術(shù)（QuantitativeFCM,QFCM）是用流式細(xì)胞儀對(duì)特定細(xì)胞表面抗原進(jìn)行絕對(duì)定量。其基本原理是采用某種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線或線性方程，然后獲得待測(cè)抗原絕對(duì)分子數(shù)。第19頁(yè)/共22頁(yè)2、cytometricbeadarray

(CBA)

微球流式芯片技術(shù)(CBA)是一種微球多參數(shù)檢測(cè)分析技術(shù)，它用一系列的微球組合來(lái)捕獲并結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)溶液中被檢測(cè)物質(zhì)的量，其采用夾心法分析策略。用已知的標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線就可得出被測(cè)樣品的濃度。這種檢測(cè)方法，既不受樣品量的限制，也可同時(shí)檢測(cè)多項(xiàng)指標(biāo)參數(shù)；客觀、省時(shí)、人為因素影響小。第20頁(yè)/共22頁(yè)P(yáng)rincipleofCBA:

微粒體探針?lè)肿哟郎y(cè)分子報(bào)告分子