擬南芥葉片總RNA提取課件

擬南芥葉片總RNA提取擬南芥擬南芥是一種細長而直立的植物，羽狀多葉，莖高度達40厘米。二年生草本，基生葉有柄呈蓮座狀，葉片倒卵形或匙形；莖生葉無柄，披針形或線形。總狀花序頂生，花瓣4片，直徑約3毫米，白色，匙形，雄蕊6枚，花藥黃色，雌蕊圓柱狀，花柱短，柱頭凹陷；果實豆莢形，長1～1.5厘米，薄，輕微向上彎曲，成熟時開裂；果瓣有1中脈及側(cè)脈；種子1－2行，呈卵形，長約1毫米，成熟時紅褐色；子葉背倚胚根?；ㄆ?～5月。擬南芥是在植物科學(xué)，包括遺傳學(xué)和植物發(fā)育研究中的模式生物之一。其在農(nóng)業(yè)科學(xué)中所扮演的角色正彷佛小鼠和果蠅在人類生物學(xué)中的一樣。盡管擬南芥在農(nóng)業(yè)上并無多少直接的貢獻，但其優(yōu)點使其成為研究有花植物的遺傳、細胞、分子生物學(xué)的典型。擬南芥基因組之小有利于基因定位和測序。其基因組大約為12,500萬堿基對和5個染色體，在植物中算是小的。在2000年，擬南芥成為第一個基因組被完整測序的植物。在探明至今已發(fā)現(xiàn)的25,500個基因的功能上已作出了非常多的工作。植株之小于生活周期之短同樣也是擬南芥的優(yōu)點。實驗室常用的許多品系，從萌芽到種子成熟，大約為六個星期。植株之小方便其在有限的空間里培養(yǎng)，而單個植株能產(chǎn)生幾千個種子。此外，其自花傳粉的機制也有助于遺傳實驗。所有這些都使擬南芥成為遺傳研究的模式生物。RNA提取的常見問題RNA降解OD260/OD280比值偏低RNA含有DNA污染RNA提取量偏低提取的RNA不溶下游實驗效果不佳RNA降解使用的組織材料不夠新鮮。提取RNA的組織材料應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r的組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。提取RNA時使用的試劑及器材中混有RNA分解酶。提取的組織材料中含有大量的RNA分解酶，而RNAisoPlus的添加量不夠OD260/OD280比值偏低樣品裂解時加入的RNAisoPlus量偏少，造成蛋白變性不充分，可以再次對RNA溶液進行苯酚/氯仿抽提，以除去蛋白。含有裂解液的樣品經(jīng)勻漿混勻后未在室溫靜置，或靜置的時間不足5分鐘。相分離后，吸取上清液時不小心接觸蛋白層造成污染。RNA未充分溶解。RNA中含有DNA污染裂解組織或細胞使用的RNAisoPlus量偏少。使用的組織材料中含有大量的有機溶劑（如：乙醇、異丙醇等）、高濃度的Buffer、堿性溶劑等。如果提取的RNA中含有DNA時，可以使用DNaseI進行DNA消化。提取的RNA不溶75%乙醇清洗沉淀后不要干燥時間過長或加熱干燥。RNA沉淀中含有不溶的蛋白質(zhì)混合物時，應(yīng)注意在相分離后吸取上清液時，避免槍頭接觸蛋白層