核酸的制備與提取

核酸的制備與提取第1頁/共104頁第一部份、核酸的基本知識(shí)第一節(jié)

核酸的研究歷史；第二節(jié)核酸的化學(xué)組成；第三節(jié)核酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；第2頁/共104頁1868年瑞士科學(xué)家米歇爾(F.Miescher)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核內(nèi)含高量磷的酸性物質(zhì)，命名為核素(后改名為核酸)早期的研究僅將核酸看成是細(xì)胞中的一般化學(xué)成分，沒有人注意到它在生物體內(nèi)有什么功能；第一節(jié)、核酸的發(fā)現(xiàn)F.Miescher第3頁/共104頁核酸作為遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)過程20世紀(jì)初，德國生理學(xué)家柯塞爾(Kossel)證實(shí)了核酸是由四種不同的堿基所組成；美國科學(xué)家列文(Levene)又確定了核酸有兩種,即DNA和RNA；1928英國科學(xué)家格里菲斯(Griffith)利用細(xì)菌的性狀轉(zhuǎn)變實(shí)驗(yàn)，證明了遺傳信息的可傳遞性；1944美國科學(xué)家艾佛瑞(Avery)證實(shí)了DNA造成細(xì)菌性狀轉(zhuǎn)變的物質(zhì)基礎(chǔ)；1952美國科學(xué)家赫雪(Heishey)和蔡斯(Chase)證明遺傳物質(zhì)是DNA非蛋白質(zhì)；1953年，英國科學(xué)家沃森和克里克發(fā)現(xiàn)了DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)；第4頁/共104頁一核酸的概念和重要性(一)概念 由核苷酸或脫氧核苷酸通過3′，5′-磷酸二酯鍵連接而成的一類生物大分子，具有非常重要的生物功能，主要是貯存遺傳信息和傳遞遺傳信息。包括核糖核酸(RNA)和脫氧核糖核酸(DNA)兩類。(二)重要性1.與生命活動(dòng)關(guān)系密切，是重要的生命物質(zhì)。生命的起源、生長、發(fā)育、衰老、死亡與之有關(guān)。2.核酸研究是現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究的核心。第二節(jié)、核酸的組成第5頁/共104頁二、核酸的類別、分布和組成（一）、類別：核酸(nucleicacid)分為:脫氧核糖核酸(DNA,deoxyribonucleicacid)與核糖核酸(RNA,ribonucleicacid)。核糖核酸（RNA）分成以下幾類：

1、信使RNA（mRNA）

2、轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）

3、核糖體RNA（rRNA）

4、其他的非編碼RNA(snRNA,microRNA)第6頁/共104頁（二）、核酸的分布：1、DNA的分布：真核生物細(xì)胞核，線粒體亦含有DNA.原核生物集中于核區(qū)，核外的質(zhì)粒病毒含有DNA或RNA.2、RNA的分布存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中。發(fā)現(xiàn)了許多新的具有特殊功能的RNA：如反義RNA，核酶等.

病毒和亞病毒RNA有許多種：正鏈RNA、負(fù)鏈RNA病毒、類病毒、衛(wèi)星病毒等.

第7頁/共104頁（三）核酸的組成1.組成的基本單位:核苷酸2.組成元素:C、H、O、N、P第8頁/共104頁RNA為D-核糖，DNA為D-2-脫氧核糖，二者都是β

型。差別：2位羥基是否脫氧。（1）核酸中的糖第9頁/共104頁（2）堿基：a、嘌呤堿：腺嘌呤（Ade)、鳥嘌呤(Gua)b、嘧啶堿：胞嘧啶(Cyt)、尿嘧啶(Ura)、胸腺嘧啶(Thy)第10頁/共104頁

（3）核苷：戊糖與堿基通過β-糖苷鍵相連，C—N糖苷鍵。糖C1與嘧啶堿N1與嘌呤堿N9相連，堿基與糖環(huán)垂直。根據(jù)核苷中所含戊糖的不同，分為核糖核苷和脫氧核糖核苷。核酸分子中的堿基或核苷酸的修飾非常常見，如DNA的甲基化，RNA的轉(zhuǎn)錄后修飾。第11頁/共104頁

堿基相連（核苷）酯鍵（4）核苷酸第12頁/共104頁一切生物的遺傳物質(zhì)——核酸核酸脫氧核糖核酸（DNA）核糖核酸（RNA）基本組成單位主要在細(xì)胞核的染色體上，少數(shù)在線粒體和葉綠體主要在細(xì)胞質(zhì)中基本組成單位脫氧核糖核苷酸核糖核苷酸五碳糖：脫氧核糖堿基：磷酸A、G、C、T脫氧核糖堿基磷酸A腺嘌呤G鳥嘌呤脫氧核糖核苷酸C胞嘧啶T胸腺嘧啶五碳糖：核糖堿基：磷酸A、G、C、U核糖堿基磷酸A腺嘌呤G鳥嘌呤核糖核苷酸C胞嘧啶U尿嘧啶第13頁/共104頁一、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)（一）核酸中核苷酸的連接方式DNA、RNA中的脫氧核苷酸、核苷酸是通過3‘，5‘–磷酸二酯鍵連接的。表示方法：書寫順序5‘——3’。核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)是指核酸分子中各核苷酸殘基以磷酸二酯鍵連接、沿多核苷酸鏈排列的順序。第三節(jié)、核酸的結(jié)構(gòu)第14頁/共104頁核苷酸的組成與連接第15頁/共104頁DNA的

一

級(jí)

結(jié)

構(gòu)

圖

示第16頁/共104頁（二）一級(jí)結(jié)構(gòu)的表示方法（1）線條式：豎線碳鏈、堿基、磷酸（2）文字式：

5＇pＡpＣpＴpＴpＧpＡpＡpＣpＧ3＇DNA

5＇pＡpＣpＵpＵpＧpＡpＡpＣpＧ3＇RNA

此式可進(jìn)一步簡化為：

5＇ＡＣＴＴＧＡＡＣＧ3＇

5＇ＡＣＵＵＧＡＡＣＧ3＇第17頁/共104頁2、一級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

DNA的相對(duì)分子量非常大，能編碼的信息量十分巨大。細(xì)菌的基因是連續(xù)的,無內(nèi)含子功能相關(guān)基因組成操縱子，有共同的調(diào)控序列，較少重復(fù)序列。真核生物的基因是斷裂的，有內(nèi)含子功能相關(guān)基因不組成操縱子，調(diào)控序列占比重大，有較大重復(fù)序列,又分為高度重復(fù)、中度重復(fù)、單一序列。此外還有回文結(jié)構(gòu).越是高等的真核生物其調(diào)控序列和重復(fù)序列的比例越大。1、DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)A、T、G、C通過3`，5`-磷酸二酯鍵連接，C’1—堿基，C’2——脫氧。堿基：A、T、G、C；脫氧核糖；沒有側(cè)鏈第18頁/共104頁二、DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)（1）、模型建立的依據(jù)：

Chargaff等科學(xué)家用紙層析及紫外分光光度技術(shù)分析了各種生物的DNA的堿基組成。結(jié)果顯示：摩爾數(shù)A=T；G=C；A+C=G+T；A+G=C+T第19頁/共104頁腺嘌呤胸腺嘧啶鳥嘌呤胞嘧啶堿基之間形成氫鍵模型第20頁/共104頁雙螺旋平面圖ThedoublehelixmaintainsaconstantwidthbecausepurinesalwaysfacepyrimidinesinthecomplementaryA-TandG-Cbasepairs.ThesequenceinthefigureisT-A,C-G,A-T,G-C.第21頁/共104頁（2）DNA雙螺旋的特點(diǎn)：A、兩條反平行多核苷酸鏈繞中心軸纏繞，右手螺旋；B、骨架：內(nèi)側(cè)堿基垂直于縱軸； 外側(cè)-磷酸與戊糖、彼此通過3’、5’磷酸二酯鍵，糖環(huán)平面與縱軸平行。 大溝寬1.2nm，深0.85nm； 小溝寬0.6nm，深0.75nm；C、直徑：2nm，二相鄰堿基高度0.34nm，二核苷酸夾角36度，旋轉(zhuǎn)一周10個(gè)核苷酸，一周高度3.4nm；第22頁/共104頁三、DNA的三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)：細(xì)長的分子以一種高度壓縮狀態(tài)存在于細(xì)胞中，雙螺旋的進(jìn)一步扭曲就構(gòu)成了三級(jí)結(jié)構(gòu)。超螺旋，三級(jí)結(jié)構(gòu)中的一種。DNA壓縮總原則：多級(jí)螺旋，4級(jí)壓縮。真核原核第23頁/共104頁基因A基因B基因區(qū)間第24頁/共104頁四、RNA分子的結(jié)構(gòu)與功能（一）、RNA的類別

1信使RNA(messengerRNA,mRNA); 2轉(zhuǎn)移RNA(transferRNA,tRNA); 3核糖體RNA(ribosomalRNA,rRNA);第25頁/共104頁第26頁/共104頁（二）、RNA結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)RNA與DNA結(jié)構(gòu)十分相似，二者相比有幾點(diǎn)不同：（1）核糖：（2）堿基：A、G、C、U（3）二者在三維結(jié)構(gòu)上的區(qū)別——RNA不具有規(guī)則的氫鍵結(jié)構(gòu)，單鏈形式存在，只是回折，局部配對(duì)，不配對(duì)形成突環(huán)。第27頁/共104頁1、mRNA第28頁/共104頁5‘Cap的功能：3’PolyA的功能：第29頁/共104頁Ala的tRNA結(jié)構(gòu)示意圖2、tRNA：轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸第30頁/共104頁tRNA有“接頭”(adaptor)功能，具備雙重特性；識(shí)別氨基酸——其3’末端的腺苷酸可與一氨基酸共價(jià)連接識(shí)別密碼子——反密碼子與mRNA中的密碼子堿基配對(duì)。第31頁/共104頁6、rRNArRNA占RNA總量的80%以上，核糖體由大小兩個(gè)亞基組成，大小亞基分別幾種rRNA和數(shù)十種蛋白質(zhì)組成。rRNA與幾十種蛋白質(zhì)組成的細(xì)胞顆?！颂求w是細(xì)胞內(nèi)合成蛋白質(zhì)的工廠。核糖體上催化肽鍵合成的是rRNA，蛋白質(zhì)只是維持rRNA的構(gòu)象，起輔助作用。第32頁/共104頁第33頁/共104頁轉(zhuǎn)錄翻譯場所：核糖體場所：細(xì)胞核第34頁/共104頁其他RNA的結(jié)構(gòu)與功能不均一核內(nèi)RNA(heterogeneousnuclearRNA,hnRNA)：hnRNA是mRNA的未成熟前體。細(xì)胞內(nèi)有小核RNA(smallnuclearRNA，snRNA)。它是真核生物轉(zhuǎn)錄后加工過程中RNA剪接體(spilceosome)的主要成分，參與mRNA前體的加工過程。核仁小分子RNA(snoRNA)負(fù)責(zé)rRNA加工(切割和修飾)由內(nèi)含子編碼。染色質(zhì)RNA(chromosomeRNA),穩(wěn)定基因組DNA的作用。第35頁/共104頁第一節(jié)核酸分離純化的設(shè)計(jì)及原則第二節(jié)基因組DNA的分離純化第三節(jié)質(zhì)粒DNA的提取與純化第四節(jié)RNA的分離純化第二章、核酸分離技術(shù)第五節(jié)核酸的保存與鑒定第36頁/共104頁

1、保持核酸分子結(jié)構(gòu)的完整性；

2、盡量清除其它分子的污染，保證核酸純度；

應(yīng)盡量簡化分離純化步驟，縮短提取時(shí)間

盡量避免各種有害因素對(duì)核酸的破壞第一節(jié)核酸分離純化的設(shè)計(jì)及原則第37頁/共104頁一、核酸分子提取的技術(shù)路線I.材料準(zhǔn)備II.破碎細(xì)胞或包膜－內(nèi)容物釋放III.核酸分離、純化IV.沉淀或吸附核酸，并去除雜質(zhì)

V.核酸溶解在適量緩沖液或水中第38頁/共104頁

（一）核酸的釋放細(xì)胞破碎的方法機(jī)械法高速組織搗碎機(jī)玻璃勻漿器研缽物理法超聲勻漿器凍融法化學(xué)法自溶法酶處理表面活性劑處理法第39頁/共104頁（二）核酸的分離與純化：應(yīng)該清除的雜質(zhì)主要包括三部分

1、非核酸的大分子污染物：蛋白質(zhì)、多糖及脂類物質(zhì)等

2、非需要的核酸分子：分離某一特定的核酸分子時(shí)，其它的核酸分子皆為雜質(zhì)；

3、加入的有機(jī)溶劑和某些金屬離子第40頁/共104頁（三）核酸的濃縮、沉淀與洗滌沉淀是濃縮核酸的最常用的方法常用的鹽類有醋酸鈉、醋酸鉀、醋酸銨、氯化鈉、氯化鉀及氯化鎂常用的有機(jī)溶劑則為乙醇、異丙醇和聚乙二醇核酸沉淀常常含有少量共沉淀的鹽，需用70%～75%的乙醇洗滌去除二、技術(shù)路線的設(shè)計(jì)第41頁/共104頁破碎細(xì)胞核酸從細(xì)胞中游離出來沉淀核酸除去蛋白質(zhì)乙醇酚和氯仿核酸的提取過程第42頁/共104頁

基因組DNA的特點(diǎn)：

1.分子大，容易斷裂

2.容易污染其它來源的DNA分離純化方法：1.酚抽提法2.甲酰胺解聚法3.玻棒纏繞法4.異丙醇沉淀法第二節(jié)真核基因組DNA的分離純化第43頁/共104頁DNA酚抽提法示意圖

一、酚抽提法第44頁/共104頁基因組DNA的提取---酚抽提法樣品的準(zhǔn)備細(xì)胞的裂解蛋白質(zhì)變性DNA的抽提DNA的沉淀第45頁/共104頁血基因組DNA試劑盒酵母基因組DNA試劑盒細(xì)菌基因組DNA試劑盒細(xì)胞基因組DNA試劑盒第46頁/共104頁DNA柱層析法示意圖第47頁/共104頁第三節(jié)質(zhì)粒DNA的提取與純化質(zhì)粒是細(xì)菌內(nèi)獨(dú)立于染色體并能自我復(fù)制的小環(huán)狀DNA分子其大小范圍從lkb至200kb以上不等已經(jīng)在形形色色的細(xì)菌類群中發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒這些質(zhì)粒都是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外進(jìn)行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位。質(zhì)粒是攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)菌中擴(kuò)增或表達(dá)的重要媒介物，這種基因運(yùn)載工具在基因工程中具有極廣泛的應(yīng)用價(jià)值，而質(zhì)粒的分離與提取則是最常用、最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。第48頁/共104頁第49頁/共104頁質(zhì)粒特性1.分子相對(duì)小2.含有高效的自主復(fù)制成分3.不相容性4.轉(zhuǎn)移性5.選擇的標(biāo)記6.限制性內(nèi)切酶單一切。第50頁/共104頁第51頁/共104頁質(zhì)粒DNA的提取和純化1．細(xì)菌的培養(yǎng)

先分離單個(gè)菌落，接種到含少量適當(dāng)抗生素的培養(yǎng)基中擴(kuò)增，隨著細(xì)菌的生長，質(zhì)粒DNA也在自主復(fù)制。質(zhì)粒DNA的小量制備2-5ml質(zhì)粒DNA的大量制備500ml{第52頁/共104頁2．細(xì)菌的收集細(xì)胞生長過程中，排出大量代謝產(chǎn)物，為了提高質(zhì)粒DNA的純度，離心棄上清，細(xì)菌沉淀最好用STE或生理鹽水懸浮，漂洗l-2次，離心管壁上的液體也應(yīng)該仔細(xì)去除干凈

第53頁/共104頁

堿裂解法 煮沸法

SDS裂解法

Triton-溶菌酶法3．細(xì)菌的裂解方法4．質(zhì)粒DNA的提取---適用于大質(zhì)粒DNA---不適宜含糖高的菌株如HB101第54頁/共104頁第55頁/共104頁

選擇性地使用RNase的變性劑（如酚、氯仿及強(qiáng)烈的胍類變性劑）設(shè)置專門RNA移液裝置；使用蛋白酶K和陰離子去污劑如SDS、十二烷基肌氨酸鈉或脫氧膽酸鈉;準(zhǔn)備溶液或緩沖液時(shí)，使用無RNA酶的器皿,DEPC處理水等;一、RNA制備的條件與環(huán)境第四節(jié)真核細(xì)胞RNA的分離純化第56頁/共104頁細(xì)胞RNA的含量

每個(gè)細(xì)胞的RNA量約為10-5

μg80%-85%rRNA10%-15%tRNA1%-5%mRNA

其他RNA：hnRNA、snRNA、snoRNA…第57頁/共104頁第58頁/共104頁核酸的鑒定濃度鑒定純度鑒定完整性鑒定核酸的保存DNA的儲(chǔ)存RNA的儲(chǔ)存第五節(jié)核酸的鑒定與保存第59頁/共104頁一、核酸的濃度鑒定（1）紫外分光光度法：該法是基于核酸分子中的堿基具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)因而可以吸收紫外線，其最大吸收波長為260nm。

DNA或RNA的定量，OD260=1.0相當(dāng)于50μg/ml雙鏈DNA40μg/ml單鏈DNA（或RNA）20μg/ml寡核苷酸第60頁/共104頁濃度鑒定紫外分光光度法：測定DNA在A260nm的光吸收值。如計(jì)算DNA濃度

A260×稀釋倍數(shù)×50＝μg/ml紫外分光光度法只用于測定濃度大于0.25ug/ml的核酸溶液。(A值等于1時(shí)，相當(dāng)于50μg/ml雙鏈DNA，40μg/ml單鏈DNA或RNA，20μg/ml單鏈寡核苷酸）第61頁/共104頁⑵熒光光度法：核酸的熒光染料溴化乙錠嵌入堿基平面后，本身無熒光的核酸在UV激發(fā)下發(fā)出紅色熒光，且熒光強(qiáng)度的積分與溶液中核酸的含量呈正比。適用于低濃度核酸溶液的定量分析。（1-5ng）第62頁/共104頁第63頁/共104頁3.DNA分子片斷的測定應(yīng)用凝膠電泳可以正確地測定DNA片段的分子大小。電泳完畢后，經(jīng)澳化乙錠染色，照相，從照片上比較待測樣品中的DNA片段與標(biāo)準(zhǔn)樣品中的哪一條帶最接近，即可推算出未知樣品中各片段的大小。第64頁/共104頁

⑴紫外分光光度法：該法主要通過A260與A280的比值來判定有無蛋白質(zhì)的污染，比值升高與降低均提示不純。判斷核酸樣品的純度DNA純品:OD260/OD280=1.8RNA純品:OD260/OD280=2.0二、核酸的純度鑒定純DNA比值1.8，＜1.8Pr、苯酚污染純RNA比值2.0，<2.0DNA、Pr、苯酚污染第65頁/共104頁⑵熒光光度法：用EB等熒光染料示蹤的核酸電泳結(jié)果可判定核酸制品的純度。DNA分子較RNA大得多，電泳遷移率低。第66頁/共104頁⑴DNA的完整性測定：以EB為示蹤劑的核酸凝膠電泳結(jié)果可判定核酸制品的完整性?；蚪MDNA片段的分子量很大，在電場中泳動(dòng)很慢，如果發(fā)生降解，電泳圖呈拖尾狀。三、核酸的完整性鑒定DNA片段的降解第67頁/共104頁質(zhì)粒DNA的完整性測定：第68頁/共104頁完整或降解很少的總RNA電泳圖譜中，三條帶熒光強(qiáng)度積分應(yīng)呈特定的比值，沉降系數(shù)大的核酸區(qū)帶，電泳遷移低，熒光強(qiáng)度積分高；反之，分子量小，電泳遷移率高，熒光強(qiáng)度積分低。

一般而言，28S（23S）RNA的熒光強(qiáng)度約為18S（16S）RNA的2倍，否則提示有RNA的降解。若在點(diǎn)樣孔附近有著色條帶，則說明存在DNA的污染。三（2）RNA的完整性測定：

總RNA電泳圖譜第69頁/共104頁

正常時(shí)，28SRNA的熒光強(qiáng)度約為18SRNA的2倍，否則提示RNA的降解第70頁/共104頁1、短期貯存：

4℃或-20℃存放于TE（tris和EDTA）緩沖液中。

TE緩沖液的PH與DNA貯存有關(guān)，PH為8時(shí)，可減少DNA脫氨反應(yīng)，PH低于7.0時(shí)DNA容易變性。2、長期貯存：

TE緩沖液中-70℃保存數(shù)年；在DNA溶液中加一滴氯仿可有效防止細(xì)菌和核酸的污染。（二）核酸的保存

---DNA的儲(chǔ)存第71頁/共104頁RNA溶于0.3mol/L的NaAc溶液或三蒸水中，-70℃保存。注意避免Rnase的污染；分裝，避免反復(fù)凍融；如用DEPC處理過的水溶解RNA或者在RNA溶液中加入RNasin或VRC，保存時(shí)間可延長。2、RNA的儲(chǔ)存第72頁/共104頁第73頁/共104頁格里菲斯的細(xì)菌性狀轉(zhuǎn)變實(shí)驗(yàn)肺炎雙球菌S型有致病力R型無致病力老鼠死亡血液中分離出S型菌老鼠存活血液中分離不出R型菌第74頁/共104頁格里菲斯的細(xì)菌性狀轉(zhuǎn)變實(shí)驗(yàn)活的S型菌活的R型菌死的S型菌活的R型菌＋加熱殺死的S型菌活的S型菌第75頁/共104頁艾佛瑞證實(shí)了DNA促使細(xì)菌轉(zhuǎn)型將細(xì)胞打碎取出萃取物1.DNA分解酶2.RNA分解酶3.蛋白質(zhì)分解酶＋＋＋假設(shè)：S型菌具有某種物質(zhì)促使R型菌發(fā)生轉(zhuǎn)型S型菌R型菌R型菌R型菌R型菌S型菌S型菌第76頁/共104頁赫雪、蔡斯證實(shí)了DNA為遺傳物質(zhì)以T2噬菌體和大腸桿菌作為材料；目的：欲知是何種物質(zhì)可作為噬菌體的遺傳物 質(zhì)，DNA？還是蛋白質(zhì)外鞘？利用放射性同位素：35S標(biāo)定噬菌體蛋白質(zhì)

32P標(biāo)定噬菌體DNA蛋白質(zhì)外鞘DNA第77頁/共104頁噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)第78頁/共104頁第79頁/共104頁第80頁/共104頁多基因表型:膚色多基因表型:身高第81頁/共104頁數(shù)量性狀多基因表型第82頁/共104頁核酸——遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)

基因是所有生物體遺傳信息的載體，是決定生老病死等所有現(xiàn)象的基本元素?；虻奈镔|(zhì)基礎(chǔ)是核酸分子。第83頁/共104頁人類的健康是受內(nèi)因和外因共同的影響。外因：個(gè)體的外在因素60%內(nèi)因：個(gè)體的遺傳因素決定40%第84頁/共104頁遺傳因素為主外因?yàn)橹餮巡「哐獕耗[瘤一型糖尿病外傷

所有疾病的發(fā)生都與基因密切相關(guān)第85頁/共104頁第86頁/共104頁葉綠體中含有環(huán)狀DNA細(xì)菌等原核生物質(zhì)粒染色體線粒體中含有環(huán)狀DNA第87頁/共104頁核苷酸的基本構(gòu)造MonophosphateDiphosphateTriphosphateAdenineGuanineThymineCytosineUracilNucleoside(Adenosine)Nucleotide(Adenosinemonophosphate,AMP)PurinePyrimidine核苷核苷酸磷酸五環(huán)糖Ribose,Deoxyribose堿基1’2’3’4’5’第88頁/共104頁

高速搗碎法：將組織加鹽水(約1／3～1／2)裝入搗碎機(jī)桶內(nèi)。用10000r／min間斷離心，每次30～60s，防止離心時(shí)間過長產(chǎn)生的熱破壞抗原活性。

高速組織搗碎機(jī)高速搗碎法第89頁/共104頁玻璃勻漿器

研磨法用玻璃勻漿器。主要經(jīng)過旋轉(zhuǎn)、擠壓等方式將組織粉碎。用此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)高，對(duì)大分子的破壞也少。該法可用于粉碎少量軟嫩材料（腦、胰、肝等）時(shí)常用的方法。

玻璃勻漿器第90頁/共104頁

常用酶類：溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶等

酶處理法

方法：在一定的條件下，能消化細(xì)菌和組織細(xì)胞。

特點(diǎn)：①此法適用多種微生物；②具有作用條件溫和；③內(nèi)含物成分不易受到破壞；④細(xì)胞壁損壞的程度可以控制。第91頁/共104頁

原理：在適當(dāng)?shù)臏囟?、pH及低離子強(qiáng)度的條件下，表面活性劑能與脂蛋白形成微泡，使膜的滲透性改變或使之溶解。表面活性劑處理

常用的有：十二烷基硫酸鈉(SDS,陰離子型)、二乙胺十六烷基溴（陽離子型）、聚山梨酯（非離子型）、新潔爾滅等。

應(yīng)用：①破碎細(xì)菌，且作用比較溫和；②提取基因組或質(zhì)粒DNA的常用破碎方法。第92頁/共104頁第93頁/共104頁

各種堿基的紫外吸收光譜第94頁/共104頁EB與DNA的結(jié)合第95頁/共104頁第96頁/共104頁核酸的理化性質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)通常與蛋白質(zhì)結(jié)合，以復(fù)合物形式存在微溶于水，不