考研包16116植物134課件小實(shí)驗(yàn)

植物組織中SOD活性測(cè)定植物呼吸酶的簡易測(cè)定法

在低溫下發(fā)生皂化反應(yīng)的葉綠體色素溶液，易出現(xiàn)白色絮狀物，溶液混濁。加熱后，混濁消失。當(dāng)充分混勻后，靜置2-3小時(shí)后，混濁消失，苯層和稀酒精層分開。（圖1皂化與未皂化的葉綠體色素）圖2，先加入苯與95％乙醇混勻,后加入蒸餾水再混勻。圖3，圖2中的試管靜置2小時(shí)后澄清分層，上層為苯層，下層為稀酒精層。油（有機(jī)相）被分散在水（無機(jī)相）中，形成了乳化液圖1圖2圖3為什么有少量的葉黃素溶在酒精層？葉黃素是胡蘿卜素衍生的醇類(-OH)，在苯和乙醇中的分配系數(shù)不同。我們?cè)谠囼?yàn)中加入了苯和水，大部分葉黃素溶于苯層中，有少部分溶于稀酒精溶液中。

類胡蘿卜素的吸收光譜

葉綠素的吸收光譜

可見光連續(xù)光譜葉綠素定量測(cè)定問題分別計(jì)算Ca、Cb，CT,計(jì)算葉綠素a、b以及總?cè)~綠素的含量，單位：mg/g鮮重結(jié)論思考題葉綠素含量(mg/g鮮重)=CT

×提取液總量×稀釋倍數(shù)樣品重(g)×1000OD>0.8要稀釋，并說明稀釋方法CT：兩種方法，兩者不完全相等，原因？更換波長時(shí)，應(yīng)重新調(diào)0、100?植物呼吸酶的簡易鑒定法一、去氫酶是呼吸鏈中參與電子和氫傳遞的重要酶之一，包括煙酰胺脫氫酶和黃素脫氫酶。還原型的黃素脫氫酶可被某些試劑氧化。E-FADH2+甲烯藍(lán)E-FAD+甲烯白材料：馬鈴薯注意：看結(jié)果時(shí)間塊切得大小適中。試管中不加水煮，煮透!液體石蠟層可以稍厚些二、氧化酶－多酚氧化酶

材料：馬鈴薯、黃瓜注意：勿使黃瓜、馬鈴薯相互污染R(OH)2+1/2O2RO2+H2O多酚氧化酶三、過氧化物酶H２O2+R(OH)2POD2H２O+RO2

材料

——直接使用上述實(shí)驗(yàn)中不能使鄰苯二酚氧化的材料(黃瓜或馬鈴薯)繼續(xù)實(shí)驗(yàn)，不需要再次切取材料。四、過氧化氫酶H２O2+H２O2CAT2H2O+O2材料——馬鈴薯將所有的材料切好，所有需要煮沸的試管用橡皮筋捆綁在一起，放進(jìn)沸水鍋中煮沸至少20分鐘。試管中不加水！注意防燙結(jié)果描述觀察到的現(xiàn)象.要求:全面、

準(zhǔn)確。討論對(duì)觀察到的現(xiàn)象進(jìn)行分析、討論,即為什么會(huì)出現(xiàn)這樣的現(xiàn)象(說明存在什么酶、酶的作用機(jī)理)?其他實(shí)驗(yàn)相關(guān)問題的討論植物組織中SOD酶活性的測(cè)定

活性氧干旱溫度空氣污染重金屬病蟲害土壤pH鹽堿胞質(zhì)蛋白損傷DNA損傷脂類過氧化O2·、H2O2、·OH、1O2防御系統(tǒng)

酶促防御系統(tǒng)（SOD，CAT，POD,etc）非酶促防御系統(tǒng)

(VA，VC，VE，etc)SOD，CAT，POD超氧化物歧化酶（SOD）：

+2H+SODH2O2+O2O2?O2?+材料

小麥：1號(hào)，2號(hào)SOD活性測(cè)定----NBT法核黃素

＋NBT藍(lán)色甲腙560nm有最大吸收SODO2?·原理粗酶液提?。?.5g小麥葉片預(yù)冷的提取液約2ml冰浴上研麿離心管中定容至10ml

4℃下離心（13,000g）20min上清液即為酶提取液，吸取1ml上清液于1.5ml離心管中，置于冰浴中待測(cè)二、步驟配平單號(hào)組1號(hào)樣品雙號(hào)組2號(hào)樣品試劑名稱用量（ml）0.05mol/L磷酸緩沖液(pH7.8)1.5130mmol/LMet溶液0.3750μmol/LNBT溶液0.3100μmol/LEDTA－Na2液0.320μmol/L核黃素0.3酶液（或緩沖液）0.1（對(duì)照加緩沖液代替）蒸餾水0.5總體積3.3最后加核黃素

取4支試管，加入相應(yīng)試劑，混勻，1支對(duì)照管用黑紙罩著，與其它各管同時(shí)置于光下反應(yīng)，溫度25－35℃，20min。磷酸緩沖液0.1ml，暗空白，調(diào)0,調(diào)100磷酸緩沖液0.1ml，光照A0小麥樣品1號(hào)粗酶液0.1ml光照As小麥樣品2號(hào)粗酶液0.1ml光照As三、SOD活性測(cè)定與計(jì)算反應(yīng)結(jié)束后，用黑袋罩上各試管，終止反應(yīng)。分別在560nm波長下測(cè)定各管的吸光度（A0－As）×VTSOD活性＝――――――――――×稀釋倍數(shù)

A0×0.5×W×V1SOD活性以每克鮮