滅活劑保護(hù)劑與免疫佐劑

滅活劑保護(hù)劑與免疫佐劑第1頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日本章內(nèi)容第一節(jié)滅活劑第二節(jié)保護(hù)劑第三節(jié)免疫佐劑第2頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第一節(jié)滅活劑123滅活與滅活劑概念常用滅活劑的滅活機(jī)理與應(yīng)用影響滅活作用的因素第3頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日滅活與滅活劑一滅活:

是指破壞微生物的生物學(xué)活性、繁殖能力和致病性，但盡可能不影響其免疫原性，被滅活的微生物主要用于生產(chǎn)滅活疫苗；或指破壞診斷血清或待檢血清中的補(bǔ)體活性，以避免補(bǔ)體對診斷試驗的干擾作用。滅活劑:

用于滅活微生物的化學(xué)試劑或藥物稱為滅活劑。第一節(jié)滅活劑滅活方法:

物理方法（不用），化學(xué)方法（常用）微生物毒力的滅活或毒素毒性滅活或補(bǔ)體活性滅活第4頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日常用滅活劑的滅活機(jī)理與應(yīng)用二甲醛溶液①蛋白質(zhì)②核酸烷基化（不加中斷劑）烷化劑苯酚結(jié)晶紫β-丙酰內(nèi)酯使微生物核酸烷基化,滅活后加2%硫代硫酸鈉中斷滅活用于防腐，很少用于疫苗研制用于診斷抗原的制備：雞白痢抗原病毒滅活劑，為狂犬病滅活苗制備所用.第一節(jié)滅活劑第5頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日甲醛滅活機(jī)理：A第一節(jié)滅活劑

甲醛醛基氨基甲基胺

羧基亞甲基二醇單酯

巰基亞甲基二醇

羥基羥基甲酚第6頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日甲醛滅活濃度：多數(shù)為0.1％～0.3％A第一節(jié)滅活劑滅活原則：低濃度、短時間而又能達(dá)到徹底滅活目的；必要時可在滅活后加入硫代硫酸鈉，以中斷其反應(yīng)。第7頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日烷化劑滅活機(jī)制：B第一節(jié)滅活劑1.烷化DNA分子中的鳥嘌呤或腺嘌呤等，引起單鏈斷裂或雙螺旋鏈交聯(lián)，因改變DNA的結(jié)構(gòu)而破壞其功能，妨礙RNA的合成，從而抑制細(xì)胞的有絲分裂。2.與酶系統(tǒng)和核蛋白起作用而干擾核酸代謝。優(yōu)點：能破壞病毒的核酸芯髓，使病毒完全喪失感染力，而不損害其蛋白衣殼，保留其保護(hù)性抗原。第8頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日滅活時間滅活溫度微生物種類和特性滅活劑特異性滅活劑濃度滅活PH值第一節(jié)滅活劑影響因素石炭酸對真菌和病毒效果差，甲醛最常用。具體不同病原體或毒素,其滅活時間和溫度不一致.有機(jī)物存在第9頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）123保護(hù)劑概念及用途保護(hù)劑的分類影響保護(hù)效能的因素4常用的凍干保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）5獸醫(yī)生物制品常用的保護(hù)劑第10頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）一、保護(hù)劑

又稱穩(wěn)定劑（stabilizer），是指一類能防止生物活性物質(zhì)在冷凍真空干燥時受到破壞的物質(zhì)。（指對疫苗生產(chǎn)、血清制備等）第11頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日保護(hù)劑用途不同用途加不同保護(hù)劑,主要針對活的微生物或細(xì)胞。菌種或毒種保存：常用甘油作保護(hù)劑細(xì)胞株保存：常用二甲基亞砜(DMSO)DMSO:二甲基亞砜，一種細(xì)胞的保護(hù)劑疫苗冷凍真空干燥制備時：加脫脂乳（或二甲基亞砜）和蔗糖等（不同國家有不同配方）第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）干擾素類生物活性物質(zhì)的保存：加葡聚糖第12頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日二、保護(hù)劑的分類根據(jù)作用機(jī)理滲透劑:如二甲基亞砜(DMSO),甘油和蔗糖等.非滲透劑:如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)和蛋白質(zhì)等.根據(jù)分子量大小高分子物質(zhì)低分子物質(zhì)根據(jù)化學(xué)性質(zhì)復(fù)合物、糖類、鹽類、醇類、酸類和聚合物第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）第13頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日

復(fù)合物脫脂乳、明膠、蛋白質(zhì)、蛋白胨、糊精、血清、甲基纖維素等糖類蔗糖、乳糖、麥芽糖、葡萄糖、果糖等鹽類乳酸鈣、谷氨酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、醋酸銨、硫代硫酸鈉等醇類山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等酸類檸檬酸、酒石酸、氨基酸等聚合物葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等一些常用的冷凍干燥保護(hù)劑分類保護(hù)劑第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）第14頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日凍干保護(hù)劑作用組成1.營養(yǎng)液3.抗氧化劑第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）2.賦形劑可修復(fù)因凍干而受損的細(xì)胞，使凍干制品含有一定量水分；可促進(jìn)高分子物質(zhì)形成骨架，使凍干制品呈多孔的海綿狀。防止低分子物質(zhì)的碳化和氧化，保護(hù)活性物質(zhì)不受加熱影響，使凍干制品形成多孔性、疏松的海綿狀物，增加溶解度。抑制凍干制品中的酶作用，增加生物活性物質(zhì)在凍干后貯存期間的穩(wěn)定性，如維生素C、維生素E和硫代硫酸鈉等。第15頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日凍干保護(hù)劑作用機(jī)制1、防止活性物質(zhì)失去結(jié)構(gòu)水及阻止結(jié)構(gòu)水形成結(jié)晶而導(dǎo)致生物活性物質(zhì)的損傷；第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）2、降低細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓差、防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)水結(jié)晶，以保持細(xì)胞的活力；3、保護(hù)或提供細(xì)胞復(fù)蘇所需的營養(yǎng)物質(zhì)，有利于生活力的復(fù)蘇和迅速修復(fù)自身。第16頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日配制方法:糖類不能用121℃高壓滅菌處理。種類:根據(jù)微生物種類或者用途來添加不同種類保護(hù)劑。濃度：嚴(yán)格按照配方執(zhí)行。酸堿度(PH值):主要對M的影響。1234第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）三、影響保護(hù)劑效能的因素第17頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日①需氧或兼氧厭氧菌：５％蔗糖脫脂乳或５％蔗糖、

1.5％明膠；

②厭氧性細(xì)菌：含1.5％谷氨酸鈉的１％乳糖或10％脫脂乳或7.5％葡糖血清。

注：脫脂乳：20％脫脂奶粉溶于水配制而成。不同種類微生物需要添加不同保護(hù)劑

（一）細(xì)菌的保護(hù)劑四、常用的凍干保護(hù)劑(穩(wěn)定劑)第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）第18頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日、（二）病毒的保護(hù)劑四、常用的凍干保護(hù)劑(穩(wěn)定劑)

①5%蔗糖脫脂乳；②馬立克814活細(xì)胞疫苗:保存液氮.穩(wěn)定劑為10%二甲基亞砜和50%犢牛血清的199液。注:微生物保護(hù)劑緩沖液的組成比例，不同廠家有不同的配方。第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）第19頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日五、獸醫(yī)生物制品常用的保護(hù)劑1.5%蔗糖脫脂乳蔗糖(或乳糖)5g,加脫脂乳至100ml,充分后,110~116℃高壓滅菌30~40min.3.SPGA保護(hù)劑蔗糖76.62g、磷酸二氫鉀0.52g、磷酸氫二鉀1.64g、谷氨酸鈉0.83g、牛血清白蛋白10g、加去離子水至1000ml，混合溶解,過濾除菌。

2.根據(jù)化學(xué)性質(zhì)明膠:2%-3%(g/m1)、蔗糖5%(g/m1)、硫脲1%-2%(g/m1)。先將12%-18%明膠液、30%蔗糖液和6%-12%硫脲液加熱溶解，116℃高壓滅菌30~40min；

第二節(jié)保護(hù)劑（穩(wěn)定劑）第20頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日一、佐劑概念與作用機(jī)理1.佐劑(新):凡是可以增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。2.佐劑(舊):當(dāng)一種物質(zhì)先于抗原或與抗原混合或同時注射于動物體內(nèi)，能非特異性地改變或增強(qiáng)機(jī)體對該抗原的特異性免疫應(yīng)答,發(fā)揮其輔佐作用的物質(zhì).

以前作為佐劑使用時沒有免疫原性,但現(xiàn)在有所改變,如IL-2佐劑和IL-8一類細(xì)胞因子佐劑卻不一樣,具有免疫調(diào)節(jié)和免疫增強(qiáng)作用,單獨使用時卻具有免疫原性。注意:佐劑和免疫增強(qiáng)劑的關(guān)系?

有時佐劑也是免疫增強(qiáng)劑.第三節(jié)免疫佐劑第21頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日一、佐劑概念與作用機(jī)理3.作用特點1)明顯增強(qiáng)抗原性微弱的物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。2)用最少的抗原和最少的接種次數(shù)，產(chǎn)生足夠的免疫應(yīng)答。第三節(jié)免疫佐劑第22頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日一、佐劑概念與作用機(jī)理4.作用方式1）改變正常免疫機(jī)能,吸引大量巨噬細(xì)胞以吞噬抗原.2）改變抗原構(gòu)型,使抗原物質(zhì)降解,并加強(qiáng)其免疫原性；3）延長抗原在組織內(nèi)的貯存時間,使抗原緩慢降解和緩釋,并發(fā)揮免疫系統(tǒng)的細(xì)胞間協(xié)同作用（巨噬細(xì)胞與T細(xì)胞，T細(xì)胞與B細(xì)胞）。第三節(jié)免疫佐劑第23頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日一、佐劑概念與作用機(jī)理5.作用機(jī)理1）抗原遞呈（antigenpresentation）2）抗原尋的（antigentargeting）3）免疫調(diào)節(jié)（immunemodulation）第三節(jié)免疫佐劑第24頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日1)抗原遞呈:指抗原分子遞呈給T細(xì)胞的方法。第三節(jié)免疫佐劑佐劑與疫苗聯(lián)合使用，有助于抗原性物質(zhì)在胞內(nèi)被加工，被MHC分子特異性的結(jié)合、保護(hù)、運(yùn)輸并遞呈給效應(yīng)細(xì)胞。第25頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日2)抗原尋的:指抗原傳遞給免疫系統(tǒng)中適當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞的效率。包括吸引巨噬細(xì)胞到達(dá)組織部位、活化吞噬細(xì)胞、促進(jìn)抗原與細(xì)胞受體的結(jié)合等有重要作用。第三節(jié)免疫佐劑3)免疫調(diào)節(jié):

是指任何可以修飾的免疫效應(yīng)細(xì)胞對抗原或表位進(jìn)行加工的機(jī)制.通過這種機(jī)制，可以改變特異性免疫應(yīng)答的本質(zhì)或強(qiáng)度.T細(xì)胞有Th1和Th2兩個亞類.同一抗原和不同佐劑一起使用能夠引起不同的免疫反應(yīng).因此,通過篩選特定的佐劑,可以達(dá)到誘導(dǎo)正確的免疫應(yīng)答的目的。第26頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第三節(jié)免疫佐劑第27頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日1.按物理性質(zhì)顆粒型佐劑非顆粒型佐劑2.按生物學(xué)性質(zhì)微生物及其組分非微生物物質(zhì)3.按佐劑在體內(nèi)存留的時間貯存型佐劑（depottypeadjuvant）非貯存型（non-depottypeadjuvant）二、佐劑的分類第三節(jié)免疫佐劑第28頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第三節(jié)免疫佐劑1．鹽類佐劑氫氧化鋁膠、明礬、磷酸鋁等。2．油水乳劑佐劑弗氏完全佐劑（Freund’scompleteadjuvant,FCA）弗氏不完全佐劑（FIA）和礦物油白油佐劑。3．免疫刺激復(fù)合物佐劑（ISCOM）4．蜂膠佐劑（propolis）5．脂質(zhì)體佐劑（liposomes）。6．其他：MF59佐劑、微囊化佐劑（micro-encapsulation)、硬脂酰酪氨酸佐劑和γ－菊粉等。（一）顆粒型佐劑第29頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第三節(jié)免疫佐劑（一）顆粒型佐劑1.鹽類佐劑：氫氧化鋁膠、明礬、磷酸鋁等。氫氧化鋁膠合成方法:

（1）用鋁粉加燒堿合成法

2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3·18H2O

A12(SO4)3·18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O（2）用明礬加碳酸鈉合成法

2KAl(SO4)2+3Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2↑（3）用三氯化鋁與氫氧化鈉合成

A1C13+3NaOH→Al(OH)3↓+3NaCl第30頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日用鋁粉加燒堿合成法：

2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3·18H2O

A12(SO4)3·18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O用銅紗篩濾過，用布袋脫水過夜，收存于容器內(nèi)，可約得600kg鋁膠。取氫氧化鋁干粉50～55kg，加入6萬毫升沸水中，攪拌均勻;倒入硫酸100kg，爆沸至棕褐色，經(jīng)30～60min后，加溫水，邊加邊攪拌約至總量為35萬毫升；用前加水稀釋至100萬毫升，溫度約為80℃，盛裝在一個缸內(nèi)另一缸盛80kg燒堿，加水至100萬毫升，加溫至75℃兩液等量逐漸流入另一耐酸搪瓷缸內(nèi)，蒸汽吹沸熟化10min，調(diào)節(jié)pH6.9土0.1，繼續(xù)熟化3min，穩(wěn)定pH6.9土0.1靜置沉淀，棄上清后加入約5倍量軟化水，攪拌洗滌、棄上清，如此3～5次，檢查至硫酸鹽合格為止。第三節(jié)免疫佐劑第31頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日注意事項氫氧化鋁吸附力較強(qiáng)，所以要用軟化水或去離子水洗滌。氫氧化鋁膠為兩性化合物，過酸或過堿都會失去膠態(tài)。故要掌握好化合時的pH值。貯存鋁膠應(yīng)放在耐酸搪瓷缸或耐酸池中，嚴(yán)密封蓋，貯放期不超過3個月。鋁膠室溫保存，以免破壞膠態(tài)。第三節(jié)免疫佐劑第32頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日2.油水乳劑佐劑一種好的乳劑疫苗應(yīng)是油包水（W/O）或水包油（O/W）型，粘度低，顆粒均勻，穩(wěn)定性良好，呈乳白色。“乳劑”是將一種溶液或干粉分散成細(xì)小的微粒,混懸于另一不相溶的液體中所成的分散體系.被分散的物質(zhì)稱為分散相(內(nèi)相),承受分散相的液體稱連續(xù)相（外相），兩相間的界面活性物質(zhì)稱為乳化劑。第三節(jié)免疫佐劑是指一類由油類物質(zhì)和乳化劑按一定比例混合形成的佐劑。該類佐劑主要在抗原尋的過程中起作用，使抗原在注射部位保持穩(wěn)定，為抗原在淋巴系統(tǒng)中轉(zhuǎn)運(yùn)提供載體，增加單核細(xì)胞的形成和積聚。油乳劑疫苗的免疫效力高低，直接與乳化作用的好壞和乳劑成分的質(zhì)量等有關(guān)。第33頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日天然乳化劑：阿拉伯膠、海藻酸鈉、蛋黃以及煉乳乳化劑第三節(jié)免疫佐劑人工合成乳化劑離子型:陰離子類乳化劑：十二烷基磺酸鈉和硬脂酸鋁陽離子類乳化劑：氯化苯甲烴銨、溴化十六烷三甲基非離子型：月桂酸聚甘油脂、山梨醇脂和單油酸脂、司本-80、吐溫-80第34頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日國內(nèi)外常用白油：Drakocel-6VR、Marcol-52和Lipolul-47號或10號白油白油佐劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):

無色無味，50℃運(yùn)動粘度7m2／s左右。紫外吸收A250-350＜0.1％，紫外消光系數(shù)＜12×108；單環(huán)芳烴與雙環(huán)芳烴含量低于0.5％,無多環(huán)芳烴；小鼠腹腔注射0.5ml或家免皮下注射2.0ml白油，觀察60d，表現(xiàn)正常。第三節(jié)免疫佐劑第35頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日（1）劑在水中法：乳劑配方與乳化方法第三節(jié)免疫佐劑

將乳化劑直接溶于水中，在激烈攪拌下將油加入，可直接生成O/W乳劑。若欲得W/O型，可繼續(xù)加入油，直到發(fā)生變型。該法通常用勻漿器或膠體磨，高速攪拌而得到較好的乳劑。（2）劑在油中法：

將乳化劑溶于油相，將油相直接加入水相中得O/W，如水相直接加入油相，得到W/O型，如欲得O/W，繼續(xù)加入至變型。該法制成的乳劑，一般均勻顆粒直徑在0.5μm左右，比較穩(wěn)定。第36頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日免疫實驗動物用的佐劑配制(1)弗氏佐劑：第三節(jié)免疫佐劑礦物油75%-85％，乳化劑15％-25%，混合后經(jīng)除菌過濾而成為FIA；如向其中加入0.5mg／m1死結(jié)核桿菌即為FCA。使用時，將含抗原的水相，與上述任一佐劑等量混合，用力振搖即可成為均勻的乳劑。

9份油和1份司本-80混合后加2％吐溫-80和1％~2%硬脂酸鋁，經(jīng)高壓滅菌后備用，注射前將配好的油佐劑與抗原水相1：1混合，強(qiáng)力振搖，可配制成性狀良好的乳劑疫苗.

(2)白油佐劑：第37頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日大量生產(chǎn)乳劑疫苗油相:

94%白油.6%司本-80.1%-2%硬脂酸鋁,滅菌；水相：抗原液加2％-4%吐溫-80乳化：將油相與水相按3:1-2:1比例配制，先緩速混合，再通過膠體磨充分乳化，可獲得穩(wěn)定的油包水乳劑苗。或者將粘稠的W/O乳劑疫苗，再加2％吐溫-80生理鹽水，通過攪拌或膠體磨乳化，可制成雙相乳劑疫苗。第三節(jié)免疫佐劑第38頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日油乳劑檢驗（1）粘度測定:流出法、Saybolt粘度計法第三節(jié)免疫佐劑吸管內(nèi)口直徑為1.2mm，室溫下吸滿lml乳劑，垂直放出0.4ml所需時間作為粘度單位。（2）乳劑穩(wěn)定性測定：①加速老化法：疫苗于37℃貯存10-30d不破乳。②離心加速分層法：3000rpm離心15min不分層，相當(dāng)于保存1年以上不破乳。第39頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日胰消化酶的作用3.免疫刺激復(fù)合物1)ISCOM由抗原物質(zhì)與由皂樹皮提取的一種糖苷QuilA和膽固醇按1:1:1混合后自發(fā)形成的一種具有較高免疫活性的脂質(zhì)小泡。2)ISCOM直徑40nm，每個ISCOM約含10～12分子的蛋白質(zhì)。3)ISCOM應(yīng)用于多種細(xì)菌、病毒和寄生蟲病的疫苗，具有產(chǎn)生“全面”免疫應(yīng)答的效力，可長期增強(qiáng)特異性抗體應(yīng)答。4)ISCOM能有效地通過粘膜給藥，從而可以用于抗呼吸道感染。5)目前，獸用ISCOM疫苗已在國外投放市場。第40頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日供免疫佐劑用的蜂膠外觀應(yīng)具備其固有的特征是一種優(yōu)良的天然藥物具有廣泛的生物活性和藥理作用(抗菌、抗病毒、抗腫瘤、消炎)4.蜂膠佐劑第三節(jié)免疫佐劑具有免疫增強(qiáng)作用

能保持抗原特性，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，提高機(jī)體的特異性和非特異性免疫力。

第41頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日蜂膠佐劑疫苗制備方法（1）蜂膠的處理：A.蜂膠（4℃以下貯存）b.粉碎過篩c.按1:4(W/V)加95％乙醇,室溫浸泡24～48hd.冷卻,過濾或離心取上清e.透明栗色純凈蜂膠浸液,4℃以下保存?zhèn)溆胒.除去干渣計算出浸液中含蜂膠量。

滅活菌液或病毒液，加入蜂膠乙醇浸液，使每毫升菌液中含蜂膠10mg，邊加邊搖蕩，成為乳濁狀，即可。（2）蜂膠佐劑疫苗的制備：第三節(jié)免疫佐劑第42頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第三節(jié)免疫佐劑（二）非顆粒性佐劑1．肽類佐劑（peptides）：胞壁酰二肽（MDP）及其衍生物、去胞壁酰多肽、脂肽和免疫調(diào)節(jié)多肽。2．表面活性分子類佐劑：海藻糖合成衍生物（TDM）3．核酸及其衍生物類佐劑：合成核苷酸聚合體、CpG4．含硫復(fù)合物類佐劑：左旋咪唑5．碳水化合物高分子類佐劑：香菇多糖、DEAE-葡聚糖6．細(xì)胞因子類佐劑（cytokine）：IL-2、IL-4和γ-IFN等。7．脂質(zhì)分子類佐劑:脂多糖、VitA和VitE等脂溶性維生素8．其他：霍亂毒素（CT）、百日咳毒素（PT）和破傷風(fēng)類毒素（TT）等；脂磷壁酸（LTA）；維生素B12等。第43頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日細(xì)胞因子類免疫佐劑細(xì)胞因子的概念

是機(jī)體的各種細(xì)胞在其生命周期中所釋放的具有不同生物學(xué)效應(yīng)的物質(zhì)，是免疫細(xì)胞間相互作用的調(diào)節(jié)信號。該類物質(zhì)相互誘生，相互影響，構(gòu)成一個巨大的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)（cytokinenetwork）系統(tǒng)，各種細(xì)胞借助自己所釋放的細(xì)胞因子完成各自的功能，在免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用。第三節(jié)免疫佐劑1第44頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日細(xì)胞因子類免疫佐劑細(xì)胞因子的分類1)經(jīng)典的細(xì)胞因子：淋巴毒素（LT）腫瘤壞死因子（TNF）干擾素（INF）2)對體液免疫和細(xì)胞免疫具有調(diào)節(jié)作用的因子：白細(xì)胞介素（IL）集落刺激因子（CSF）第三節(jié)免疫佐劑1第45頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第三節(jié)免疫佐劑第46頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日第三節(jié)免疫佐劑第47頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日細(xì)胞因子類免疫佐劑細(xì)胞因子作用特點1)多效性：①免疫調(diào)節(jié)作用的多樣性②作用方式的非特異性：不表現(xiàn)抗原特異性2)靶細(xì)胞的多樣性：構(gòu)成機(jī)體細(xì)胞—細(xì)胞調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)3)多源性：4)高效性：有免疫激素（immunehormone）之稱5)快速反應(yīng)性：即對激發(fā)因素的迅速反應(yīng)第三節(jié)免疫佐劑1第48頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日細(xì)胞因子類免疫佐劑細(xì)胞因子應(yīng)用1)作為免疫佐劑，提高疫苗的免疫效果。2)作為免疫治療劑，預(yù)防和治療某些病原感染。3)通過基因重組，構(gòu)建新型基因工程疫苗IL-2-AIV-HA重組痘病毒。第三節(jié)免疫佐劑1第49頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日細(xì)胞因子類免疫佐劑幾種重要的細(xì)胞因子

1)白細(xì)胞介素-2（IL-2）

2)白細(xì)胞介素-4（IL-4）

3)白細(xì)胞介素-12（IL-12）4)γ-干擾素（IFN-γ）第三節(jié)免疫佐劑1第50頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日鹽酸、脂肪、高滲溶液白細(xì)胞介素-2(IL-2)刺激物為抗原或促有絲分裂原(ConA);T細(xì)胞分泌；無抗原特異性糖蛋白.含133aa,分子量15-35kDa;70℃30min及pH值2-9范圍內(nèi)穩(wěn)定.1)第三節(jié)免疫佐劑第51頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日鹽酸、脂肪、高滲溶液白細(xì)胞介素-4(IL-4)

刺激物:抗原或絲裂原;由Th細(xì)胞產(chǎn)生分子量15～20kDa.有2～3個糖基化部位.140個氨基酸一種強(qiáng)有力的佐劑候選因子.2)第三節(jié)免疫佐劑第52頁，共60頁，2023年，2月20日，星期日鹽酸、脂肪、高滲溶液白細(xì)胞介素-12(IL-12)

是目前發(fā)現(xiàn)的唯一主要由B細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，與IL-2有協(xié)同作用，所以曾被稱為細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞成熟因子（CLMF）和天然殺傷細(xì)胞刺激因子（NKSF）。3)第三節(jié)免疫佐劑

糖蛋白，分子量75kDa，由40kDa（P40）和35kDa（P35）兩個亞單位構(gòu)成，兩個亞單位完全由不同的基因所編碼，只有結(jié)合為一個完整的分子時才能發(fā)揮生物學(xué)活性。

IL-12活性高于IL-2和IFN，在極低濃度時就有顯著活性，對滅活疫苗、腫瘤和寄生蟲抗原具有有效的佐劑活性。

IL-12誘導(dǎo)產(chǎn)生的Th1應(yīng)答反應(yīng)尤為引人注目，可望用于主要誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的疫苗