檢驗與臨床實驗室應用

檢驗與臨床實驗室應用第1頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五檢驗一般了解1檢驗科方法簡單了解2PCT3CRP4心臟標準物5總結(jié)第2頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五檢驗科和實驗室區(qū)別檢驗科：常規(guī)工作量大臨床要求快臨床檢驗工作最基本要求及時方便準確臨床檢驗人員對儀器及試劑要求管用好用實用實驗室：特殊項目科研為主量少

檢驗項目：形態(tài)學定性和定量第3頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五檢驗報告形式一濃度分析1定性2定量二形態(tài)報告1細胞2細菌3管型第4頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五一按反應原理分類（定量）1用化學試劑測定方法叫化學法。如蛋白鈣鎂2用酶測定方法叫酶法。如葡萄糖谷丙轉(zhuǎn)氨酶3用抗原抗體反應原理方法叫免疫法。HBsAg4用原子吸收方法叫色譜法。鉀鈉5用電泳分離方法叫電泳法。蛋白電泳高壓液相色譜6測定蛋白分子用酶聯(lián)聚合反應即PCR方法。DNA7生物傳感器。血氣血糖第5頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五二按方法敏感性分類1超微量法微克以下皮克納克一般用免疫發(fā)光法激素腫瘤標志物2微量法毫克以下微克一般用金標法或膠乳法散射法RFCRP3常量法克以下毫克一般用生化法白蛋白甘油三脂第6頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五根據(jù)反應產(chǎn)物特性分1比色常用生化測定2比濁抗原抗體測定3散射可標記乳膠4測定光強度往往標記第7頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五主要反應方式1液體反應生化免疫等成本低線性寬靈敏度高2干式反應干生化免疫層析滲濾法相對靈敏度低線性窄成本高往往單人份包裝第8頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五標記技術(shù)分類1放射物質(zhì)標記2熒光物質(zhì)標記3酶物質(zhì)標記4金標記（鐵銅硒）5發(fā)光物標記第9頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五測定方法

1決定性方法2參考方法3常規(guī)方法1→2→3的過程叫正確度傳遞3→2→1的過程叫溯源第10頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五超微量分析（化學發(fā)光）目前按方法形式分類1板式發(fā)光（包被在板上）須洗滌和分離反應手續(xù)多反應慢均相發(fā)光分洗滌和無洗滌二種簡單和反應快發(fā)光按反應方式：干式反應和濕反應儀器分：全自動半自動

第11頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五化學發(fā)光

免疫化學發(fā)光分：1酶底物發(fā)光（鹼性磷酸酶）貝克曼2直接發(fā)光（丫叮脂）西門子3電發(fā)光（釕）羅氏4時間分辨熒光（銪）德普5微粒熒光透景6無須分離直接發(fā)光博陽第12頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五方法學要求1精密度批內(nèi)批間變異系數(shù)CV％表示2正確度和目前公認結(jié)果比較偏差<5％3穩(wěn)定性好4反應快5抗干擾能力強第13頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五分析儀器按反應狀態(tài)分類

1干式反應萬孚飛測金標定量

2濕式反應生化儀發(fā)光儀

第14頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五四按反應方便程度分類1手工法2半自動3全自動第15頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五儀器要求1精密度好CV<5%2可靠性好3年內(nèi)無故障3操作方便一看就會檢驗科需要可靠的產(chǎn)品！成功→成熟→可靠第16頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五五檢驗科應用趨勢分類簡便化POCT2整個實驗室全自動第17頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五目前POCT技術(shù)種類

1干化學血糖尿液2多層涂膜強生3免疫金標記（層析或滲濾法）各種金標HCG

4生物傳感器血氣第18頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五

即時檢驗（POCT）目的：就地檢驗，結(jié)果提高醫(yī)學工作效率。定義：現(xiàn)場即刻進行分析，快速得到結(jié)果。特點：無須專業(yè)培訓可進行臨床化學檢測。成本：單份貴，總成本低。降低醫(yī)療費用（治療時間縮短）理念：用最短時間、最簡便而經(jīng)濟的技術(shù)，得到準確結(jié)果。前景：隨著生物技術(shù)進步，應用領(lǐng)域更多（家庭、病房、監(jiān)護室、食品衛(wèi)生、環(huán)境保護、禁毒、法醫(yī)等）每年15%遞增第19頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五POCT運用

1運用范圍會越來越廣醫(yī)學環(huán)保食品衛(wèi)生ATP技術(shù)2POCT趨勢占整個檢驗比例會明顯提高。第20頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五POCT在急診醫(yī)學中運用

1心肌損傷項目CKMM肌紅肌鈣BNP美國BIOSITE加拿大RAMP羅氏TropT2感染性疾病CRPPCT挪威Nycocard芬蘭OrionDiagnostics國賽3血氣及代謝物第21頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五目前POCT技術(shù)種類

5免疫發(fā)光標記韓國i－CHROMA6微型傳感器類血氣電解質(zhì)7血凝類間接明膠法TPPA8乳膠類CRP9生物芯片蛋白芯片分子診斷10快速單份液體生化第22頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五PCT是什么？

性質(zhì)：蛋白質(zhì)分子量13000氨基酸116個合成：在細菌感染的誘導下，除甲狀腺c細胞外，可能是肝臟巨噬細胞、單核細胞、腸及肺的內(nèi)分泌細胞分泌。半衰期：19-24小時濃度：正常人小于0.1ug/L第23頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五PCT目前測定有方法快速檢測：金標法熱電公司乳膠法南京熒光法萬孚德國B-H公司等免疫發(fā)光法：羅氏電發(fā)光法國梅里埃酶底物發(fā)光新產(chǎn)業(yè)魯迷鈉發(fā)光

第24頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五樣本要求血漿（EDTA,肝素檸檬酸鹽）或血清穩(wěn)定性：室溫4小時第25頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五在一次內(nèi)毒素刺激的人體試驗中

不同的標志物的動力學變化ReinhartK,etal.CritCareClin2006;22;503-519快速、高特異性的增長

在膿毒癥情況下，3-6小時即可檢測到其水平的增長快速衰減

半衰期約20-24小時，可以快速反映治療效果在疾病監(jiān)測方面，PCT有著自然的優(yōu)勢!第26頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五PCT的臨床應用1.膿毒癥：各種微生物所致感染的全身炎癥反應，同時伴有這些微生物或其毒素侵入血液引起疾病。敗血癥膿毒綜合癥膿毒癥休克全身性炎癥反應綜合癥（SIRS)是一種有特性臨床反應。第27頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五SIRS至少含有以下二種或更多標準

1體溫>38C或<36C2心率>90次/每分3呼吸頻率>20次/每分4白細胞>12000/uL或<4000/uLSIRS主要由微生物感染所引起，其他非感染如嚴重缺氧，燒傷、急性胰腺炎等也可以造成。第28頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五炎癥診斷試驗1，體溫測量2，白細胞計數(shù)和分類3，血沉4，血清蛋白電泳5，CRP6，IL-6IL-8第29頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五PCT在膿毒血癥應用1，區(qū)分是否細菌感染，越高感染病情越重2，肺炎中應用鑒別細菌性和病毒性3，全身性真菌感染應用4，腦膜炎鑒別中應用5，新生兒感染中應用

第30頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五PCT監(jiān)控具有高度感染的患者應用1，重危患者2，大手術(shù)后3，器官移植第31頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五PCT在療效觀察中應用1，膿毒癥2，多器官衰竭3，休克4，感染后手術(shù)治療第32頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五CRP

1肝臟合成，結(jié)構(gòu)五聚體是一種急性時相反應蛋白。2特點：本地很低，當受到刺激時（一般6小時）迅速升高可達1000倍。3臨床應用普遍。第33頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五CRP與PCT的應用比較CRP:炎癥過程的篩選6小時后上升2天達高峰CRP高提示病變存在。PCT：診斷和監(jiān)測細菌性疾病感染一個參數(shù)是嚴重細菌性和真菌感染特異性標志。也是膿毒癥和炎癥活動有關(guān)多臟器衰竭的可靠指標?；颊吆棉D(zhuǎn)PCT比CRP反應快，而CRP有較長時間才下降。第34頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五CRP和PCT的比較相同：都是急性時相反應蛋白CRP是臨床運用特點是炎癥指標，在感染性炎癥和非感染性炎癥，組織損傷、局部和全身的輕度中度重度的感染和各種輕中度損傷中應用。PCT運用在嚴重細菌感染及膿毒血癥第35頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五CRP和PCT的比較PCT指標在細菌感染方面相對特異CRP指標相對特異性差在病毒感染中PCT不升高，CRP會輕中度升高，在細菌感染中CRP呈現(xiàn)一般中度以上升高，持續(xù)時間長，PCT只有在嚴重細菌感染時才會升高，治療好轉(zhuǎn)就下降。第36頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五檢測項目主要臨床意義臨床意義：共性有二點1，診斷和鑒別診斷2，療效觀察PCT臨床意義PCT作為急性時相反應蛋白（APR)一種，一般認為在持續(xù)毒素刺激下，6－8小時開始升高第37頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五CRP臨床意義

1主要用于各種損傷、感染、治療等觀察。2超敏CRP主要用于心血管疾病。BNP主要用于慢性心衰的評估肌鈣蛋白主要用于心肌損傷及梗死第38頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五PCT臨床意義總結(jié)PCT只有在嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染及膿毒癥和多臟器功能衰竭時測定才有意義。在自身免疫、過敏和病毒感染時不升高。因此PCT在細菌性疾病鑒別、監(jiān)控細菌性感染及病程預后估計等方面有意義。第39頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五檢驗科發(fā)展方向臨床檢驗發(fā)展基本要求：圍繞及時方便準確方針1整個檢驗科全自動2POCT（即時檢驗）系統(tǒng)化優(yōu)點溯源性不準確度4信息化第40頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五提高內(nèi)涵、把握方向、持續(xù)進步1做企業(yè)或公司：誘惑多最重要不是選擇而是放棄得到空間更大堅信基本判斷項目找對成功一大半2生存法則：守住底線、創(chuàng)造空間3確定方向：想做什么？能做什么？4市場要什么：不是你有我有。而是排他性即唯一性5社會需要什么：可靠、放心、方便、環(huán)保最好創(chuàng)造新產(chǎn)業(yè)第41頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五目前市場上哪些品牌可以真正實現(xiàn)一步法加樣？PCT/心標等：明德、樂普、基蛋（金標半定量）CRP：迪倍思（金標半定量，加樣后需補加緩沖液），其他品牌均需要加樣前稀釋/預處理第42頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五國賽CRP-散射比濁法操作步驟：第43頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五禾柏CRP-散射比濁法第44頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五艾克美CRP-熒光免疫法第45頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五奧普CRP-金標法第46頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五凱創(chuàng)CRP-金標法第47頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五熱景CRP-上轉(zhuǎn)發(fā)光法第48頁，共51頁，2023年，2月20日，星期五檢驗科需