生物安全柜的正確使用和維護(hù)演示文稿

生物安全柜的正確使用和維護(hù)演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有91頁\編輯于星期三生物安全柜的

正確使用和維護(hù)

浙江省疾病預(yù)防控制中心

翁景清

現(xiàn)在是2頁\一共有91頁\編輯于星期三第一節(jié)選型原則1、根據(jù)工作性質(zhì)病原微生物危害程度有無毒揮發(fā)性氣體是否涉及放射性物質(zhì)2、具備醫(yī)療器械注冊(cè)證3、產(chǎn)品質(zhì)量與品牌現(xiàn)在是3頁\一共有91頁\編輯于星期三醫(yī)療器械分類現(xiàn)在是4頁\一共有91頁\編輯于星期三醫(yī)療器械注冊(cè)證現(xiàn)在是5頁\一共有91頁\編輯于星期三BIBASE生物安全柜(B2型)現(xiàn)在是6頁\一共有91頁\編輯于星期三前言生物安全柜（BiosafetyCabinet,BSC)：在生物因子操作過程中用來保護(hù)操作人員、環(huán)境和（或）實(shí)驗(yàn)物品，防止其暴露于實(shí)驗(yàn)中（可能）產(chǎn)生的危險(xiǎn)性或潛在危險(xiǎn)性生物氣溶膠或?yàn)R出物的負(fù)壓通風(fēng)裝置。是微生物實(shí)驗(yàn)室的重要設(shè)備，保護(hù)操作者和環(huán)境，有些保護(hù)物品，屬一級(jí)安全隔離屏障，關(guān)系人體生命安全，要求非常嚴(yán)格。在SARS后，大量使用安全柜?，F(xiàn)在是7頁\一共有91頁\編輯于星期三安全柜標(biāo)準(zhǔn)EN12469:2000Biotechnology-Performancecriteriaformicrobiologicalsafetycabinets(生物技術(shù)微生物安全柜性能標(biāo)準(zhǔn))NSF/ANSI49:2004ClassⅡ(laminarflow)biosafetycabinetry(Ⅱ級(jí)（層流）生物安全柜)制定我國(guó)的標(biāo)準(zhǔn):國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《生物安全柜》YY0569-2005(行業(yè)標(biāo)準(zhǔn))

發(fā)布:2005-07-18實(shí)施:2006-06-01生物安全柜（ＪＧ170-2005）中華人民共和國(guó)建設(shè)部發(fā)布（建筑工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）（2006-06-01實(shí)施）現(xiàn)在是8頁\一共有91頁\編輯于星期三

第二節(jié)

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)和歐美標(biāo)準(zhǔn)比較2006年6月1日，中國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY0569-2005正式實(shí)施了，這是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）于2005年7月18日發(fā)布的醫(yī)藥行業(yè)關(guān)于生物安全柜的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，據(jù)行業(yè)人士認(rèn)為，這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施將會(huì)引發(fā)中國(guó)生物安全柜行業(yè)的重新洗牌。

現(xiàn)在是9頁\一共有91頁\編輯于星期三標(biāo)準(zhǔn)YY0569-2005正式實(shí)施，是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）于2005年7月18日發(fā)布的醫(yī)藥行業(yè)關(guān)于生物安全柜的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，不同于2005年6月1日實(shí)施的由建設(shè)部編制的《生物安全柜》JG170-2005的建設(shè)工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。醫(yī)藥行業(yè)的YY0569-2005標(biāo)準(zhǔn)的編制是參照歐洲標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CEN)頒布的生物安全柜歐洲標(biāo)準(zhǔn)EN12469:2000和由美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(huì)（AmericanNationalStandardInstitute,ANSI）官方認(rèn)可的美國(guó)NSF49生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)在是10頁\一共有91頁\編輯于星期三YY0569-2005的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)積極吸收采納了EN12469和NSF49這兩個(gè)生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)中的重要部分，并將這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中相對(duì)薄弱的部分作出了提高修改，使中國(guó)的YY0569-2005標(biāo)準(zhǔn)成為世界上生物安全柜領(lǐng)域最權(quán)威的標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)在是11頁\一共有91頁\編輯于星期三一．安全柜型號(hào)方面，中國(guó)YY0569-2005采取了和美國(guó)NSF49-2002相同的規(guī)定：將二級(jí)安全柜細(xì)分成四個(gè)型號(hào)

首先，這三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)生物安全柜的大分類以及性能要求方面都有相同的規(guī)定：

對(duì)于二級(jí)生物安全柜的分類標(biāo)準(zhǔn)方面，中國(guó)YY0569-2005標(biāo)準(zhǔn)和美國(guó)NSF49標(biāo)準(zhǔn)一樣，不同于歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn)：

現(xiàn)在是12頁\一共有91頁\編輯于星期三從最基本的方面來說，三種類型安全柜都可以提供對(duì)操作人員、試驗(yàn)品和工作環(huán)境的保護(hù)；工作原理也相同。最大的區(qū)別是EN12469只對(duì)“二級(jí)生物安全柜”有一個(gè)基本的定義，而YY0569同NSF49一樣，將二級(jí)生物安全柜依照前窗操作口流入氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式等分為4個(gè)類型：A1型，A2型(原B3型),B1型和B2型。

現(xiàn)在是13頁\一共有91頁\編輯于星期三二．對(duì)于安全柜的柜體結(jié)構(gòu)、性能和測(cè)試方面，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)充分吸收了歐美標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)點(diǎn)，采用的是兩者中最嚴(yán)格的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)。

現(xiàn)在是14頁\一共有91頁\編輯于星期三對(duì)于柜體結(jié)構(gòu)，EN12469和NSF49都是以規(guī)范性能為基礎(chǔ)，不是通過細(xì)節(jié)規(guī)格要求去規(guī)定生產(chǎn)商如何制作安全柜；相反，生產(chǎn)商擁有很大的自由去設(shè)計(jì)自己的安全柜，只要能符合性能測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)就可以。現(xiàn)在是15頁\一共有91頁\編輯于星期三而中國(guó)的YY0569則明確規(guī)定了安全柜的柜體結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)：II級(jí)A2、B1、B2型安全柜的工作區(qū)均應(yīng)該采用四面（左右兩面、后部、底部）雙層結(jié)構(gòu)。三個(gè)類型安全柜的所有污染部位均應(yīng)處于負(fù)壓狀態(tài)或被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。II、III級(jí)安全柜裸露工作區(qū)內(nèi)三面?zhèn)缺诎鍛?yīng)為一體成型結(jié)構(gòu)，內(nèi)表面的拼接處必須做密封處理等等。可以看出中國(guó)的YY0569標(biāo)準(zhǔn)相比歐美的標(biāo)準(zhǔn)更加明確規(guī)范了安全柜的柜體結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，更符合現(xiàn)在生物、化學(xué)等方面的實(shí)驗(yàn)要求。

現(xiàn)在是16頁\一共有91頁\編輯于星期三三．物理性能測(cè)試和合格標(biāo)準(zhǔn)

YY0569、EN12469和NSF49都詳細(xì)規(guī)定了安全柜的各項(xiàng)測(cè)試方法和合格標(biāo)準(zhǔn)，三者的區(qū)別和聯(lián)系介紹如下：

現(xiàn)在是17頁\一共有91頁\編輯于星期三1.人員、試驗(yàn)品和環(huán)境保護(hù)的微生物挑戰(zhàn)測(cè)試

在對(duì)人員、產(chǎn)品和環(huán)境以及產(chǎn)品的防交叉污染保護(hù)項(xiàng)目測(cè)試中，三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試方法、合格標(biāo)準(zhǔn)基本相同，即用微生物挑戰(zhàn)法來測(cè)試。但在人員保護(hù)測(cè)試中，中國(guó)的YY0569標(biāo)準(zhǔn)采用了同歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn)一樣的，被認(rèn)為是常規(guī)微生物挑戰(zhàn)測(cè)試基礎(chǔ)上更為方便快捷的物理測(cè)試方案(KI-Discus測(cè)試)。

現(xiàn)在是18頁\一共有91頁\編輯于星期三這種測(cè)試方法可以在1分鐘內(nèi)完成檢測(cè)結(jié)果，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于微生物法的48小時(shí)以上的培養(yǎng)所需要的時(shí)間，這就使得安全柜的生產(chǎn)廠家對(duì)出廠前的每臺(tái)安全柜都進(jìn)行檢測(cè)變成了可能，保證了每臺(tái)出廠產(chǎn)品的安全性，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于采用微生物挑戰(zhàn)法對(duì)產(chǎn)品抽檢的廠家。

現(xiàn)在是19頁\一共有91頁\編輯于星期三2.下降氣流流速測(cè)試

下降氣流流速對(duì)安全柜試驗(yàn)樣品保護(hù)和交叉感染防護(hù)性能起到重要的影響，例如氣流流速太小將導(dǎo)致試驗(yàn)樣品失去保護(hù)。YY0569和EN12469都規(guī)定了二級(jí)安全柜下降氣流流速的許可范圍為，而NSF49沒有給出任何下降氣流速率要求。

現(xiàn)在是20頁\一共有91頁\編輯于星期三在下降氣流流速的測(cè)試方法上，YY0569則采用了和NSF49相似的方法（原理是一致的）。YY0569和NSF49都規(guī)定了多個(gè)測(cè)試點(diǎn)，這代表更高的測(cè)量精度要求；其中YY0569使用的的熱式風(fēng)速儀，NSF49使用的是溫差式風(fēng)速儀，而EN12469則沒有對(duì)測(cè)量?jī)x器的準(zhǔn)確度和類型進(jìn)行規(guī)定。現(xiàn)在是21頁\一共有91頁\編輯于星期三同時(shí)，YY0569和NSF49都通過規(guī)范有關(guān)測(cè)試儀器的精度和型號(hào)來提高測(cè)試的精度，并且YY0569還把安全柜的下降氣流分為更細(xì)的均勻下降和非均勻下降兩種模式，比NSF49的要求又提高一步。這說明在氣流流速側(cè)測(cè)試方面YY0569要優(yōu)于美國(guó)的NSF49，更優(yōu)于歐洲的EN12469標(biāo)準(zhǔn)。

現(xiàn)在是22頁\一共有91頁\編輯于星期三3.流入氣流流速測(cè)試

在流入氣流測(cè)試方面，YY0569采用的標(biāo)準(zhǔn)同歐標(biāo)EN12469一樣，通過外排氣流估算流入氣流流速，美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)采用的是直接流入氣流流速測(cè)試方法。這兩種方法測(cè)試的原理雖然不同但結(jié)果一樣。同時(shí)YY0569、EN12469和NSF49都對(duì)最低流入氣流流速有規(guī)定。在這里我們比較A2型二級(jí)生物安全柜和歐洲“普通型”二級(jí)生物安全柜的要求：YY0569和NSF49對(duì)A2型二級(jí)生物安全柜的最低流入氣流速率的要求是0.5m/s，而EN12469對(duì)二級(jí)安全柜的要求是0.4m/s。

現(xiàn)在是23頁\一共有91頁\編輯于星期三4.工作舒適度有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：噪音、光強(qiáng)和震動(dòng)測(cè)試

在這幾個(gè)方面測(cè)試上YY0569、NSF49和EN12469有類似的測(cè)試方法，這里就不再討論。

現(xiàn)在是24頁\一共有91頁\編輯于星期三5.高效過濾器完整性測(cè)試

YY0569-2005和NSF49都規(guī)定過濾器完整性測(cè)試中使用的是氣溶膠噴發(fā)劑(例如DOP,PAO等)；歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn)（使用一樣的測(cè)試方法）使用另一種自然氣溶膠(自然空氣)的測(cè)試方法。大量的研究表明使用自然氣溶膠測(cè)試方法不能確保檢測(cè)到所有漏隙。因?yàn)槭褂脷馊苣z發(fā)生器噴發(fā)產(chǎn)生的氣溶膠顆粒，在發(fā)生器壓力的作用下能很容易的抵達(dá)和擴(kuò)散到安全柜內(nèi)任何規(guī)定的位置，并且能使氣溶膠均勻分布在柜內(nèi)規(guī)定的位置，特別是能完全覆蓋到高效過濾器和柜體結(jié)合的部位?，F(xiàn)在是25頁\一共有91頁\編輯于星期三而靠自然空氣使氣溶膠在柜內(nèi)擴(kuò)散的方法，由于柜內(nèi)自然空氣比較穩(wěn)定，流動(dòng)性和動(dòng)力很差，所以氣溶膠不會(huì)很均勻的擴(kuò)散到柜內(nèi)規(guī)定的部位，從而就可能有過濾器和柜體結(jié)合的部位沒有被氣溶膠完全覆蓋的可能導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果不精確。

現(xiàn)在是26頁\一共有91頁\編輯于星期三6.柜體泄漏的測(cè)試方法

在柜體泄漏的測(cè)試方法上，YY0569采用了不同于歐美兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的壓力衰減法，這個(gè)方法用到了壓力計(jì)或壓力傳感器系統(tǒng)來顯示柜內(nèi)壓力，可以定量的檢測(cè)安全柜柜體的密閉性，非常具有說服力。而NSF49規(guī)定用簡(jiǎn)單的皂泡法泄漏測(cè)試為生產(chǎn)商對(duì)所有安全柜的例行檢測(cè)，EN12469規(guī)定為獨(dú)立的認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)項(xiàng)目，而不是要求廠家在出廠時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。

現(xiàn)在是27頁\一共有91頁\編輯于星期三7.其他各類測(cè)試

在其他各個(gè)類型性能測(cè)試上，這三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)基本采用了相同的測(cè)試方法，如馬達(dá)和風(fēng)機(jī)性能測(cè)試、工作區(qū)溫升測(cè)試、柜體穩(wěn)定性測(cè)試（包括柜體抗翻倒、柜體抗變形、工作臺(tái)面抗變形、柜體抗向前傾倒）等，這里就不在過多的描述。

現(xiàn)在是28頁\一共有91頁\編輯于星期三結(jié)論

盡管這三種標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施時(shí)間和內(nèi)容不盡相同，但是在大體上擁有很大的相似性。在一些關(guān)鍵測(cè)試方法上，中國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)在吸收了歐美標(biāo)準(zhǔn)中最佳方法的基礎(chǔ)上，又開發(fā)了更精確嚴(yán)密的測(cè)試方法，所以說中國(guó)安全柜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)是目前世界上最嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。正確的選擇生物安全柜，并且按照操作守則正確使用、維護(hù)安全柜是確保實(shí)驗(yàn)室生物安全的基本原則?，F(xiàn)在是29頁\一共有91頁\編輯于星期三第三節(jié)凈化工作臺(tái)和生物安全柜

的差別是兩個(gè)不同的概念不能以凈化工作臺(tái)代替生物安全柜，反之則可。保護(hù)對(duì)象不同現(xiàn)在是30頁\一共有91頁\編輯于星期三凈化工作臺(tái)類型水平層流垂直層流現(xiàn)在是31頁\一共有91頁\編輯于星期三水平層流的“潔凈臺(tái)”原理圖現(xiàn)在是32頁\一共有91頁\編輯于星期三一、水平層流的“潔凈臺(tái)”水平層流的潔凈臺(tái)不是生物安全柜。

他們通過工作表面排放HEPA高效過濾的空氣并直接吹向操作者。這些設(shè)備僅僅提供產(chǎn)品保護(hù)。他們可以用于某些潔凈的工作，諸如無菌設(shè)備或電子設(shè)備的無塵組裝。當(dāng)處理細(xì)胞培養(yǎng)材料或藥物合成時(shí)或當(dāng)操作可能傳染的材料時(shí)，這些潔凈臺(tái)是絕對(duì)不能使用的。操作人員在使用潔凈臺(tái)操作這些材料時(shí)（包括蛋白抗原）可能暴露于這些材料中，它可能導(dǎo)致過敏。水平層流的潔凈臺(tái)決不能代替生物安全柜用在生物醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室。

現(xiàn)在是33頁\一共有91頁\編輯于星期三垂直層流“潔凈臺(tái)”原理圖現(xiàn)在是34頁\一共有91頁\編輯于星期三二、垂直層流“潔凈臺(tái)”

垂直層流的潔凈臺(tái)同樣不是生物安全柜。微生物實(shí)驗(yàn)室中使用，例如細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的無菌操作需要一個(gè)潔凈的區(qū)域。由于這些設(shè)備一般有一個(gè)觀察窗，空氣通常從觀察窗下排放到房間。它和水平層流的潔凈臺(tái)一樣會(huì)導(dǎo)致同樣的潛在危險(xiǎn)。

現(xiàn)在是35頁\一共有91頁\編輯于星期三三、生物安全柜（BSCs）提供人員、環(huán)境和產(chǎn)品的保護(hù)

現(xiàn)在是36頁\一共有91頁\編輯于星期三HEPA高效空氣過濾器

關(guān)鍵HEPA過濾器清除粒子等于和大于0.3um粒子（這個(gè)粒徑基本上包括了所有的細(xì)菌、孢子和病毒）的效率為99.999%。

典型的HEPA過濾器的介質(zhì)是單層的硼硅酸鹽纖維。摺皺的濾材又用鋁蓋板分開。濾材被粘合到木頭、金屬或塑料框架上。粗心的處理濾器（例如，不合適的儲(chǔ)藏或摔落）能損壞粘接的濾材，或者造成漏洞或破裂導(dǎo)致破漏這就是安全柜在初次安裝和重新移位后必須進(jìn)行濾器整體檢驗(yàn)的原因?，F(xiàn)在是37頁\一共有91頁\編輯于星期三一）生物安全柜的分型：

ClassI級(jí)生物安全柜

ClassII級(jí)生物安全柜，其又具體分為：

1.ClassIITypeA1型生物安全柜

2.ClassIITypeA2型生物安全柜

3.ClassIITypeB1型生物安全柜

4.ClassIITypeB2型生物安全柜

ClassIII級(jí)生物安全柜現(xiàn)在是38頁\一共有91頁\編輯于星期三生物安全柜的選擇及適用性

表1通過危害評(píng)估選擇生物安全柜

估計(jì)的生物危險(xiǎn)級(jí)別提供的保護(hù)應(yīng)選用的生物安全柜級(jí)別人員產(chǎn)品環(huán)境BSL1-3是不是IBSL1-3是是是II（A1，A2，

B1，B2）

BSL4是是是IIIB1，B2現(xiàn)在是39頁\一共有91頁\編輯于星期三I級(jí)生物安全柜

樣品沒有得到保護(hù)操作者得到保護(hù)操作環(huán)境得到保護(hù)經(jīng)過樣品區(qū)的空氣，經(jīng)過高效過濾器的過濾之后，100%地排放到實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中用途：在許多情況下，I級(jí)生物安全柜被用作特殊的密封設(shè)備（例如，離心、收獲設(shè)備或小的發(fā)酵設(shè)備）或可能產(chǎn)生氣溶膠的操作過程（例如倒籠子的垃圾，通氣培養(yǎng)或組織攪拌）。相當(dāng)于安全通風(fēng)柜現(xiàn)在是40頁\一共有91頁\編輯于星期三A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器D負(fù)壓排氣系統(tǒng)(腔體產(chǎn)生亂流)

圖1Ⅰ級(jí)安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖現(xiàn)在是41頁\一共有91頁\編輯于星期三

I級(jí)生物安全柜改進(jìn)型

反向的水平層流氣體流速:≥0.4m/s

YY0569-2005:0.7~1.0m/s現(xiàn)在是42頁\一共有91頁\編輯于星期三有前窗操作口的安全柜，操作者可以通過前窗操作口在安全柜內(nèi)進(jìn)行操作。操作口流入氣流保護(hù)人員高效過濾器過濾的下降氣流保護(hù)產(chǎn)品被污染氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出保護(hù)環(huán)境Ⅱ級(jí)安全柜現(xiàn)在是43頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)安全柜的分類Ⅱ級(jí)安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和氣流模式的不同分為A1、A2、B1、B2四種類型現(xiàn)在是44頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)A1型安全柜前窗操作口流入氣流的最低速率為≥0.40m/s；下降氣流為安全柜的部分流入氣流和部分下降氣流的混合氣體，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)；70%氣體循環(huán)使用;30%排到室內(nèi)或室外;

現(xiàn)在是45頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)A1型安全柜污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道(軟連接)排到大氣中；安全柜內(nèi)的污染部位可以處于正壓狀態(tài)，且這些正壓區(qū)域可以沒有負(fù)壓區(qū)域包圍。A1型安全柜不能用于揮發(fā)性有毒化學(xué)品和揮發(fā)性放射性核素的實(shí)驗(yàn)?，F(xiàn)在是46頁\一共有91頁\編輯于星期三A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器

D下降氣流過濾器E壓力排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)

圖2Ⅱ級(jí)A1型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖（側(cè)視圖）現(xiàn)在是47頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)A2型安全柜操作口流入氣流的最低速率為≥0.50m/s。下降氣流為部分流入氣流和部分下降氣流的混合，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)。污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道(軟連接)排到大氣中。氣流70%循環(huán)使用，30%外排現(xiàn)在是48頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)A2型安全柜安全柜內(nèi)所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)環(huán)繞。安全柜用于進(jìn)行以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須連接功能合適的排氣罩?，F(xiàn)在是49頁\一共有91頁\編輯于星期三A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器

D下降氣流過濾器E壓力排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)

圖3Ⅱ級(jí)A2型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖現(xiàn)在是50頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)B1型安全柜操作口流入氣流的最低平均速率為≥0.5氣流循環(huán)提供，經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū)。大部分被污染的下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用的排氣管道(硬連接)排入大氣中；70%氣流經(jīng)過濾后外排（要求排到室外）需要70%外界空氣補(bǔ)充30%氣流經(jīng)過濾后循環(huán)使用現(xiàn)在是51頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)B1型安全柜安全柜內(nèi)所有被污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。如果揮發(fā)性有毒化學(xué)品或放射性核素隨空氣循環(huán)不影響實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)在安全柜的直接排氣區(qū)域進(jìn)行，B1型安全柜可以用于以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)?，F(xiàn)在是52頁\一共有91頁\編輯于星期三

B觀察窗C排氣過濾器D下降氣流過濾器

E負(fù)壓排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)G下降氣流過濾器

圖4Ⅱ級(jí)B1型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖現(xiàn)在是53頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)B2型安全柜（全排式）前窗操作口流入氣流的最低平均速率為≥0.50m/s；下降氣流來自經(jīng)過高效過濾器過濾的實(shí)驗(yàn)室或室外空氣(即安全柜排出的氣體不再循環(huán)使用)；流入氣流和下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用排氣管道(硬連接)排到大氣中，不允許回到安全柜和實(shí)驗(yàn)室中；100%氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境100%外界空氣補(bǔ)充無循環(huán)使用的氣流現(xiàn)在是54頁\一共有91頁\編輯于星期三Ⅱ級(jí)B2型安全柜所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被直接排氣（不在工作區(qū)循環(huán)）的負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。B2型安全柜可以用于以揮發(fā)性有毒化學(xué)品和放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)。適用于生物安全危害程度1、2、3級(jí)的樣品現(xiàn)在是55頁\一共有91頁\編輯于星期三A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器

D下降氣流過濾器E負(fù)壓排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)G散流氣

圖5Ⅱ級(jí)B2型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖現(xiàn)在是56頁\一共有91頁\編輯于星期三ClassII級(jí)生物安全柜–

A/B3型樣品得到保護(hù)操作者得到保護(hù)操作環(huán)境得到保護(hù)氣流經(jīng)過過濾，從操作區(qū)頂部，由上往下，垂直地流向操作臺(tái)面單向氣流減少工作區(qū)內(nèi)氣流的擾動(dòng)并且使交叉污染的可能性降到最小。30%氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境30%外界空氣補(bǔ)充70%氣流經(jīng)過濾后循環(huán)使用允許有微量揮發(fā)性有毒化學(xué)物質(zhì)及痕量的揮發(fā)性放射核素適用于生物安全1、2、3級(jí)樣品現(xiàn)在是57頁\一共有91頁\編輯于星期三III級(jí)生物安全柜（全排封閉式）樣品得到保護(hù)操作者得到保護(hù)（操作時(shí)戴全密封手套）操作環(huán)境得到保護(hù)氣流經(jīng)過過濾，從操作區(qū)頂部，由上往下，垂直地流向操作臺(tái)面100%氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境100%外界空氣補(bǔ)充無循環(huán)使用的氣流風(fēng)速：≥0.7m/s現(xiàn)在是58頁\一共有91頁\編輯于星期三III級(jí)生物安全柜

III級(jí)生物安全柜是為操作4級(jí)生物安全水平的微生物病原體而設(shè)計(jì)的，對(duì)環(huán)境和操作者提供最大的保護(hù)。它是一個(gè)沒有開放式觀察窗的氣密性的結(jié)構(gòu)。長(zhǎng)臂耐磨的橡膠手套以一種氣密性的方式安裝到安全柜的袖套孔上，可以在與內(nèi)部隔離的條件下對(duì)柜內(nèi)的材料進(jìn)行操作，防止操作者與這些危險(xiǎn)的材料直接接觸。III級(jí)安全柜通常只是在最高圍護(hù)功能的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安裝，這些實(shí)驗(yàn)室具有控制出入和特殊通風(fēng)要求或其它支持系統(tǒng)（例如高壓蒸汽）?，F(xiàn)在是59頁\一共有91頁\編輯于星期三第四節(jié)生物安全柜的使用

現(xiàn)在是60頁\一共有91頁\編輯于星期三

一、操作程序現(xiàn)在是61頁\一共有91頁\編輯于星期三一）II級(jí)生物安全柜內(nèi)的準(zhǔn)備工作

在開始工作之前，準(zhǔn)備一張?zhí)貏e的活動(dòng)所需的材料檢查清單，在生物安全柜內(nèi)的放置必要的材料。因?yàn)榘踩竦臍饽环雷o(hù)屏障是很脆弱的，做好充分的準(zhǔn)備是為了在正式工作時(shí)減少手臂穿越氣幕的運(yùn)動(dòng)次數(shù)。操作者手臂橫向快速地進(jìn)出安全柜會(huì)干擾氣幕，并損害安全柜所提供的局部防護(hù)屏障。手臂垂直于安全柜的操作口，進(jìn)出時(shí)緩慢的移動(dòng)，將減少這種危險(xiǎn)。房間其他人員的活動(dòng)（例如，迅速運(yùn)動(dòng)，開、關(guān)房間門等）也同樣可以干擾安全柜的空氣保護(hù)屏障?，F(xiàn)在是62頁\一共有91頁\編輯于星期三在開始工作之前，操作者應(yīng)該調(diào)整凳子高度，使自己的臉在前操作口之上。在手臂放進(jìn)安全柜內(nèi)大約一分鐘之后，才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。這樣可以使安全柜穩(wěn)定，并且能讓氣流“清掃”掉手和臂表面的微生物污染物。當(dāng)操作者的胳膊橫放在前面的格柵上的時(shí)候，房間空氣可能直接流動(dòng)到安全柜的工作區(qū)域，而不是通過前面的格柵進(jìn)風(fēng)。輕微地提高胳膊會(huì)緩和這個(gè)問題。前面的格柵絕對(duì)不能讓研究記錄、廢棄的塑料包裝和吸液裝置等阻擋。所有的操作應(yīng)該在距離前面的格柵4英寸里面的工作面上進(jìn)行。

現(xiàn)在是63頁\一共有91頁\編輯于星期三二）工作前的凈化在開始工作之前要讓安全柜的風(fēng)機(jī)至少運(yùn)行3-5分鐘使安全柜內(nèi)的空氣進(jìn)行凈化。安全柜的工作臺(tái)面、內(nèi)壁（不包括送風(fēng)濾器擴(kuò)散板）和觀察窗的內(nèi)表面用消毒劑擦拭。再用無菌蒸餾水進(jìn)行擦拭以清除殘余的消毒劑。

放到安全柜的容器和材料的表面應(yīng)該以70%的乙醇擦拭，以減少將環(huán)境的雜菌帶到安全柜內(nèi)。定期的對(duì)孵箱和冰箱進(jìn)行消毒現(xiàn)在是64頁\一共有91頁\編輯于星期三三）生物安全柜內(nèi)部材料的放置在安全柜的工作臺(tái)面上可以放一塊塑料襯底的能吸水的毛巾。所有的材料應(yīng)該放在離安全柜前面的格柵和后面工作臺(tái)面的邊緣盡可能遠(yuǎn)的位置（圖11）。容易產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備（例如，旋轉(zhuǎn)攪拌器，臺(tái)式離心機(jī)）應(yīng)該靠近安全柜的后部放置。操作時(shí)的動(dòng)作應(yīng)該從工作臺(tái)面的清潔區(qū)到污染區(qū)。現(xiàn)在是65頁\一共有91頁\編輯于星期三現(xiàn)在是66頁\一共有91頁\編輯于星期三安全柜內(nèi)材料的放置潔凈培養(yǎng)物（左邊）可以進(jìn)行接種（中心）；用過的污染吸管放在淺的平底盤里，而其它污染的材料可以放在生物危害包（右邊）中。這安排對(duì)于習(xí)慣于左手操作的人要顛倒過來。

潔凈污染現(xiàn)在是67頁\一共有91頁\編輯于星期三四）II級(jí)生物安全柜內(nèi)的操作

在生物安全柜內(nèi)所進(jìn)行的許多普通過程可能產(chǎn)生噴濺或氣溶膠。應(yīng)該始終采用良好的微生物學(xué)技術(shù)，減少噴濺和氣溶膠產(chǎn)生。II級(jí)生物安全柜的設(shè)計(jì)可以使水平方向噴出的孢子在14英寸的傳播距離以內(nèi)被安全柜向下流動(dòng)的氣流所俘獲。因此，保持干凈的材料離開產(chǎn)生氣溶膠的活動(dòng)至少1英尺以外將會(huì)減少交叉污染的可能性。現(xiàn)在是68頁\一共有91頁\編輯于星期三現(xiàn)在是69頁\一共有91頁\編輯于星期三現(xiàn)在是70頁\一共有91頁\編輯于星期三現(xiàn)在是71頁\一共有91頁\編輯于星期三五）消毒

表面消毒

工作完成時(shí)，所有的容器和設(shè)備應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出安全柜。在每天工作結(jié)束時(shí)，應(yīng)該對(duì)安全柜進(jìn)行最后的表面消毒，包括工作臺(tái)面、安全柜的邊壁、后壁和觀察窗玻璃內(nèi)部的擦拭。如果必要，安全柜也應(yīng)該進(jìn)行放射性檢測(cè)并進(jìn)行必要的消毒。作為安全的微生物學(xué)操作的最后步驟，操作者應(yīng)該摘下手套、脫下工作服并且洗手。

現(xiàn)在是72頁\一共有91頁\編輯于星期三現(xiàn)在是73頁\一共有91頁\編輯于星期三六）發(fā)生少量的噴灑時(shí)的消毒在生物安全柜內(nèi)發(fā)生少量的噴灑時(shí)，應(yīng)該用污染清除吸收紙巾立即進(jìn)行處理，并將使用過的紙巾放到這個(gè)生物危害包里。對(duì)安全柜內(nèi)的所有物品和安全柜內(nèi)部，用浸滿消毒液的毛巾立即進(jìn)行擦洗。

現(xiàn)在是74頁\一共有91頁\編輯于星期三現(xiàn)在是75頁\一共有91頁\編輯于星期三七）發(fā)生大量的溢出當(dāng)發(fā)生大量的溢出時(shí)，液體會(huì)通過前面或后部的格柵流到下面去，這時(shí)要求更廣泛的消毒。安全柜內(nèi)的所有的物品應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出安全柜。應(yīng)該使消毒液維持20-30分鐘的適當(dāng)接觸時(shí)間如果溢出的液體含有放射性材料，可采取類似的程序。并應(yīng)該與輻射安全人員聯(lián)系，尋求特殊的指導(dǎo)。現(xiàn)在是76頁\一共有91頁\編輯于星期三八）氣體消毒在更換HEPA過濾器或進(jìn)行內(nèi)部維修之前，要對(duì)生物安全柜必須進(jìn)行消毒。現(xiàn)在是77頁\一共有91頁\編輯于星期三第五節(jié)生物安全柜檢測(cè)根據(jù)中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS233-2002）微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則的相關(guān)規(guī)定：

有下列情況之一時(shí)，必須對(duì)Ⅱ級(jí)生物安全柜進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè):1、實(shí)驗(yàn)室施工時(shí)，Ⅱ級(jí)生物安全柜搬放到指定位置后。

2、Ⅱ級(jí)生物安全柜被移動(dòng)位置后。

3、對(duì)Ⅱ級(jí)生物安全柜進(jìn)行檢修后。

4、Ⅱ級(jí)生物安全柜更換高效過濾器后。

5、Ⅱ級(jí)生物安全柜一年一度的常規(guī)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)?，F(xiàn)在是78頁\一共有91頁\編輯于星期三一、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的必測(cè)項(xiàng)目和方法

垂直氣流速度斷面測(cè)定

儀器：準(zhǔn)確度為讀數(shù)±3％的熱風(fēng)速計(jì)。

方法：測(cè)點(diǎn)位于柜內(nèi)送風(fēng)口下方0.15m處，為均勻測(cè)點(diǎn)。測(cè)點(diǎn)間距不大于0.15m。測(cè)點(diǎn)布置不少于三行，靠?jī)?nèi)壁的行距柜內(nèi)壁0.15m，每行不少于7個(gè)測(cè)點(diǎn)。

判定：垂直氣流均勻區(qū)所測(cè)平均風(fēng)速與生產(chǎn)廠給定值之差小于±0.025m／s，且單點(diǎn)風(fēng)速與所測(cè)平均風(fēng)速之差不大于20％為合格。

現(xiàn)在是79頁\一共有91頁\編輯于星期三二、工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速測(cè)定

方法：

首先測(cè)定工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量，再除以生物安全柜工作窗口面積計(jì)算出進(jìn)風(fēng)風(fēng)速。

工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量通過測(cè)定生物安全柜的排風(fēng)風(fēng)量而求出。對(duì)于僅從工作窗口進(jìn)風(fēng)的生物安全柜，生物安全柜的排風(fēng)風(fēng)量就等于工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量；對(duì)于除從工作窗口進(jìn)風(fēng)外，還有單獨(dú)的進(jìn)風(fēng)管的生物安全柜，則從排風(fēng)管的總排風(fēng)量扣除進(jìn)風(fēng)管進(jìn)風(fēng)風(fēng)量即為工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量。

采用JGJ7l—1990中所規(guī)定方法測(cè)定生物安全柜的(進(jìn))排風(fēng)管風(fēng)量。

判定：所測(cè)進(jìn)風(fēng)風(fēng)速與生產(chǎn)廠給定值之差小于±0.025m／s為合格。

現(xiàn)在是80頁\一共有91頁\編輯于星期三三、煙霧試驗(yàn)：使用發(fā)煙物作直觀判斷。在工作表面中線上方高于工作窗口上沿0.15m處從側(cè)板一端到另一端發(fā)煙，應(yīng)為垂直流線，不得有死角和回流。

1、距觀察窗內(nèi)表面0.025m，高于工作窗口上沿0.15m處從一端到另一端發(fā)煙，應(yīng)為垂直流線，不得有死角和回流，也無煙霧