基因工程7課件

基因工程

GENEENGINEERINGE-mail:1Chapter7克隆基因的表達(dá)2Chapter7克隆基因的表達(dá)第一節(jié)基因表達(dá)的基本過(guò)程第二節(jié)外源基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)第三節(jié)外源基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)3第一節(jié)基因表達(dá)的基本過(guò)程5一、基因表達(dá)的基本規(guī)律（一）時(shí)間特異性按功能需要，某一特定基因的表達(dá)嚴(yán)格按特定的時(shí)間順序發(fā)生，稱之為基因表達(dá)的時(shí)間特異性（temporalspecificity).多細(xì)胞生物基因表達(dá)的時(shí)間特異性又稱階段特異性（stagespecificity).6一、基因表達(dá)的基本規(guī)律(二）空間特異性在個(gè)體生長(zhǎng)全過(guò)程中，某種基因產(chǎn)物在個(gè)體按不同組織空間順序出現(xiàn)，稱之為基因表達(dá)的空間特異性（spatialspecificity).基因表達(dá)伴隨時(shí)間順序所表現(xiàn)出的這種分布差異，實(shí)際上是由細(xì)胞在器官上的分布決定的，所以空間特異性又稱細(xì)胞或組織特異性（cellortissuespecificity).7二、基因表達(dá)的方式按對(duì)刺激的反應(yīng)性，基因表達(dá)的方式分為：（一）組成性表達(dá)某些基因在一個(gè)個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，通常被稱為管家基因（housekeepinggene)9二、基因表達(dá)的方式無(wú)論表達(dá)水平高低，管家基因較少受環(huán)境因素影響，而是在個(gè)體各個(gè)生長(zhǎng)階段的大多數(shù)或幾乎全部組織中持續(xù)表達(dá)，或變化很小。區(qū)別于其它基因，這類基因表達(dá)被視為組成性基因表達(dá)（constitutivegeneexpression).如微管蛋白基因、糖酵解系基因與核糖體蛋白基因等。10二、基因表達(dá)的方式（二）誘導(dǎo)和阻遏表達(dá)在特定環(huán)境信號(hào)刺激下，相應(yīng)的基因被激活，基因表達(dá)產(chǎn)物增加，這種基因稱為可誘導(dǎo)基因?？烧T導(dǎo)基因在特定環(huán)境中表達(dá)增強(qiáng)的過(guò)程，稱為誘導(dǎo)（induction)如果基因?qū)Νh(huán)境信號(hào)應(yīng)答是被抑制，這種基因是可阻遏基因?？勺瓒艋虮磉_(dá)產(chǎn)物水平降低的過(guò)程稱為阻遏（repression)11四、基因表達(dá)調(diào)控的基本原理（一）基因表達(dá)的多級(jí)調(diào)控DNA水平：基因丟失；基因擴(kuò)增；基因重排；甲基化修飾；染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)狀態(tài)RNA水平：轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控；RNA的轉(zhuǎn)錄后加工；mRNA從核內(nèi)向胞漿轉(zhuǎn)運(yùn)；mRNA穩(wěn)定性蛋白質(zhì)水平：翻譯過(guò)程；翻譯后加工；蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性13四、基因表達(dá)調(diào)控的基本原理（二）基因轉(zhuǎn)錄激活調(diào)節(jié)基本要素1、特異的DNA序列：如啟動(dòng)序列，操縱序列，Pribnow盒，GC序列等。2、調(diào)節(jié)蛋白：如阻遏蛋白，激活蛋白，CAP，轉(zhuǎn)錄因子等。3、DNA-蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用4、RNA聚合酶14五、基因表達(dá)的基本過(guò)程外源基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)15第二節(jié)外源基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)用原核生物作宿主17第二節(jié)外源基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)大腸桿菌作為表達(dá)外源基因受體菌的特征大腸桿菌表達(dá)外源基因的優(yōu)勢(shì)：1、全基因組測(cè)序，共有4405個(gè)開(kāi)放閱讀框架2、基因克隆表達(dá)系統(tǒng)成熟完善3、繁殖迅速、培養(yǎng)簡(jiǎn)單、操作方便、遺傳穩(wěn)定4、被USAFDA批準(zhǔn)為安全的基因工程受體生物18第二節(jié)外源基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)大腸桿菌表達(dá)外源基因的劣勢(shì)：①大腸桿菌中的表達(dá)不存在信號(hào)肽，產(chǎn)品多為胞內(nèi)產(chǎn)物，提取困難。②因分泌能力不足，真核蛋白質(zhì)常形成不溶性的包含體，表達(dá)產(chǎn)物需經(jīng)變性復(fù)性才恢復(fù)活性。③蛋白質(zhì)不能糖基化。產(chǎn)物蛋白質(zhì)N端多余一個(gè)蛋氨酸殘基。④其內(nèi)毒素很難除去。19乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)21一、原核生物基因表達(dá)的特征3、轉(zhuǎn)錄和翻譯偶聯(lián)、連續(xù)進(jìn)行22一、原核生物基因表達(dá)的特征4、不含內(nèi)含子，缺乏轉(zhuǎn)錄后的加工系統(tǒng)。5、調(diào)控主要在轉(zhuǎn)錄水平上。6、mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)：Shine-Dalgarno(SD)sequence在起始密碼子上游約4～7個(gè)核苷酸之前還有一段富含嘌呤的5′…AGGAGG…3′短小序列，它可以與16SrRNA3′端的3′…UCCUCC…5′區(qū)段完全互補(bǔ)。mRNA上的這段序列稱為ShineDalgarno序列（簡(jiǎn)稱SD序列）。23三、原核生物基因表達(dá)的調(diào)控大腸桿菌基因表達(dá)載體的基本結(jié)構(gòu)特征25三、原核生物基因表達(dá)的調(diào)控1、啟動(dòng)子是DNA上的能與RNA聚合酶結(jié)合并能起始mRNA合成的序列。（1）啟動(dòng)子序列大腸桿菌的所有啟動(dòng)子中都有兩段一致順序（consensussequence):-35boxand-10box.26原核啟動(dòng)子共有序列的功能29三、原核生物基因表達(dá)的調(diào)控（2）翻譯的起始位點(diǎn)①核糖體結(jié)合位點(diǎn)(ribosomebindingsite,RBS)1)SDsequence:mRNA上與核糖體16sRNA結(jié)合的序列。30三、原核生物基因表達(dá)的調(diào)控2）起始密碼位于SD序列下游AUG(91%)GUG(8%)UUG(1%)31三、原核生物基因表達(dá)的調(diào)控3）RNA多聚酶大腸桿菌只有一種類型的RNA多聚酶轉(zhuǎn)錄tRNA,rRNAandmRNA.結(jié)構(gòu):全酶是一個(gè)5聚體，含有兩個(gè)α小亞基和兩個(gè)大亞基（β和β’），一個(gè)δ亞基。

32三、原核生物基因表達(dá)的調(diào)控4）轉(zhuǎn)錄終止子在表達(dá)載體克隆位點(diǎn)的下游一般設(shè)計(jì)一段轉(zhuǎn)錄終止子E.coli中促使轉(zhuǎn)錄終止的DNA位置有一段反向回文順序，其后緊接一串A，稱為內(nèi)終止子，形成終止信號(hào)。33終止形成的原因①莖環(huán)結(jié)構(gòu)反向回文順序被轉(zhuǎn)錄后，立即形成一個(gè)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，使轉(zhuǎn)錄物與模板之間配對(duì)的堿基數(shù)降低，整個(gè)減弱了RNA與DNA的互作。②多聚A/U由于莖環(huán)3’端緊接一串A/U的配對(duì)，穩(wěn)定性比較差，有利于轉(zhuǎn)錄物脫落而不利于轉(zhuǎn)錄延續(xù)。34終止原因示意圖35三、原核生物基因表達(dá)的調(diào)控5)翻譯終止密碼大腸桿菌偏愛(ài)UAA.一般安置上全部的三個(gè)終止密碼防止核糖體跳躍（skipping)。6)翻譯增強(qiáng)子（translationenhancer)能夠顯著增強(qiáng)外源基因在大腸桿菌細(xì)胞中的表達(dá)效率的特殊序列。T7噬菌體基因10前導(dǎo)序列（簡(jiǎn)稱g10-L序列）；大腸桿菌atpE基因mRNA5’-UTR中富含U的區(qū)段。36三、原核生物基因表達(dá)的調(diào)控7)基因工程常用的原核啟動(dòng)子最佳啟動(dòng)子必須具備的條件①必須是一種強(qiáng)啟動(dòng)子：能使外源基因的蛋白產(chǎn)量達(dá)到細(xì)胞總蛋白的10%-30%以上。②應(yīng)呈現(xiàn)低水平的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄：便于表達(dá)毒性蛋白等。③應(yīng)是可誘導(dǎo)型的：用溫度或化學(xué)試劑誘導(dǎo)。37四、外源蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)部位1、細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)（1）包涵體（Inclusionbody)是存在于細(xì)胞質(zhì)中的一種不溶性蛋白質(zhì)聚集折疊而成的晶體結(jié)構(gòu)物。形成原理未知！優(yōu)點(diǎn)：使重組蛋白易于分離、免受蛋白酶降解、不損害寄主細(xì)胞缺點(diǎn)：回收的蛋白生物活性差如：humanGrowthHormone,hGH38四、外源蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)部位2、周質(zhì)中表達(dá)（1）周質(zhì)（periplasm)格蘭氏陰性大腸桿菌位于內(nèi)膜和外膜之間的細(xì)胞結(jié)構(gòu)部分。蛋白質(zhì)從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到周質(zhì)的復(fù)雜機(jī)理目前不完全清楚。優(yōu)點(diǎn)：容易被濃縮和純化、有利于正確折疊、被降解的少。39四、外源蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)部位3、胞外表達(dá)使在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)的外源蛋白分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中。用溶血素（hemolysin）基因構(gòu)建分泌性融合蛋白；或與細(xì)菌素釋放蛋白（bacteriocinreleaseprotein)共表達(dá)。由于需要穿過(guò)兩層膜，大腸桿菌只能分泌極少的蛋白質(zhì)到培養(yǎng)基中，效果都不太理想。40大腸桿菌細(xì)胞不同部位表達(dá)外源蛋白的優(yōu)缺點(diǎn)41五、幾種類型的原核表達(dá)載體1、非整合型表達(dá)載體載體表達(dá)出的外源基因蛋白質(zhì)不與細(xì)菌的任何蛋白質(zhì)融合在一起。優(yōu)點(diǎn)：產(chǎn)物結(jié)構(gòu)接近于真核細(xì)胞體內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。缺點(diǎn)：容易被宿主菌的蛋白酶所破壞。42舉例：Pkk223-3載體哈佛大學(xué)的GILBERT實(shí)驗(yàn)室建立的。表達(dá)能力強(qiáng)。組成結(jié)構(gòu)如下：①?gòu)?qiáng)啟動(dòng)子：tac(trp-lac):trp的-35區(qū)-lacUV5的-10區(qū)②操縱基因：乳糖操縱子系統(tǒng)，lac操縱基因。43舉例：Pkk223-3載體③調(diào)節(jié)基因：宿主菌染色體上的乳糖操縱子系統(tǒng)，如JM105菌，LacI.④終止子：rrnB的強(qiáng)終止子。⑤SD序列和插入位點(diǎn)區(qū)：SD-插入位點(diǎn)區(qū)44舉例：Pkk223-3載體⑥載體的其余部分：來(lái)自pBR322質(zhì)粒⑦表達(dá)誘導(dǎo)物：IPTG45舉例：Pkk223-3載體46五、幾種類型的原核表達(dá)載體2、分泌型表達(dá)載體載體表達(dá)出的外源蛋白質(zhì)與細(xì)菌的分泌信號(hào)肽連接在一起，可被宿主菌分泌到細(xì)胞周質(zhì)中。如pINIII系列。47482、分泌型表達(dá)載體（1）組成結(jié)構(gòu)①?gòu)?qiáng)啟動(dòng)子：Ipp(脂蛋白基因啟動(dòng)子）和lacUV5啟動(dòng)子②調(diào)節(jié)基因：lacI③SD序列和起始密碼ATG④分泌信號(hào)肽：大腸桿菌外膜蛋白基因ompa⑤插入位點(diǎn)區(qū)（MCS）492、分泌型表達(dá)載體50五、幾種類型的原核表達(dá)載體3、融合蛋白表達(dá)載體系統(tǒng)-pGEX系列表達(dá)出的外源基因產(chǎn)物蛋白是與質(zhì)粒載體上的菌體蛋白連接在一起的。（1）優(yōu)點(diǎn)：便于融合蛋白的分離和純化。（2）組成結(jié)構(gòu)：?jiǎn)?dòng)子，操縱基因，調(diào)節(jié)基因，SD序列，ori，融合肽（GST)51五、幾種類型的原核表達(dá)載體(3)產(chǎn)物提純GST融合蛋白用glutathionesepharose親和層析柱分離純化。（4）產(chǎn)物分離用凝血酶或Xa因子可以所外源蛋白從GST上切下來(lái)。52五、幾種類型的原核表達(dá)載體(5)其它融合蛋白系統(tǒng)在外源多肽的N端或C端接上6個(gè)組氨酸（His)。His-tag能與Ni2+柱結(jié)合，但很容易被EDTA洗脫下來(lái)，可以純化蛋白質(zhì)。5354六、影響外源基因表達(dá)效率的因素1、啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)對(duì)表達(dá)效率的影響(1)一致順序：-35box（5TTGACA3)and-10box(5TATAAT3)(2)-35boxand-10box之間的距離：間隔為17bp時(shí)，啟動(dòng)子最強(qiáng)。(3)-35boxand-10box區(qū)的堿基順序：越接近一致順序，啟動(dòng)子越強(qiáng)。5556六、影響外源基因表達(dá)效率的因素2、轉(zhuǎn)譯起始序列對(duì)表達(dá)效率的影響(1)SD序列SD序列與16srRNA分子之間的堿基互補(bǔ)程度，可明顯地影響mRNA的轉(zhuǎn)譯速率。當(dāng)序列為5GGAGG3,可與16srRNA3’端完全互補(bǔ)，轉(zhuǎn)譯效率最高，而當(dāng)該序列發(fā)生單堿基突變時(shí)，轉(zhuǎn)譯效率會(huì)下降30倍。SD序列后面的4個(gè)堿基，如果是A(T)，翻譯效率最高；如果是G(C),效率只有50%或25%。57六、影響外源基因表達(dá)效率的因素(2)起始密碼AUGAUG左側(cè)的三個(gè)堿基也有影響。β-半乳糖苷酶的mRNA中：AUG左側(cè)如果是UAU或CUU時(shí)，最為有效；如果是UUC\UCA或AGG時(shí)下降20倍。AUG右側(cè)的三個(gè)堿基也有影響。58六、影響外源基因表達(dá)效率的因素(3)其它多順?lè)醋拥膍RNA與核糖體的結(jié)合位點(diǎn)有一個(gè)或幾個(gè)終止密碼。噬菌體外殼蛋白或核糖體蛋白mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)有多個(gè)U59六、影響外源基因表達(dá)效率的因素3、啟動(dòng)子與外源基因之間的距離60六、影響外源基因表達(dá)效率的因素4、轉(zhuǎn)錄終止區(qū)對(duì)表達(dá)效率的影響轉(zhuǎn)錄終止區(qū)的存在保證載體不會(huì)轉(zhuǎn)錄非必須基因，不必浪費(fèi)原料和能量、不會(huì)干擾正常的表達(dá)。5、載體拷貝數(shù)及穩(wěn)定性對(duì)表達(dá)效率的影響增加載體的拷貝數(shù)會(huì)增加轉(zhuǎn)錄出的mRNA數(shù)目，增加表達(dá)效率。但過(guò)度的外源基因的表達(dá)會(huì)影響宿主的正常生長(zhǎng)。6、外源蛋白在菌體中的穩(wěn)定性對(duì)表達(dá)效率的影響61七、提高表達(dá)水平常用的方法1、選擇強(qiáng)啟動(dòng)子序列如tac等2、調(diào)整SD序列與AUG堿基的距離一般為5-9bp。距離過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短都影響真核基因的表達(dá)，根據(jù)不同的啟動(dòng)子選擇不同的距離。3、改變起始密碼下面的幾組密碼子能提高翻譯的起始效率。62七、提高表達(dá)水平常用的方法4、增加mRNA的拷貝數(shù)和穩(wěn)定性在外源基因的下游插入“重復(fù)性基因回文序列”能防止mRNA受到3‘-5’外切酶攻擊。63七、提高表達(dá)水平常用的方法5、減輕宿主細(xì)胞的代謝負(fù)荷合理地調(diào)節(jié)代謝負(fù)荷與外源基因高效表達(dá)的關(guān)系。(1)誘導(dǎo)表達(dá)：將宿主生長(zhǎng)代謝與外源基因表達(dá)分開(kāi)，一般采用溫度誘導(dǎo)或藥物誘導(dǎo)。如藥物誘導(dǎo)弄（tac啟動(dòng)子），有無(wú)IPTG.(2)表達(dá)載體誘導(dǎo)復(fù)制：將宿主的生長(zhǎng)與載體的復(fù)制分開(kāi)。當(dāng)需要宿主大量生長(zhǎng)時(shí)，抑制載體的復(fù)制；當(dāng)宿主大量生長(zhǎng)后，再誘導(dǎo)載體質(zhì)粒的復(fù)制，增加拷貝數(shù)。64七、提高表達(dá)水平常用的方法6、提高表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性防止被宿主的酶降解。(1)設(shè)計(jì)成融合蛋白這是避免被降解的最好措施。N末端：由原核基因編碼一段多肽C末端：是完整的真核外源基因。65七、提高表達(dá)水平常用的方法(2)使用突變菌株，保護(hù)外源蛋白不被降解減少宿主菌本身的蛋白酶的表達(dá)。(3)表達(dá)分泌蛋白細(xì)菌蛋白分泌的條件①有信號(hào)肽：位于N端，一般為15-30aa。真核與原核的結(jié)構(gòu)相似，功能相似，可以互換。66七、提高表達(dá)水平常用的方法②蛋白質(zhì)內(nèi)有與分泌相關(guān)的AA序列，為蛋白質(zhì)指明目的地。③細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制信號(hào)肽酶I、信號(hào)肽酶II等近20多種蛋白質(zhì)的參與。真核細(xì)胞中的分泌蛋白能在大腸桿菌中很好地分泌表達(dá)；但非分泌蛋白很難在大腸桿菌中分泌。67八、細(xì)菌表達(dá)載體舉例68九、外源蛋白質(zhì)表達(dá)后的正確修飾1、形成正確的二硫鍵分子內(nèi)二硫鍵、分子間二硫鍵。二硫鍵異構(gòu)酶催化。使蛋白質(zhì)能夠正確折疊。69人胰島素分子70九、外源蛋白質(zhì)表達(dá)后的正確修飾2、前體切割如信號(hào)肽、內(nèi)含肽（intein）等序列的切割71九、外源蛋白質(zhì)表達(dá)后的正確修飾3、蛋白質(zhì)糖基化增加蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和某些特殊性質(zhì)(1)0-糖基化（Ser,Thr)(2)N-糖基化（Asn)72十、原核細(xì)胞表達(dá)的缺陷1、缺乏翻譯后蛋白質(zhì)的加工修飾系統(tǒng)，如糖基化、氨基酸修飾等。2、原核表達(dá)外源蛋白常以包涵體形式存在，必須經(jīng)過(guò)變形、復(fù)性處理才能獲得有生物活性的蛋白，并且表達(dá)量非常低。3、原核細(xì)胞中表達(dá)的真核蛋白不穩(wěn)定，容易被細(xì)菌蛋白酶降解。73十、原核細(xì)胞表達(dá)的缺陷4、原核細(xì)胞沒(méi)有轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)，無(wú)法識(shí)別內(nèi)含子，故原核細(xì)胞無(wú)法表達(dá)沒(méi)有加工過(guò)的真核基因組。5、重組原核細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的毒素難以排除，污染表達(dá)產(chǎn)物，影響產(chǎn)品純度。74第3節(jié)外源基因在真核細(xì)胞中表達(dá)75一、真核生物表達(dá)概述1、真核生物表達(dá)的優(yōu)越性和必要性2、真核生物的基因結(jié)構(gòu)3、真核生物的表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)4、真核生物的表達(dá)調(diào)控模式761、真核生物表達(dá)的優(yōu)越性和必要性1）真核生物具有轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)，可識(shí)別并刪除基因中的內(nèi)含子，剪切加工為成熟mRNA.2）具備完善的翻譯后加工系統(tǒng)，可進(jìn)行糖基化、乙?；刃揎棧沟鞍仔纬烧_的天然構(gòu)型，因而真核生物表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白更接近天然狀態(tài)，有利于其功能、生物活性的研究。3）某些真核細(xì)胞可將基因表達(dá)產(chǎn)物分泌到細(xì)胞培養(yǎng)液中，簡(jiǎn)化了純化工藝，降低了生產(chǎn)成本。另外，由于真核生物表達(dá)調(diào)控方式非常復(fù)雜，有助于我們深入了解基因調(diào)控的機(jī)制。772、真核生物的基因結(jié)構(gòu)1）真核生物中DNA極其非富：大腸桿菌基因組為4x106bp,哺乳動(dòng)物基因組為109bp.如此豐富的基因組中克隆、篩選出某一目的基因就比較困難。782、真核生物的基因結(jié)構(gòu)2）真核生物基因的不連續(xù)性：3）真核生物mRNA5’端有帽子結(jié)構(gòu)，3‘端有polyA尾巴。792、真核生物的基因結(jié)構(gòu)4）真核生物基因組中含有大量的重復(fù)序列高度重復(fù)序列，中度重復(fù)序列，單拷貝序列功能：編碼一些功能十分重要、需要量極大的產(chǎn)物，如組蛋白，tRNA、rRNA等。重復(fù)序列中含有特殊結(jié)構(gòu)，參與基因表達(dá)調(diào)控。如AT含量豐富，易解鏈，有利于與調(diào)控基因復(fù)制的蛋白相結(jié)合。與染色體構(gòu)象、著絲點(diǎn)形成有關(guān)。803、真核生物的基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)1）真核生物基因表達(dá)調(diào)控是多方面、多層次的A:真核生物DNA多與組蛋白形成復(fù)雜的高級(jí)結(jié)構(gòu)，被包裹在核膜內(nèi)，而核外（如線粒體DNA）等，這就增加了基因表達(dá)的層次性和復(fù)雜性。B:813、真核生物的基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)2）一條成熟mRNA只能翻譯出一條單一肽鏈，而不能形成原核生物的多順?lè)醋印?）真核生物中轉(zhuǎn)錄和翻譯在時(shí)間和空間上都是完全分開(kāi)的，其功能相關(guān)基因分開(kāi)，分別進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯，而沒(méi)有操縱子式的結(jié)構(gòu)。824、真核生物的基因表達(dá)調(diào)控模式834、真核生物的基因表達(dá)調(diào)控模式1）轉(zhuǎn)錄前（基因組）的調(diào)控即基因結(jié)構(gòu)上的改變，較穩(wěn)定長(zhǎng)久，包括基因丟失、基因重組、基因擴(kuò)增、甲基化修飾等。2）轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控RNA聚合酶：真核生物共有三種RNA聚合酶，分別合成不同類型的RNA，其中RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄合成mRNA.844、真核生物的基因表達(dá)調(diào)控模式2）轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控A、順式調(diào)控因子（cis-actingfactor)定義：與結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)的特定DNA序列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的精確起始和轉(zhuǎn)錄活性表重要作用。854、真核生物的基因表達(dá)調(diào)控模式2）轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控正調(diào)控元件i)啟動(dòng)子：真核生物啟動(dòng)子是RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)周圍的一組轉(zhuǎn)錄控制組件，至少包括一個(gè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)以及一個(gè)以上的功能組件。864、真核生物的基因表達(dá)調(diào)控模式ii)啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)大?。赫婧?00bp（原核60bp）核心啟動(dòng)子：30區(qū)，TATA盒，7-10bp—控制轉(zhuǎn)錄起始的準(zhǔn)確性及頻率。由TATA盒及轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)即可構(gòu)成最簡(jiǎn)單的啟動(dòng)子。CAAT盒、GC盒(這兩種序列不是必備，可缺1或缺2或順序互換），提高轉(zhuǎn)錄效率。所以，啟動(dòng)子包括至少一個(gè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)及一個(gè)以上的功能組件。874、真核生物的基因表達(dá)調(diào)控模式