食品檢驗檢疫新技術(shù)

提綱概述一免疫學檢測技術(shù)二核酸提取方法與探針技術(shù)三四基因芯片技術(shù)五生物傳感器六第一頁，共56頁。第一節(jié)概述第二頁，共56頁。一.概述老方法費時費力，精確性不高新方法快速、可靠為什么要發(fā)展新方法？現(xiàn)代免疫技術(shù)核酸探針技術(shù)現(xiàn)代免疫技術(shù)生物傳感器基因芯片技術(shù)PCR技術(shù)自動微生物鑒定系統(tǒng)第三頁，共56頁。第二節(jié)免疫學檢測技術(shù)第四頁，共56頁。一.免疫學檢測方法的原理抗原：能刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反應的物質(zhì)。第五頁，共56頁?？乖苑磻悦庖咴阅芘c相應抗體結(jié)合發(fā)生反應的特性刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞的特性不完全抗原（半抗原）第六頁，共56頁?？贵w：在抗原刺激下產(chǎn)生，并能與之特異性結(jié)合的免疫球蛋白。第七頁，共56頁。血清學試驗：因為抗原抗體反應一般都要用血清，所以把抗原抗體在體外發(fā)生的特異性結(jié)合反應稱血清學試驗。第八頁，共56頁。免疫學檢測方法的原理：借助抗原和抗體在體外特異性結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象，對標本中的抗原或抗體進行定性或定量的檢測。定性有免疫復合物形成的現(xiàn)象發(fā)生第九頁，共56頁。定量反應中加入抗原或抗體的濃度與形成免疫復合物的濃度成函數(shù)關系。根據(jù)免疫復合物產(chǎn)生的多少來推算樣品中抗原或抗體的含量。免疫單向擴散第十頁，共56頁。當抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應而且比例合適(一般規(guī)定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現(xiàn)濁度。當抗體濃度固定時，形成的免疫復合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應液的濁度也隨之增加。通過測定反應液的濁度與一系列標準品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。免疫比濁法酶聯(lián)免疫檢測第十一頁，共56頁。ELISA酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）第十二頁，共56頁。ElisaSwan第十三頁，共56頁。HikariElisa第十四頁，共56頁。二.ELISA快速檢測方法（一）基本原理酶標抗體第十五頁，共56頁。酶標抗原第十六頁，共56頁?？乖皆诠滔噍d體上，加待測抗體，再加相應酶標記抗體，生成抗原一待測抗體一酶標記抗體的復合物，再與該酶的底物反應生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計的光吸收計算抗體的量。待測抗體的量與有色產(chǎn)物成正比。同理也可包被抗體，測定抗原含量。酶聯(lián)免疫吸附試驗第十七頁，共56頁。（二）ELISA的種類直接法、間接法、夾心法、競爭法第十八頁，共56頁。（三）用于標記的酶常用的有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酯酶常用的交聯(lián)方法有戊二醛法、過碘酸氧化法第十九頁，共56頁。（四）酶與底物辣根過氧化物酶聯(lián)苯二胺（OPD）3,3′，5,5′-四甲基聯(lián)苯胺顯色第二十頁，共56頁。（五）固相載體ELISA小試管聚苯乙烯材料第二十一頁，共56頁。ELISA小珠聚苯乙烯材料第二十二頁，共56頁。ELISA酶標板聚苯乙烯材料第二十三頁，共56頁。硝酸纖維素膜第二十四頁，共56頁。磁性微粒第二十五頁，共56頁。（六）ELISA的測定方法（視頻）第二十六頁，共56頁。三.免疫層析條檢測方法免疫膠體金層析條第二十七頁，共56頁。第二十八頁，共56頁。脂質(zhì)體層析條脂質(zhì)體中含有染料等其他可見的化合物。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的外膜表面有抗體附著，若被檢食物中存在病原體，后者就結(jié)合在抗體上，使脂質(zhì)體的外膜破裂，從而釋放出染料或其他標記物。第二十九頁，共56頁。四.試劑盒快速檢測方法試劑盒，裝試劑的盒子。將實驗所需的眾多試劑組合到一起，并對每一步實驗操作給予詳細的說明，使用者只要按操作步驟添加試劑即可。第三十頁，共56頁。第三十一頁，共56頁。第三節(jié)核酸提取方法與探針技術(shù)第三十二頁，共56頁。一.核酸的提取方法課本上有個地方有問題第三十三頁，共56頁。二.探針種類及其制備方法（一）探針的標記物分類放射性同位素標記物32P,3H,35S等非放射性標記物熒光染料地高辛、生物素等酶第三十四頁，共56頁。（二）探針的標記方法缺口平移法第三十五頁，共56頁。隨機引物法第三十六頁，共56頁。PCR標記法第三十七頁，共56頁。三.核酸探針雜交技術(shù)（一）異相雜交即固-液相雜交一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結(jié)構(gòu)的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，southern印跡雜交EdwinMellorSouthern第三十八頁，共56頁。第三十九頁，共56頁。三.核酸探針雜交技術(shù)（二）同相雜交即液-液相雜交雙探針常規(guī)技術(shù)5'3'供能發(fā)光第四十頁，共56頁。自由狀態(tài)時，分子信標呈發(fā)卡式結(jié)構(gòu)，從而熒光基團和淬滅基團相距較近。此時使熒光基團發(fā)出的熒光被淬滅基團吸收并以熱的形式散發(fā)，熒光幾乎完全被淬滅。當分子信標與靶分子結(jié)合時，熒光基團和淬滅基團之間的距離加大，從而使分子信標的熒光幾乎100%恢復。所檢測到的熒光強度與溶液中靶標量成正比。分子信標技術(shù)第四十一頁，共56頁。第四十二頁，共56頁。第五節(jié)基因芯片技術(shù)第四十三頁，共56頁。一.基因芯片概述第四十四頁，共56頁。基因芯片的定義：將多個DNA探針固定在很小面積的固相載體上所組成的微點陣陣列，可與來自樣品的互補核酸片段雜交?；蛐酒夹g(shù)實際上是高度集成化的反向斑點技術(shù)。第四十五頁，共56頁。第四十六頁，共56頁。二.基因芯片的制作和分析步驟DNA探針設計DNA探針制作玻片活化芯片點樣樣本DNA制作雜交洗滌玻片掃描數(shù)據(jù)處理第四十七頁，共56頁。多聚賴氨酸處理的目的—防脫第四十八頁，共56頁?；蛐酒到y(tǒng)第四十九頁，共56頁。第五十頁，共56頁。三.基因芯片在轉(zhuǎn)基因食品檢測中的應用選擇目的基因片段DNA探針制作芯片點樣轉(zhuǎn)基因食品DNA提取DNA擴增和標記雜交和洗滌結(jié)果檢測第五十一頁，共56頁。第六節(jié)生物傳感器第五十二頁，共56頁。一.生物傳感器概述生物傳感器的定義將含有固定化生物活性物質(zhì)（如酶、抗體、全細胞、細胞器或其聯(lián)合體）做敏感元件，配上適當?shù)膿Q能器所構(gòu)成的分析系統(tǒng)，稱為生物傳感器，它可以將生化信號轉(zhuǎn)為數(shù)量化的電信號。第五十三頁，共56頁。二.生物傳感器的工作原