微生物實驗室培養(yǎng)人教選修一

微生物實驗室培養(yǎng)人教選修一第1頁/共24頁專題重點專題難點①培養(yǎng)基的基礎知識②培養(yǎng)基對微生物的選擇作用③纖維素酶的種類及作用①無菌技術的操作②微生物的數(shù)量測定③從土壤中分離出分解纖維素的微生物專題2微生物的培養(yǎng)與應用第2頁/共24頁課題1微生物的實驗室培養(yǎng)

培養(yǎng)基1．概念營養(yǎng)物質

人們按照微生物對____________的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質。第3頁/共24頁2．營養(yǎng)構成碳源特殊營養(yǎng)物質

(1)一般都含有水、__________、氮源、無機鹽。

(2)還要滿足微生物生長對pH、________________以及O2的要求。

3．分類

(1)液體培養(yǎng)基：配制成的液體狀態(tài)的基質。

(2)固體培養(yǎng)基：配制成的固體狀態(tài)的基質，在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑，如瓊脂，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。第4頁/共24頁無菌技術1．消毒溫和巴氏

(1)特點：使用較為________的物理或化學方法，僅殺死物體表面或內部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。

(2)常用方法：煮沸消毒法、________消毒法、化學藥劑消毒法。2．滅菌強烈灼燒

(1)特點：使用________的理化因素殺死物體內外所有的微生物。

(2)常用方法：________滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。第5頁/共24頁微生物培養(yǎng)的基本技術1．配制培養(yǎng)基稱量―→混合―→溶化―→調pH―→分裝―→包扎2．滅菌加水―→加培養(yǎng)基―→密封―→排冷氣―→維持壓力―→取出倒平板(或擱置斜面)第6頁/共24頁3．接種稀釋涂布平板(1)接種過程：洗凈雙手→點燃酒精燈→接種→貼標簽。(2)接種工具：包括____________、涂布器。接種環(huán)(3)接種方法：平板劃線法、____________________法。(4)注意事項：整個操作過程要在____________旁完成。4．培養(yǎng)酒精燈火焰接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內培養(yǎng)。第7頁/共24頁菌種保藏1．臨時保藏固體斜面4℃

(1)操作： 采用______________培養(yǎng)基，菌落長成后，放入______冰箱中保藏，以后每3～6個月，轉移一次新的培養(yǎng)基。

(2)缺點： 保存時間不長，菌種易被污染或產生變異。2．長期保存法甘油管藏采用________________法，放入－20℃的冷凍箱中保存。第8頁/共24頁營養(yǎng)物質定義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質合成生物體的細胞物質和一些代謝產物；有些是異養(yǎng)生物的能源物質①無機化合物：CO2、NaHCO3

等。②有機化合物：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物質合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物①無機化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽。②有機化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等微生物的營養(yǎng)要素1．微生物的營養(yǎng)物質及功能第9頁/共24頁營養(yǎng)物質定義作用主要來源生長因子生長必不可少的微量有機物酶和核酸的組成成分牛肉膏、酵母膏、動物組織提取液等無機鹽礦物質參與酶的組成；調節(jié)滲透壓——水——作為溶劑和運輸?shù)慕橘|；參與生化反應——備注：(1)不同種類的微生物，對碳源的需要差別較大。(2)微生物最常利用的碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。(3)對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源和能量來源。(4)微生物之所以需要補充生長因子，往往是由于缺乏合成這些物質所需要的酶或合成能力有限。第10頁/共24頁營養(yǎng)型碳源氮源生長因子舉例自養(yǎng)型微生物CO2、NaHCO3N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等一般不需要硝化細菌異養(yǎng)型微生物糖類、脂肪酸等銨鹽、硝酸鹽、蛋白胨等有些種類需要乳酸菌2.不同微生物對營養(yǎng)物質的需求第11頁/共24頁劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產半固體培養(yǎng)基加凝固劑、如瓊脂觀察微生物的運動、分類鑒定固體培養(yǎng)基微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種化學成分天然培養(yǎng)基含化學成分不明確的天然物質工業(yè)生產合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學成分已知的化學物質配成)分類、鑒定培養(yǎng)基的種類第12頁/共24頁劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途用途選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離特定微生物鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅－美藍培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否含有大腸桿菌續(xù)表：第13頁/共24頁關于微生物培養(yǎng)實驗的注意事項1．配制培養(yǎng)基時，按照每個培養(yǎng)基消耗15～20ml的量來估算總用量。

2．滅菌后，培養(yǎng)基冷卻到55℃后應及時進行倒平板操作。如果不能及時操作，需要將培養(yǎng)基放到55℃左右的電熱箱中保溫，以防止瓊脂凝固。第14頁/共24頁第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結束后灼燒目的避免接種環(huán)上可能存在其他微生物污染培養(yǎng)物殺死上次劃線結束后殘留在接種環(huán)上的菌種，使每次劃線的菌種來自上次劃線的末端殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者3．平板劃線操作時每次灼燒的目的如下表：4.實驗后，所有用過的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液等都需要統(tǒng)一進行高壓蒸汽滅菌后再丟棄，否則將會造成環(huán)境污染。第15頁/共24頁微生物所需的營養(yǎng)要素)【例1】下列關于微生物營養(yǎng)的說法，正確的是(A．同一種物質不可能既作碳源又作氮源B．凡是碳源都能提供能量C．除水以外的無機物僅提供無機鹽D．無機氮源也能提供能量第16頁/共24頁

【名師點撥】：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項，它的表達是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源和能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3

可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而NaCl則只能提供無機鹽。對于D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3

可為硝化細菌提供能量和氮源?！敬鸢浮浚篋第17頁/共24頁【配對練習1】下列有關碳源的敘述不正確的是()A．碳源主要用于構成微生物的細胞物質和一些代謝產物B．某些碳源可以作為微生物的主要能源物質C．蛋白質一定不能做碳源D．不同種類的微生物的碳源可能不同解析：蛋白質也能做碳源。答案：C第18頁/共24頁培養(yǎng)基的種類【例2】下列有關培養(yǎng)基的敘述正確的是()

A．培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質

B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基

C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基

D．微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可以形成肉眼可見的單個細菌第19頁/共24頁

【名師點撥】：培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質。培養(yǎng)基根據(jù)物理形態(tài)分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基；根據(jù)實驗目的不同，可以分為普通培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基，因此按照不同的分類標準，種類也不同。固體培養(yǎng)基是因為加入了凝固劑瓊脂造成的，不是因為水的多少。微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可以形成肉眼可見的單個菌落，單個細菌用肉眼看不到?！敬鸢浮浚篈第20頁/共24頁【配對練習2】關于配制培養(yǎng)基的敘述中，正確的是()

A．制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂

B．加入青霉素可得到放線菌

C．培養(yǎng)自生固氮菌不需氮源

D．發(fā)酵工程一般用半固體培養(yǎng)基

解析：固體培養(yǎng)基需加入凝固劑，瓊脂是常用的，但不是唯一的；青霉素可抑制細菌和放線菌的生長；發(fā)酵工程一般用液體培養(yǎng)基；自生固氮菌能夠將空氣中的氮還原成氨，故培養(yǎng)基配制時不需加氮源。

答案：C第21頁/共24頁微生物培養(yǎng)的要點)【例3】下列操作與滅菌無關的是(A．接種前用火焰灼燒接種環(huán)B．接種前用酒精擦拭雙手C．接種在酒