微生物實(shí)驗(yàn)6的學(xué)習(xí)教案

微生物實(shí)驗(yàn)6的學(xué)習(xí)教案第1頁/共29頁第2頁/共29頁常用藥敏試驗(yàn)紙片判斷標(biāo)準(zhǔn)P21抗菌藥物紙片含藥量抑菌圈直徑(mm)

耐藥中度敏感敏感青霉素G(葡萄球菌)

10單位≤28-≥29鏈霉素10微克≤1112～14≥15慶大霉素10微克≤1213～14≥15四環(huán)素30微克≤1415～18≥19氯霉素30微克≤1213～17≥18磺胺300微克≤1213～16≥17第3頁/共29頁藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析青霉素鏈霉素慶大霉素黃色細(xì)菌白色細(xì)菌紫黑細(xì)菌粉紅細(xì)菌

注：耐藥－，中度敏感±，敏感＋。第4頁/共29頁抗菌素藥敏試驗(yàn)紙片法結(jié)果G+金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌對青霉素敏感，對鏈霉素中度敏感。G-粉紅色和紫黑色細(xì)菌對青霉素耐藥，對鏈霉素敏感。G+球菌和G-桿菌對廣譜抗菌素慶大霉素都敏感。第5頁/共29頁糖發(fā)酵、動(dòng)力試驗(yàn)結(jié)果判斷

反應(yīng)現(xiàn)象結(jié)果描述符號(hào)培養(yǎng)基變色無氣泡分解×糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣＋培養(yǎng)基變色有氣泡分解×糖產(chǎn)酸又產(chǎn)氣⊕培養(yǎng)基不變色不分解×糖－細(xì)菌擴(kuò)散生長,培基混濁細(xì)菌有鞭毛＋沿接種線生長,培基清澈透明細(xì)菌無鞭毛－第6頁/共29頁腸道桿菌科各菌屬生化反應(yīng)鑒別表

葡萄糖乳糖麥芽糖甘露醇蔗糖半固體埃希菌屬⊕⊕⊕⊕√+志賀菌屬+√√+/--/+-沙門菌屬⊕/+-⊕⊕-+霍亂弧菌+-++++變形桿菌屬⊕-√-√+★+產(chǎn)酸或陽性，⊕產(chǎn)酸產(chǎn)氣，-陰性，

+/-多數(shù)陽性，-/+多數(shù)陰性，√不確定。第7頁/共29頁常見腸道感染細(xì)菌主要生化反應(yīng)特征

葡萄糖乳糖半固體（動(dòng)力）大腸埃希菌⊕⊕+痢疾志賀菌+--傷寒沙門菌+-+霍亂弧菌+★-+幽門螺桿菌不分解糖類

+變形桿菌⊕-+★產(chǎn)酸能迅速殺死該菌。第8頁/共29頁細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果分析

甲、乙→紫黑

丙、丁→粉紅↓↓組號(hào)①葡萄糖②乳糖半固體③葡萄糖④乳糖半固體1⊕2345678910結(jié)果⊕+-第9頁/共29頁實(shí)結(jié)果錯(cuò)誤可能性純培養(yǎng)時(shí)，菌落挑錯(cuò)了。無菌操作不嚴(yán)格，污染雜菌。接種時(shí)未協(xié)調(diào)好，接種錯(cuò)誤。第10頁/共29頁玻片凝集試驗(yàn)在適量電解質(zhì)存在的情況下，顆粒性抗原(細(xì)菌)與特異性抗體混合，如果比例合適，則出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，稱為凝集反應(yīng)。用于細(xì)菌的抗原分析、鑒定及分型，也可應(yīng)用已知細(xì)菌檢查未知血清的抗體。診斷血清與待檢測細(xì)菌混合→細(xì)菌凝集→陽性→報(bào)告：檢出××細(xì)菌。第11頁/共29頁玻片凝集試驗(yàn)原理凝集反應(yīng)的機(jī)制是由于抗原與其相應(yīng)抗體間存在著相對應(yīng)的極性基。極性基的相互吸附，使抗原外周的水化膜除去，由親水溶膠變成憎水溶膠。電解質(zhì)具有降低電位的作用，使抗原顆粒間的排斥力消除，從而產(chǎn)生了凝集現(xiàn)象。第12頁/共29頁玻片凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)步驟取潔凈干燥的載片一片，分試驗(yàn)與對照區(qū)。滴加生理鹽水15ul，置于對照區(qū)中心；滴加診斷血清15ul，置于試驗(yàn)區(qū)中心。用接種環(huán)取菌苔，分別研磨乳化于鹽水或血清內(nèi)，混合均勻。將玻片反復(fù)擺動(dòng)、充分混勻，凝集速度更快、結(jié)果更清楚。觀察是否有凝集塊出現(xiàn)，如有則記為陽性，沒有則記為陰性。第13頁/共29頁載玻片1張痢疾血清，生理鹽水各15ul粉紅色菌苔與鹽水混勻粉紅色菌苔與血清混勻第14頁/共29頁安全警告本次實(shí)驗(yàn)操作，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快,＜50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開,＜5um通過呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在酒精燈半徑20厘米范圍內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。第15頁/共29頁綜合性實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)總結(jié)

采用平板劃線分離法，從濃汁標(biāo)本中分離出黃色和白色兩種菌落。顯微鏡下，這兩株細(xì)菌均為G+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌；結(jié)合菌落顏色，這兩株葡萄球菌分別是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通過血漿凝固酶試驗(yàn)鑒別，金黃色葡萄球菌是致病菌。第16頁/共29頁用伊紅美藍(lán)平板，從糞便標(biāo)本分離出紫黑色具有金屬光澤的菌落和粉紅色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大腸埃希菌。粉紅色菌落是不能分解乳糖的致病菌。顯微鏡下，它們都是G-桿菌，散在排列，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌。經(jīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)，半固體動(dòng)力試驗(yàn)，血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果鑒定，它們分別是大腸埃希菌和痢疾志賀菌。金黃色葡萄球菌和痢疾志賀菌，這兩株致病菌分別做了藥敏試驗(yàn)，G+的金黃色葡萄球菌對青霉素敏感，G-的痢疾桿菌對鏈霉素敏感；慶大霉素對G+和G-菌都敏感。第17頁/共29頁膿汁和糞便標(biāo)本細(xì)菌檢測結(jié)果分析標(biāo)本菌落形態(tài)血漿凝固酶葡乳半痢疾血清青鏈慶結(jié)論黃色G+球++++金黃色葡萄球菌膿汁白色G+球-+++白色葡萄球菌紫黑G－桿⊕⊕+-++大腸埃希菌糞便粉紅G－桿+--+-++福氏志賀菌第18頁/共29頁思考題如果細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果不佳，原因何在?報(bào)告紙片法藥敏試驗(yàn)結(jié)果，是否符合你所鑒定的細(xì)菌的藥敏特性?玻片凝集試驗(yàn)觀察完畢，應(yīng)將載玻片立即放入消毒缸內(nèi)，為什么?怎么設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，對傷寒沙門菌進(jìn)行分離和鑒定?

第19頁/共29頁常見病原性球菌的檢查程序P47：直接涂片、革蘭染色、鏡檢膿汁、痰、咽部分泌物觀察菌落性狀、溶血性、色素血瓊脂平板培養(yǎng)涂片染色鏡檢挑取可疑菌落生化反應(yīng)↑純培養(yǎng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)藥敏實(shí)驗(yàn)血液、穿刺液→肉湯增菌培養(yǎng)→培養(yǎng)液涂片染色境檢常見腸道致病菌的檢查程序P48：糞便→SS瓊脂、伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng)→挑取可疑菌落↑↓血清學(xué)鑒定血、骨髓→增菌培養(yǎng)雙糖鐵培養(yǎng)基染色鏡檢生化反應(yīng)

第20頁/共29頁《膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測》

年級(jí)專業(yè)學(xué)號(hào)姓名實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)器材方法與步驟結(jié)果與討論。實(shí)驗(yàn)報(bào)告以小組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)。主要是從2種標(biāo)本獲得4種菌的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。討論是對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，應(yīng)客觀、嚴(yán)謹(jǐn)，圍繞主題，突出重點(diǎn)。結(jié)論應(yīng)該明確，膿汁標(biāo)本檢測到什么病原菌？糞便標(biāo)本檢測到什么病原菌？結(jié)果不正確也要分析原因。第21頁/共29頁如何撰寫科研論文P57不論人們是否完全贊成“要么發(fā)表、要么銷毀”的格言，但毫無疑問，科學(xué)研究的目的就是要把研究成果發(fā)表出來。一般來說，評(píng)價(jià)科學(xué)工作者的工作，主要不是看他們在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)靈巧的操作，也不是看他們在廣闊或狹窄的科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)掌握知識(shí)的多少，也不是看他們的智能或魅力，而主要是根據(jù)他們所發(fā)表的文章來估量。他們可能由此而成名，或仍然默默無聞。因此，寫出能充分展示自己工作、引起同行注意的論文是一個(gè)科研工作者必備的素質(zhì)。第22頁/共29頁一項(xiàng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不論它的結(jié)果多么驚人，只有到它發(fā)表出來時(shí)才算完成。因此對科學(xué)工作者來說，他不僅必須“研究”科學(xué)，而且必須把科研成果“寫”出來。要寫好一篇科學(xué)論文，作者必須準(zhǔn)確地知道他要寫的是什么以及為什么要這么寫。科學(xué)論文是敘述原始研究結(jié)果而寫成并發(fā)表的報(bào)告。具體地說，一篇公認(rèn)的原始科學(xué)論文，必須是首次公布的，它應(yīng)提供足夠的資料，以使同行們能夠：(1)評(píng)價(jià)觀察到的結(jié)果；(2)重復(fù)實(shí)驗(yàn)；(3)評(píng)價(jià)推理過程，而且原始科學(xué)論文還必須能為人們所接受，基本上可供科學(xué)界永久地、不受限制地利用，要有嚴(yán)密的思維特性、邏輯性、清晰性和準(zhǔn)確性。

第23頁/共29頁科研論文內(nèi)容P57標(biāo)題摘要引言材料與方法結(jié)果討論參考文獻(xiàn)第24頁/共29頁醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

綜合性實(shí)驗(yàn)一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測（六）藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析