大鼠血管平滑肌細胞的培養(yǎng)課件

大鼠血管平滑肌細胞的培養(yǎng)本文由探生科技技術人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!相關幫助需要相關抗體試劑的可以訪問Fantibody全球抗體搜索引擎fantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機構與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應用評價數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫之后更為復雜的應用型檢索平臺需要相關的實驗室儀器設備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術服務信息的，可以訪問探生網biomean進行咨詢，期待您的加入細胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法細胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法結合生化和化學手段把已經剪切成較小體積的組織進行進一步分離，制成細胞懸液。主要有：胰蛋白酶法膠原酶法EDTA法細胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法體外培養(yǎng)細胞的分型貼附型:細胞貼附在支持物上生長懸浮型：不貼附于支持物，呈懸浮生長細胞培養(yǎng)實驗室培養(yǎng)用品細胞培養(yǎng)液、培養(yǎng)基準備“無菌”培養(yǎng)試劑的配制Hank’s液(單位g)CaCl20.14KCl0.4KH2PO40.06MgSO4.7H2O0.10NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.12D-glucose1.0Phenolred0.01將CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在750mL的ddH2O中，混勻（用磁力攪拌器攪拌至溶解），定容至1000mL。高壓蒸氣消毒10分鐘，4℃冰箱保存。D-Hank’s液（單位：g）KCl0.40KH2PO40.06NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.08Phenolred0.02青霉素、鏈霉素液配制青霉素80萬U加Hank’s液至80mL，終濃度1萬u/mL鏈霉素100萬U（相當于1g）加Hank’s液至100mL，終濃度10mg/mL分裝后至-20℃冰箱保存。DMEM培養(yǎng)液900mLddH2O于1000mL容器中，將DMEM粉1包倒入容器中，盛粉袋用50mLddH2O分次沖洗，也倒入容器，磁力攪拌溶解。加NaHCO3調PH至7.2加青、鏈霉素至終濃度100u/mL和100ug/mL0.22umX50濾膜過濾（負壓泵抽吸），4℃冰箱保存。小牛、胎牛血清滅活55℃水浴箱30分鐘，置4℃冰箱保存滅活前放于-20℃冰箱保存待用臨用前加入DMEM液中操作步驟大鼠頸椎脫臼致死固定消毒胸腹部大組織鑷、組織剪切開胸腹部皮膚另一組織鑷、組織剪切開胸腹部，并切除部分胸壁以利暴露眼科鑷和眼科彎剪分離胸腹主動脈并放入盛有Hank’s液的細胞培養(yǎng)皿中，轉入無菌室?；蛳扔蒙睇}水漂洗，再放Hank’s液中，轉入無菌室眼科直鑷和彎鑷去除血凝塊和血管外膜層。放入另一盛有Hank’s液的細胞培養(yǎng)皿中，剪去血管外的小分支用吸管把組織塊轉入玻璃培養(yǎng)皿中，均勻貼壁，組織塊的間距為0.5cm蓋好瓶蓋，輕輕翻轉培養(yǎng)瓶，讓瓶底朝上，并向瓶內注入適量培養(yǎng)液，于37oC孵箱內放置4～5小時，使得組織塊干涸，并與瓶底貼附將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉平放，使組織塊完全浸入培養(yǎng)液中，繼續(xù)靜置3～5天，切勿移動。待有細胞從組織塊周圍游離出后換液注意：初次傳代對胰酶敏感，加入消化液30s，即消化充分，以后2分鐘左右細胞消化完成后，用吸管反復抽吸打散細胞中止消化：加入DMEM培養(yǎng)液3滴管，用吸管反復吹打瓶壁細胞離心：1500X5分鐘倒掉液體，加D-Hank’s液洗一次，再加10mLDMEM培養(yǎng)液，用吸管抽吸吹打分散細胞，分裝于2個培養(yǎng)瓶。在倒置纖微鏡下可見圓形細胞。放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)血管平滑肌細胞的凍存和復蘇凍存時間：較早期傳代，以防細胞因為傳代次數(shù)過多而造成細胞衰老或發(fā)生改變，以保持實驗條件的一致性。凍存方法：凍存前24小時更換培養(yǎng)液，凍存時要將密閉好的凍存管依次放于：4oC2小時-20oC2.5小時液氮表面2小時浸入液氮培養(yǎng)細胞的鑒定1、形態(tài)學鑒定：用相差顯微鏡常規(guī)觀察細胞生長形態(tài)以及生長規(guī)律。并依據(jù)常規(guī)制作電鏡標本進行觀察

電鏡觀察結果：細胞形態(tài)不規(guī)則，胞漿內有肌絲，縱向排列，有密區(qū)，具備平滑