動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體申

動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體申第1頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細(xì)胞雜交過(guò)程示意圖動(dòng)物細(xì)胞能否融合？第2頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三A細(xì)胞B細(xì)胞人工誘導(dǎo)1.1動(dòng)物細(xì)胞融合的概念雜交細(xì)胞是指兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)單核細(xì)胞的過(guò)程。（也稱細(xì)胞雜交）一、動(dòng)物細(xì)胞融合第3頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三怎樣融合?過(guò)程如何?第4頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三細(xì)胞膜的流動(dòng)性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞誘導(dǎo)的手段？融合后細(xì)胞的類型？AB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.2動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程原理？第5頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1.2動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程

滅活喪失感染性保留融合活性為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？第6頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1.3動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用突破

方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能為制造

開(kāi)辟了新途徑有性雜交單克隆抗體第7頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理相關(guān)的酶誘導(dǎo)手段用途植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶去除細(xì)胞壁離心、電刺激、振動(dòng)、聚乙二醇克服遠(yuǎn)源雜交不親和性獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性用胰蛋白酶膠原蛋白酶使細(xì)胞分散除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外，還有滅活病毒使遠(yuǎn)緣雜交成為可能,獲得雜種細(xì)胞制備單克隆抗體1.4比較動(dòng)、植物細(xì)胞雜交技術(shù)第8頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1．動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合所用的誘導(dǎo)方法有何不同？

提示：動(dòng)物細(xì)胞融合可用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)。

2．細(xì)胞融合技術(shù)與有性雜交相比有哪些優(yōu)點(diǎn)？提示：有性雜交有著十分嚴(yán)格的時(shí)空關(guān)系和種族界限。動(dòng)物細(xì)胞融合則不同，①它克服了物種之間的遺傳屏障，②能夠按照人們的意愿，把不同物種的不同組織類型的細(xì)胞融合在一起。思考與探究第9頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三強(qiáng)調(diào)：效應(yīng)B淋巴細(xì)胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，下文將其簡(jiǎn)稱為B淋巴細(xì)胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。溫故知新二、單克隆抗體B淋巴細(xì)胞效應(yīng)B淋巴細(xì)胞記憶B淋巴細(xì)胞分化第10頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1、抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原（1）向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射抗原（2）從動(dòng)物的血清中分離抗體（3）該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個(gè)問(wèn)題呢？單克隆抗體！第11頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體1、概念：?jiǎn)蝹€(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體第12頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2.2單克隆抗體的制備如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。(2)解決思路：將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合為

。雜交瘤細(xì)胞第13頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三產(chǎn)生專一抗體的B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)第14頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(3)制備過(guò)程第15頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞①為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）②會(huì)有幾種融合方式？√第16頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（一選）選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活（二選）：選擇能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)液中培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。③雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來(lái)的？有何特點(diǎn)？④是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？因?yàn)橛每乖碳ば∈髸r(shí)會(huì)產(chǎn)生多種效應(yīng)B細(xì)胞，不同效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體是不同的，所以還要篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞第17頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(4)單克隆抗體的特點(diǎn)特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。第18頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2.3單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑——準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)第19頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭（2）治療疾病和運(yùn)載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。第20頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三血清抗體與單克隆抗體的比較名稱產(chǎn)生特點(diǎn)血清抗體由B淋巴細(xì)胞分泌一般從血清中分離，產(chǎn)量低、純度低、特異性差單克隆抗體由雜交瘤細(xì)胞分泌特異性強(qiáng)、靈敏度高，能大量制備第21頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1．為什么要對(duì)小鼠注射抗原？提示：以獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)。

2．根據(jù)單克隆抗體制備過(guò)程思考下列問(wèn)題：

(1)制備單克隆抗體時(shí)，為什么要選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？

(2)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)聚乙二醇處理后，培養(yǎng)液中存在哪幾種細(xì)胞？

(3)選擇雜交瘤細(xì)胞的兩步篩選的目的各是什么？思考與探究提示：(1)B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體，但不能無(wú)限增殖；骨髓瘤細(xì)胞可大量快速增殖，卻不能產(chǎn)生抗體。若將兩種細(xì)胞融合在一起，既能無(wú)限增殖又能大量產(chǎn)生特異性抗體。

(2)未融合的B淋巴細(xì)胞、未融合的骨髓瘤細(xì)胞、B－B融合細(xì)胞、瘤－瘤融合細(xì)胞、B－瘤融合細(xì)胞。

(3)第一步篩選的目的是獲得雜交瘤細(xì)胞；第二步篩選的目的是獲得能產(chǎn)生所需單一抗體的雜交瘤細(xì)胞。第22頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三【考向一】細(xì)胞融合[例1]下列對(duì)植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較，描述正確的是 (

)A．動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，誘導(dǎo)融合的方法也完全相同

B．兩者都可以跨越種屬間的生殖隔離，突破有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能

C．利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)而發(fā)展起來(lái)的雜交瘤技術(shù)，為試管嬰兒的誕生開(kāi)辟了新途徑

D．目前科學(xué)家終于實(shí)現(xiàn)了兩個(gè)植物物種間的體細(xì)胞雜交，得到了同時(shí)具有兩個(gè)物種遺傳物質(zhì)的超級(jí)植物，并使它們的性狀全部得以體現(xiàn)B第23頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三【考向二】單克隆抗體的制備[例2]下圖是制備分泌抗X(H1N1流感病毒)抗體的過(guò)程，根據(jù)圖解回答問(wèn)題：(1)給小鼠注射抗原的目的是_____________。(2)在單克隆抗體制備過(guò)程中之所以選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，是因?yàn)樗鼈內(nèi)诤虾蟮碾s交瘤細(xì)胞具有_______

的特性。獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生特定抗體第24頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(3)由圖中可看出，單克隆抗體制備過(guò)程運(yùn)用了_________

和______

_的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段。(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等，與植物細(xì)胞培養(yǎng)基有所不同的是還含有________

。細(xì)胞融合細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物血清第25頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(5)在動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程中，需要將所選取的組織細(xì)胞分散開(kāi)，以利于細(xì)胞融合，可用________

處理離體組織細(xì)胞使之分散。(6)圖中有兩次篩選過(guò)程，其中步驟④的目的是篩選出_

_

，步驟⑤⑥的目的是篩選出_______________________________。胰蛋白酶雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞第26頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三【變式訓(xùn)練】單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞融合后,要用特定的培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是(

)①B淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．①②③④B．①②③

C．②④D．②③初試牛刀A在選擇培養(yǎng)基上，只有雜交瘤細(xì)胞才能成活增殖第27頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是()A.誘導(dǎo)融合的方法完全相同B.所用的技術(shù)手段完全相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細(xì)胞2.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，在動(dòng)物細(xì)胞融合中有特殊性的是

（

）A.融合的原理 B.融合的優(yōu)點(diǎn)

C.融合的誘導(dǎo)手段 D.融合的過(guò)程在選擇培養(yǎng)基上，只有雜交瘤細(xì)胞才能成活增殖DC第28頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞B.不經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞A第29頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三4.下圖是單克隆抗體制備過(guò)程示意圖，其中1過(guò)程注射的物質(zhì)和A細(xì)胞的名稱為 （）A.抗體、T淋巴細(xì)胞B.抗原、T淋巴細(xì)胞C.抗體、B淋巴細(xì)胞D.抗原、效應(yīng)B淋巴細(xì)胞D第30頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三5.單克隆抗體和血清抗體相比，其優(yōu)越性在于（）A.單克隆抗體能夠制成“生物導(dǎo)彈”B.單克隆抗體能夠在體外制備C.單克隆抗體比血清抗體的特異性強(qiáng)、免疫活性高D.單克隆抗體制備過(guò)程簡(jiǎn)單6.“生物導(dǎo)彈”是指 （）A.單克隆抗體B.帶有特定藥物的單克隆抗體C.雜交細(xì)胞D.B淋巴細(xì)胞CB第31頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三【例6】用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞B．用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C．用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D．篩選雜交細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體×B第32頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三7.右圖為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答：（1）若A、B是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合之前已用

_____________處理，除去了

_______；由A、B到細(xì)胞C的過(guò)程中，常用的物理方法是

____________________。融合完成的標(biāo)志是________。（2）若A、B是植物細(xì)胞，則形成的D細(xì)胞還要應(yīng)用

_______________________技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。纖維素酶和果膠酶細(xì)胞壁離心、振動(dòng)、電刺激產(chǎn)生新的細(xì)胞壁組織培養(yǎng)第33頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（3）若A、B是動(dòng)物細(xì)胞，一般取自

_____

，然后用

使其分散開(kāi)來(lái)；由A、B到C的過(guò)程中，常用的不同于植物細(xì)胞融合的手段是

_________

，所形成的D稱為

__________

，A、B融合為C的過(guò)程說(shuō)明了細(xì)胞膜具有

。（4）若該過(guò)程是制備單克隆抗體，A為小鼠效應(yīng)B細(xì)胞，那么，在獲得此細(xì)胞之前，小鼠已經(jīng)被注射了

。注射后小鼠身體發(fā)生了相應(yīng)的免疫反應(yīng)，生成了______

，圖中B為_(kāi)___________。幼齡動(dòng)物的組織或器官或胚胎胰蛋白酶滅活的病毒誘導(dǎo)雜（交）種細(xì)胞流動(dòng)性抗原效應(yīng)B細(xì)胞、記憶細(xì)胞、抗體骨髓瘤細(xì)胞第34頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（5）若該過(guò)程仍是制備單克隆抗體，在A、B到C的過(guò)程中，所形成的C有

種，用來(lái)培養(yǎng)的D細(xì)胞應(yīng)該是_____________。從中選擇出它的方法是___________

培養(yǎng)，獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是培養(yǎng)液中培養(yǎng)和_________________________。雜交瘤細(xì)胞用特定選擇培養(yǎng)基小鼠腹腔內(nèi)增殖

3

第35頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第36頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)本節(jié)小結(jié)重點(diǎn)第37頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的

細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過(guò)程是一個(gè)_____________過(guò)程，該過(guò)程的進(jìn)行常用_____________或_____________的誘導(dǎo)。(3)假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成

種類型的C細(xì)胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細(xì)胞用于培養(yǎng)，D細(xì)胞的名稱是

，其特點(diǎn)是_________________________________________。效應(yīng)B

抗原

細(xì)胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細(xì)胞第38頁(yè)，共41頁(yè)，2023年，2月20日，星期三(4)在培養(yǎng)時(shí)通過(guò)________分裂方式大量繁殖。D細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項(xiàng)）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是_________________。特異性強(qiáng)、靈敏度高

有絲無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境；充足的營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣