肺癌靶點檢測研究進展演示文稿

肺癌靶點檢測研究進展演示文稿1現在是1頁\一共有25頁\編輯于星期五優(yōu)選肺癌靶點檢測研究進展現在是2頁\一共有25頁\編輯于星期五2007年首次在非小細胞肺癌中發(fā)現EML4-ALK融合基因EML4EML4–ALKvariant1HELP1496981WDBasic14961059110581620TMKinaseALKEML4-ALKNMP-ALKNature2007;448:561–72007年首次在非小細胞肺癌中發(fā)現EML4-ALK融合類型，并證實為肺癌的驅動基因。并且越來越多的研究表明ALK融合在NSCLC當中以較為穩(wěn)定的頻率出現，大約5%?，F在是3頁\一共有25頁\編輯于星期五Permanentproliferation&inhibitionofapotosisEML4-ALKfusionprotein

silencedby

crizotinibProliferation&survival

uponligandbinding

toALKALK融合突變在蛋白水平的變化配體ALK受體細胞外細胞內正常ALK信號細胞外永久擴增和凋亡抑制細胞外克唑替尼抑制EML4-ALK融合蛋白病理性

ALK信號克唑替尼

作用模式

配體與ALK結合后，擴增和存活由于與EML4融合，ALK激酶區(qū)異常激活多效蛋白?

肝素結合細胞因子?現在是4頁\一共有25頁\編輯于星期五隨著ALK靶向抑制劑的發(fā)現，ALK基因越來越多的受到重視2007,Soda&Mano首次發(fā)現EML4-ALK基因2009,AliceT.Shaw首次出現EML4-ALK陽性非小細胞肺癌的稱謂，并將其定義為NSCLC的獨特亞型2010,KwakEL:證實克唑替尼治療有效，但仍沿用EML4-ALK陽性非小細胞肺癌的稱謂SodaM,etal.Nature2007;448(7153):561-566.ShawAT,etal.JClinOncol2009;27:4247-4253.KwakEL,etal.NEnglJMed2010;363:1693-1703.現在是5頁\一共有25頁\編輯于星期五NSCLC臨床病理分型的演變AdenocarcinomaSquamous-cellcarcinomaLargecellcarcinoma組織分型

CurrentStandardofNSCLCCareNon-squamousNSCLC分型現狀SquamousEGFRWTEGFRMuSquamousEGFRMuKRASMuALK+Othernon-squamousWTSquamous2012NCCN2014NCCNEGFRMuALK+KRASMuOthernon-squamousWTSquamousROS1+2010NCCNNCCNGuidelines,NSCLC,Version4.

2014HornL,etal.ClinOncol.2009驅動基因分型

早期現在是6頁\一共有25頁\編輯于星期五NSCLC分子分型與治療決策密切相關HER2EGFRmutantsALKROS/RETb-rafK-rasChemotherapyandPCIAdenoLCC/NOSSCCSCLCK-ras現在是7頁\一共有25頁\編輯于星期五ALK陽性非小細胞肺癌有哪些特點？現在是8頁\一共有25頁\編輯于星期五ALK陽性NSCLC具有鮮明的臨床及病理特征特征EGFR突變EML4/ALK組織學腺癌TTF1+腺癌TTF1+亞型非粘液型粘液型吸煙狀態(tài)不吸煙不吸煙人種東亞所有人種發(fā)病年齡66歲52歲性別女性無差異ShawAT,etal.JClinOncol2009;27:4247-4253.85.4%的ALK陽性NSCLC年齡<65歲(PROFILE1007)現在是9頁\一共有25頁\編輯于星期五與EGFR突變人群相比，ALK融合人群年齡更輕ALK陽性患者的中位年齡比EGFR陽性患者中位年齡小15歲現在是10頁\一共有25頁\編輯于星期五低年齡組ALK陽性率高于EGFR在低于51歲的人群中，ALK陽性率高于EGFR陽性率，可達18.5%，所以對于年輕患者來說，在標本限制的情況下建議先檢測ALK靶點。ScientificReports;LiZhang,2014現在是11頁\一共有25頁\編輯于星期五中國ALK突變的發(fā)生率有多高？AuthorALKincidencePublicationsZhangX,WuYLetal.11.6%(12/103)MolCancer2009Wong,etal.(Hongkong)4.9%(13/265)Cancer2009LiH,ChenHQ,etal.3.0%(7/230smokers,AC)LungCancer2012SunY,ChenH,JiH,etal.5.8%(3/52surgicalAC,non-smokers)JCO2010WuSG,YangPC,etal.(Taiwan)34%(39/116,AC,WTEGFR)JTO2012RikovaK,etal4.7%(6/137)Cell2007WangZ,WangJ,etal.9.7%(11/113,StageIV

)Oncology2012RenS,ZhouC,etal.9.6%(10/104,Female,AC,non-smoker)CellBiochemBiophys.2012;Cancer2012早期患者（手術標本）ALK陽性率4.5%，晚期患者ALK陽性率8%-10%，胸水標本的ALK陽性率可達11%?，F在是12頁\一共有25頁\編輯于星期五不同人種中克唑替尼的療效的差異ID患者數ORR(%)PFS（月）所有亞裔(%)所有非亞裔亞裔中國所有非亞裔亞裔中國PROFILE100114941(28)60.854.876.9-9.7---PROFILE100525993(36)59.8547073.98.1---PROFILE1007347157(45)65-74.7757.77.18.1-PROFILE1014343157(46)747270-10.9-13.6-Fei-YuNiu,Yi-LongWu.OncoTargetsandTherapy2May2015

亞裔或者中國患者，ORR維持在70%以上；克唑替尼一線治療亞裔患者，中位PFS達到13.6個月現在是13頁\一共有25頁\編輯于星期五什么樣的人群需要進行ALK檢測？現在是14頁\一共有25頁\編輯于星期五

更新內容2011版2015版對臨床實踐影響診斷病理報告內容未提及分子病理診斷結果診斷內容包括腫瘤部位、組織學亞型、累及范圍（支氣管、胸膜、脈管、神經、伴隨病變類型、肺內播散灶、淋巴結轉移情況等）、切緣及必要的特殊染色、免疫組化結果或分子檢測結果。包含的信息應滿足臨床分期的需要，并給出pTNM分期。規(guī)范診斷：標準NSCLC診斷需盡可能注明EGFR&ALK基因狀態(tài)（如：右肺上葉腺癌T3N2M1（骨）---IV期ALK融合基因陽性）NSCLC驅動基因檢測未推薦EGFR&ALK檢測對于晚期NSCLC、腺癌或者含腺癌成分的其他類型肺癌，應在診斷的同時常規(guī)進行表皮生長因子（EGFR）和間變性淋巴瘤激酶（ALK）等基因突變檢測，檢測前應有送檢標本的質控（包括亞型確認及樣本量確認）。檢測標本類型包括活檢組織、細胞學標本和細胞蠟快，檢測方法推薦使用獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準的檢測方法或試劑。常規(guī)檢測：晚期NSCLC診斷同時，需常規(guī)檢測EGFR&ALK基因狀態(tài)（特殊情況除外）非小細胞肺癌靶向個體化診療策略更新要點P71P69現在是15頁\一共有25頁\編輯于星期五腺癌/大細胞癌/NOS應該進行EGFR及ALK檢測少吸煙/小活檢肺鱗癌，不能排除混合性成分，需要進行EGFR/ALK檢測為了識別出已經有有效藥物治療的罕見驅動基因靶點，NCC指南強烈推薦對腫瘤病人進行更廣譜的腫瘤驅動基因檢測，或為病人推薦可獲得的臨床研究。廣譜的驅動基因篩查是改善NSCLC預后的關鍵Version4.2016強調分子檢測的重要性現在是16頁\一共有25頁\編輯于星期五如何檢測ALK融合突變？現在是17頁\一共有25頁\編輯于星期五CFDA獲批的三種診斷方法ALKbreak-apartFISHassay(AbbottMolecular,Vysisprobes)ALKimmunohistochemistry(RocheVentana)SplitIsolatedredAmoyDxEML4-ALK融合基因檢測試劑盒RT-PCR（廈門艾德）現在是18頁\一共有25頁\編輯于星期五熒光原位雜交（FISH）5′ALKEML43′陽性（分離–倒位）2p23-215′ALKEML43′倒位（70％）基因融合陰性兩個信號之間的距離小于2個信號直徑~12Mb本圖由LukasBubendorf提供現在是19頁\一共有25頁\編輯于星期五實時逆轉錄法（RT-PCR）原理20逆轉錄酶（AMV）催化合成cDNA第一條鏈加入PCR成分用TakaraExTaqTMHS合成cDNA第二條鏈擴增cDNART-PCR試劑盒的原理EML4ALK上游引物下游引物融合點檢測探針現在是20頁\一共有25頁\編輯于星期五VENTANAIHC試劑設計ALK融合蛋白:無ALK重排的NSCLC不表達ALK融合蛋白部分ALK融合蛋白表達較低VentanaIHC的原理:使用具有高度敏感性和特異性的一抗——D5F3全自動儀操作，充分保證特異性獨有Optiview擴增技術，充分保證敏感性D5F3rabbittmonoclonalantibodyOptiviewDABIHCDetectionOptiviewAmplificationKit現在是21頁\一共有25頁\編輯于星期五01+2+3+NegPosPosPosCST-IHCVentana-IHCPosVentana-IHC原理：在常規(guī)IHC之后加入擴增信號，并且通過充分洗滌一抗避免假陽性----創(chuàng)建一個“二元”的判讀系統J.Ying,etal.AnnalsofOncology2013;現在是22頁\一共有25頁\編輯于星期五Ventana

IHC與FISH檢測結果比較FISH總數敏感性特異性一致率陽性陰性VentanaIHC(1)陽性46753100%98.20%98.40%陰性0377377VentanaIHC(2)陽性3103194%100%99.10%陰性2198200VentanaIHC(2)陽性32032100%100%100%陰性0217217VentanaIHC(3)陽性4024291%96%94%陰性45357VentanaIHC(4)陽性1801890%100%99.60%陰性2503505VentanaIHC(5)陽性63265100%98.4%98.9%陰性0131131(1)JinghuiWang,etal.PLoSONE20149(7):e101551(2)EugenC.Minca,etal.JMolDiagn2013,15:341-346(3)MurryW.Wynes,etal.JThoracOncol.2014;9:631–638(4)