高效液相色譜儀組成及檢測(cè)器種類

高效液相色譜儀組成及檢測(cè)器種類第一頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日1.儲(chǔ)液瓶（輸液管入口端安裝有過(guò)濾器）；2.高壓輸液泵；3.混合器和阻尼器；4.進(jìn)樣器（閥）；5.色譜柱；6.檢測(cè)器；7.廢液瓶；8.數(shù)據(jù)處理和控制系統(tǒng)

第二頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日HPLC儀器結(jié)構(gòu)示意圖貯液器輸液泵梯度裝置進(jìn)樣裝置分離柱控溫裝置檢測(cè)器第三頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日首先高壓泵將貯液器中流動(dòng)相溶劑經(jīng)過(guò)進(jìn)樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出。當(dāng)注入欲分離的樣品時(shí)，流經(jīng)進(jìn)樣器貯液器的流動(dòng)相將樣品同時(shí)帶入色譜柱進(jìn)行分離，然后依先后順序進(jìn)入檢測(cè)器，記錄儀將檢測(cè)器送出的信號(hào)記錄下來(lái)，由此得到液相色譜圖。工作過(guò)程：第四頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日一、高壓輸液系統(tǒng)

高壓輸液系統(tǒng)由溶劑貯存器、高壓泵、梯度洗脫裝置和壓力表等組成。

第五頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日1.溶劑貯存器

溶劑貯存器一般由玻璃、不銹鋼或氟塑料制成，容量為1到2L，用來(lái)貯存足夠數(shù)量、符合要求的流動(dòng)相。第六頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日2.高壓輸液泵

高壓輸液泵是高效液相色譜儀中關(guān)鍵部件之一，其功能是將溶劑貯存器中的流動(dòng)相以高壓形式連續(xù)不斷地送入液路系統(tǒng)，使樣品在色譜柱中完成分離過(guò)程。對(duì)泵的要求：輸出壓力高、流量范圍大、流量恒定、無(wú)脈動(dòng)，流量精度和重復(fù)性為0.5%左右。此外，還應(yīng)耐腐蝕，密封性好。第七頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日高壓輸液泵，按其性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵兩大類。恒流泵是能給出恒定流量的泵，其流量與流動(dòng)相粘度和柱滲透無(wú)關(guān)。第八頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日第九頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日恒壓泵是保持輸出壓力恒定，而流量隨外界阻力變化而變化，如果系統(tǒng)阻力不發(fā)生變化，恒壓泵就能提供恒定的流量。第十頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日3.梯度洗脫裝置

梯度洗脫就是在分離過(guò)程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續(xù)改變它們之間的比例，從而使流動(dòng)相的強(qiáng)度、極性、pH值或離子強(qiáng)度相應(yīng)地變化，達(dá)到提高分離效果，縮短分析時(shí)間的目的。第十一頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日僅用弱溶劑僅用強(qiáng)溶劑梯度洗提第十二頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日梯度洗脫裝置分類一類是外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動(dòng)相在常溫常壓下混合，用高壓泵壓至柱系統(tǒng)，僅需一臺(tái)泵即可。一類是內(nèi)梯度裝置（又稱高壓梯度），將兩種溶劑分別用泵增壓后，按電器部件設(shè)置的程序，注入梯度混合室混合，再輸至柱系統(tǒng)。

第十三頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日二、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)包括進(jìn)樣口、注射器和進(jìn)樣閥等，它的作用是把分析試樣有效地送入色譜柱上進(jìn)行分離。第十四頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置,其結(jié)構(gòu)如圖所示：第十五頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日三、分離系統(tǒng)色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬。第十六頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日柱管材料：耐腐蝕耐壓內(nèi)徑：2.0、3.0、4.1、4.6mm長(zhǎng)度：5、10、15、25cm等固定相：顆粒細(xì)、圓、均一、剛性強(qiáng)第十七頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日第十八頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日一般在分離前備有一個(gè)前置柱，前置柱內(nèi)填充物和分離柱完全一樣，這樣可使淋洗溶劑由于經(jīng)過(guò)前置柱為其中的固定相飽和，使它在流過(guò)分離柱時(shí)不再洗脫其中固定相，保證分離技的性能不受影響。柱子裝填得好壞對(duì)柱效影響很大。對(duì)于細(xì)粒度的填料（＜20μm）一般采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用。柱溫一般為室溫或接近室溫。第十九頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日四、檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)器是液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一。對(duì)檢測(cè)器的要求是：靈敏度高，重復(fù)性好、線性范圍寬、死體積小以及對(duì)溫度和流量的變化不敏感等。

第二十頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日在液相色譜中，有兩種類型的檢測(cè)器：一類是溶質(zhì)性檢測(cè)器，它僅對(duì)被分離組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)。屬于此類檢測(cè)器的有紫外、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器等；一類是總體檢測(cè)器，它對(duì)試樣和洗脫液總的物理和化學(xué)性質(zhì)響應(yīng)。屬于此類檢測(cè)器有示差折光檢測(cè)器等。第二十一頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日㈠紫外光度檢測(cè)器第二十二頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日⒈作用原理依據(jù)被分析試樣組分對(duì)待定波長(zhǎng)紫外光的選擇吸收性，組分濃度與吸光率的關(guān)系遵守比爾定律。第二十三頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日⒉工作過(guò)程透鏡將光源射來(lái)的光束變成平行光，經(jīng)過(guò)遮光板變成一對(duì)細(xì)小的平行光束，分別通過(guò)測(cè)量池與參比池，然后用紫外濾片濾掉非單色光，通過(guò)雙紫外光敏電阻，根據(jù)輸出信號(hào)差進(jìn)行檢測(cè)。第二十四頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日⒊特點(diǎn)⑴靈敏度高，檢測(cè)濃度可達(dá)到10-9g/ml；⑵結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，對(duì)溫度和流速不敏感；⑶溶劑的選用受限制。第二十五頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日㈡熒光檢測(cè)器物質(zhì)受紫外光激發(fā)后，能輻射出比紫外光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光，可用熒光檢測(cè)器檢測(cè)，而某些不發(fā)射熒光的物質(zhì)也可通過(guò)化學(xué)衍生轉(zhuǎn)變成能發(fā)射熒光德物質(zhì)而得到檢測(cè)。第二十六頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日優(yōu)點(diǎn)：是一種選擇性強(qiáng)、靈敏度高，比紫外檢測(cè)器高23個(gè)數(shù)量級(jí)，可達(dá)pg量級(jí)或更低，可用于梯度淋洗。缺點(diǎn)：樣品適用范圍有限，定量分析的線性范圍較窄(104-105)。第二十七頁(yè)，共二十九頁(yè)，2022年，8月28日㈢示差折光檢測(cè)器借連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率德方法來(lái)測(cè)定試樣濃度的檢測(cè)器。分為偏轉(zhuǎn)式和反射式兩種類型。是一種通用型檢測(cè)器，靈敏度可達(dá)10-7gcm-3。缺點(diǎn)是對(duì)溫度變化敏感，不能用于