1序論反射1442508628課件

動物生理學實驗

2012.10主講教師：

魏香電話：

手機：郵箱：weixiang@

協助指導教師：李英姿電話：

手機：郵箱：lyz@助教王卓然博士：72241，，

姜敬非

博士：96270，,

主要參考資料生理學實驗指導。魏香，謝佐平，蘇付榮，編著。清華大學出版社，2005。生理學實驗（第三版）。謝景田、劉燕強、崔庚寅主編。高等教育出版社，2009.動物生理學實驗。張才喬主編?？茖W出版社，2008。生理科學實驗教程。陸源，夏強主編,浙江大學出版社，2004。考核方式及評分方法課程滿分100分：平時成績占70％，期末考試成績占30％。*平時成績包括課上操作（20%）和實驗報告（80%，

包括預習報告和實驗結果報告）*期末考試為實驗設計，包括設計報告、設計內容

完成情況、設計總結報告實驗內容安排日期實驗內容1008-09序論；反射弧分析及反射時測定;坐骨神經-腓腸肌標本的制備1015-16骨骼肌單收縮的分析；骨骼肌收縮的總和與強直收縮；神經干動作電位的觀察；神經沖動傳導速度的測定；坐骨神經不應期的測定1022-23蟾蜍心室的期外收縮與代償間歇；在體蛙類心搏起點與傳導阻滯1029-30離子和藥物對蟾蜍心臟生理功能的影響1105-06影響血液凝固的因素；人體實驗；實驗動物知識1112-13家兔動脈血壓的神經、體液調節(jié)；影響家兔尿生成的因素1119-20家兔呼吸運動的調節(jié)；家兔消化道運動的在體觀察1126-27實驗設計及考試部分設計題目反射弧組成分析實驗蟾蜍坐骨神經－腓腸肌標本制備方法改進探討乙醇對神經的影響心臟不同部位的自動節(jié)律性不同常見飲料對心臟功能的影響蛙心灌流拓展雙蛙心灌流一種簡易的家兔離體心臟灌流方法*肝的解毒功能溫度對家兔血壓和呼吸的影響氧氣含量對家兔呼吸運動的影響家兔提睪反射及提睪肌收縮的調節(jié)實驗課的總體要求遵守實驗室規(guī)則、尊重客觀事實主動學習、分工合作、獨立思考實驗室安全實驗課要求實驗課前做好預習，參照網絡課件，寫出預習報告：

預習報告內容：實驗題目本次實驗要解決的主要問題利用的主要理論知識需掌握的實驗技術

提出一個科學問題提交預習報告時間：上課前一天，可交紙版，也可在網絡學堂提交。實驗課要求實驗課后：＊將實驗用品擦洗干凈、歸位，經老師查驗無誤后方可離開。＊值日生做好實驗室清潔工作。＊整理實驗記錄，認真書寫實驗報告，按時通過網絡學堂上交報告（下一次上課前）。實驗報告的書寫總體要求：

獨立完成，語句通順，文字清楚，表達簡潔明了。

一份完整的實驗報告應包括以下幾部分：姓名班次組別同組者日期實驗序號及題目實驗目的及意義實驗對象及器材實驗方法及步驟實驗結果分析與討論結論

生理學的基本概念生理學（Physiology）是生命科學中的一個分支，它以生物機體的功能為研究對象。生理學的任務就是要研究這些生理功能的發(fā)生機制、發(fā)生條件以及機體所處內、外環(huán)境的變化對這些功能所產生的影響，從而找到各種生理變化的規(guī)律。動物生理學實驗中應掌握的基本實驗方法與技術生理實驗軟件及相關配件的正確使用；常用手術器械的正確使用；常用實驗動物的抓取、麻醉及基本操作技術；雙毀髓蟾蜍的制備；蟾蜍坐骨神經－腓腸肌標本的制備；家兔動、靜脈插管，氣管插管，膀胱插管實驗用動物蟾蜍家兔RM6240多道生理信號采集處理系統主要實驗記錄設備軟件請在網絡學堂下載并安裝反射弧模式圖1感受器；2傳入神經纖維；3神經中樞；4傳出神經纖維；5效應器12345實驗目的及意義反射是指在中樞神經系統參與下的機體對內外環(huán)境刺激的規(guī)律性應答。反射活動的結構基礎稱為反射弧，包括感受器、傳入神經、神經中樞、傳出神經和效應器。在自然條件下，反射活動一般都需要經過完整的反射弧來實現，如果反射弧中任何一個環(huán)節(jié)中斷，反射即不能發(fā)生。實驗目的及意義反射時是指從施加刺激到效應器產生反應所經歷的時間。在一定條件和范圍內，刺激強度越大，反射時越短。以蟾蜍屈肌反射為例，學習并掌握測量反射時的方法，了解刺激強度與反射時的關系。分析反射弧的組成，并探討各部分在反射活動中的作用。蟾蜍，蛙類手術器械一套，蛙板，鐵支架，肌夾，玻棒，小濾紙片，紗布，培養(yǎng)皿，小燒杯，棉花，秒表鹽酸（0.2%,0.5%,1%），2%普魯卡因，清水

實驗對象與器材實驗步驟脊蟾蜍制備：◆右手持探針由頭背側前端沿正中線向脊柱端觸劃，當觸到凹陷處（頭前部，位于兩個耳后腺之間），即枕骨大孔處，將探針垂直插入，左右搖動，切斷腦和脊髓的聯系，然后將探針向前刺入顱腔內，將探針左右搖動、旋轉，搗毀腦組織。

保留脊髓完好?！魹榱藢崿F快速有效地破壞腦組織，可以采用去上頜法，即用粗剪刀沿蟾蜍嘴角邊緣將其整個上頜（包括腦組織）剪除。實驗步驟分離坐骨神經：將脊蟾蜍腹位固定于蛙板上，用手術剪剪開左側大腿背部皮膚，分離肌肉和結締組織，暴露坐骨神經，在神經下穿一條絲線備用。半膜肌股二頭肌反射弧組成分析I：用0.5%HCl分別刺激二后肢的最長趾趾端皮膚，觀察記錄屈肌反射的反射時，之后立刻用清水洗凈刺激部位，并用紗布輕輕拭干水。在右膝關節(jié)處將皮膚作一環(huán)形切口，剝去切口以下的全部皮膚。再用0.5%HCl刺激右后肢的最長趾趾端，觀察記錄結果，洗凈刺激部位。用小濾紙片浸1%HCl，貼在該側后肢環(huán)形切口以上的皮膚上，觀察記錄此側是否出現反射活動，洗凈刺激部位皮膚。實驗步驟實驗步驟反射弧組成分析II：在坐骨神經上放一浸過2%普魯卡因的小棉球，每隔1min用0.5%HCl測試左后肢的最長趾趾端皮膚，觀察記錄該側后肢屈肌反射變化情況。當左后肢屈肌反射剛剛不能出現時，立即將浸過1%HCl的濾紙片貼在背部，觀察左側后肢是否發(fā)生搔扒反射，洗凈刺激部位皮膚。4.用探針搗毀脊髓，觀察各種反射變化情況。關鍵技術蟾蜍的抓取脊蟾蜍制備手術剪的正確使用本實驗需掌握的實驗技術脊蟾蜍制備膝關節(jié)以下皮膚的剝離注意事項毀腦時不可傷及脊髓，以免破壞脊髓反射中樞。分離坐骨神經應盡量向上，并盡量剪斷與其相連的分支。每次酸刺激條件應保持一致，刺激后應立即用清水洗凈刺激部位，并用紗布拭干。剝脫趾端皮膚要完全，若剩留少量皮膚會影響實驗結果。思考與探索試自行設計另外一個實驗，證明反射弧有五個部分組成。請設計實驗證明蟾蜍坐骨神經在反射活動中的具體功能。實驗2坐骨神經－腓腸肌標本的制備實驗目的及意義蛙類坐骨神經－腓腸肌標本是研究神經沖動和肌肉收縮機能等實驗最常用的實驗材料，制備此標本是動物生理實驗的一項基本但又非常重要的操作技術。通過本次實驗，學習破壞蟾蜍腦和脊髓的方法，掌握制備蟾蜍坐骨神經－腓腸肌標本的技術。實驗對象與器材

蟾蜍，兩棲類手術器械，蛙板，蛙釘，培養(yǎng)皿，滴管，鋅銅弓，燒杯，林格溶液，紗布，醫(yī)用縫合線，玻璃分針，污物盤，眼科剪實驗步驟1.破壞蟾蜍中樞（腦和脊髓）制備脊蟾蜍后，將探針退回枕骨大孔，沿與脊椎骨平行的方向向后刺入脊椎，不斷捻動探針，使之刺入整個椎管內，徹底搗毀脊髓。若中樞破壞徹底，動物則表現為肌肉松弛、四肢癱軟。2.剪去軀干上部及內臟在脊柱胸段用金冠剪（粗剪刀）剪斷脊柱。沿脊柱切口向下剪開兩側腹部皮膚、肌肉至恥骨處，將頭、前肢、內臟及腹部軟組織全部剪掉，放于污物盤，只保留下端脊柱和下肢。在腹側脊柱兩旁可看到腰骶神經叢。注意切勿觸及或損傷坐骨神經。實驗步驟3.剝后肢皮膚左手持手術鑷夾住脊髓斷端，右手捏住斷端邊緣，剝掉全部后肢皮膚。將標本放于盛有林格溶液的培養(yǎng)皿內，將手和手術器械洗凈。4.分離兩腿用粗剪刀剪去尾骨桿（骶骨），沿脊椎中線將脊柱剪開，再沿恥骨聯合正中央剪開兩側大腿，使兩腿完全分離（切勿傷及神經），將兩腿浸于林格溶液中。手術鑷實驗步驟√×實驗步驟5.游離坐骨神經1）

取一后肢，腹面向上（背位）固定于蛙板上，沿脊柱側用玻璃分針輕輕勾起坐骨神經，逐一剪去神經分支至股端。用金冠剪剪斷脊柱，只保留一小段椎骨片與坐骨神經相連。2）將標本改為背面向上（腹位）固定，用鑷子提起梨狀肌，剪斷，用玻璃分針將坐骨神經小心勾至背部。再沿坐骨神經溝（半膜肌和股二頭肌的肌間縫）分離坐骨神經。用鑷子夾住與神經相連的脊椎骨，提起神經，用眼科剪將神經分支及結締組織膜順序剪斷，將神經一直游離到腘窩處。玻璃分針實驗步驟6.游離腓腸肌用鑷子夾住脊椎骨，將神經搭在腓腸肌上，用剪刀將膝關節(jié)周圍的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪將膝關節(jié)上方的股骨刮干凈，暴露骨股并在距膝關節(jié)上1-1.5cm處剪斷，分離腓腸肌的跟腱，用線結扎，然后自跟腱的附著點剪斷，提起跟腱，將腓腸肌分離至膝關節(jié)處，將小腿其余部分剪掉。

實驗步驟坐骨神經－腓腸肌標本實驗步驟7.標本檢驗左手用鑷子輕輕提起結扎神經的線或連接神經的椎骨片，右手用經林格溶液沾濕的鋅銅弓短暫輕觸坐骨神經，如腓腸肌發(fā)生迅速的收縮反應，則表明機能完好。將標本置于林格溶液中，穩(wěn)定其興奮性15－20min，即可進行實驗。鋅銅弓關鍵技術（毀中樞）雙毀髓的方法坐骨神經的剝離技術常用手術器械的正確使用蟾蜍毀中樞技術蟾蜍神經分離技術本實驗需掌握的實驗技術注意事項在制備標本時，避免過度牽拉神經，不可用手或金屬器械觸碰神經干。避免動物皮膚分泌物（蟾酥、血液等）污染神經和肌肉，也不要用水沖洗，以免影響組織機能。神經周圍的結締組織要剝離干凈。制備標本時，要隨時用林格溶液潤濕神經和肌肉，防止干燥。實驗要迅速，以免時間過長影響標本活性（興奮性）。