實驗一顯微鏡的使用及微生物形態(tài)的觀察

實驗一顯微鏡的使用及微生物形態(tài)的觀察第1頁/共22頁實驗一

顯微鏡的使用及微生物形態(tài)的觀察第2頁/共22頁一、目的要求

1．熟悉普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及各部分的功能；2．學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法；3．學(xué)習(xí)觀察微生物的個體形態(tài)；4．學(xué)會生物圖的繪制。第3頁/共22頁二、顯微鏡的基本構(gòu)造1.物鏡轉(zhuǎn)換器2.接物鏡3.游標(biāo)卡尺4.載物臺5.聚光器6.彩虹光闌7.光源8.鏡座9.電源開關(guān)10.光源滑動變阻器11.粗調(diào)螺旋12.微調(diào)螺旋13.鏡臂14.鏡筒15.目鏡16.標(biāo)本移動螺旋第4頁/共22頁顯微鏡是由機械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分組成。

1．機械裝置

鏡座（base）和鏡臂（arm）鏡座位于顯微鏡底部,呈馬蹄形，它支持全鏡。鏡臂有固定式和活動式兩種，活動式的鏡臂可改變角度。鏡臂支持鏡筒。鏡筒（bodytube）是由金屬制成的圓筒，上接目鏡，下接轉(zhuǎn)換器。鏡筒有單筒和雙筒兩種，單筒又可分為直立式和后傾式兩種。而雙筒則都是傾斜式的，傾斜式鏡筒傾斜45°。雙筒中的一個目鏡有屈光度調(diào)節(jié)裝置，以備在兩眼視力不同的情況下調(diào)節(jié)使用。

第5頁/共22頁轉(zhuǎn)換器（nosepiece）：為兩個金屬碟所合成的一個轉(zhuǎn)盤，其上裝3-4個物鏡,可使每個物鏡通過鏡筒與目鏡構(gòu)成一個放大系統(tǒng)。載物臺（stage）：又稱鏡臺，為方形或圓形的盤，用以載放被檢物體，中心有一個通光孔。在載物臺上有的裝有兩個金屬壓夾稱標(biāo)本夾，用以固定標(biāo)本；有的裝有標(biāo)本推動器，將標(biāo)本固定后，能向前后左右推動。有的推動器上還有刻度，能確定標(biāo)本的位置，便于找到變換的視野。調(diào)焦裝置：是調(diào)節(jié)物鏡和標(biāo)本間距離的機件，有粗動螺旋（coarseadjustment）即粗調(diào)節(jié)器和微動螺旋（fineadjustment）即細(xì)調(diào)節(jié)器，利用它們使鏡筒或鏡臺上下移動，當(dāng)物體在物鏡和目鏡焦點上時，則得到清晰的圖像。第6頁/共22頁2．光學(xué)系統(tǒng)物鏡（objective）：安裝在鏡筒下端的轉(zhuǎn)換器上，因接近被觀察的物體，故又稱接物鏡。其作用是將物體作第一次放大，是決定成像質(zhì)量和分辨能力的重要部件。物鏡上通常標(biāo)有數(shù)值孔徑、放大倍數(shù)、鏡筒長度、焦距等主要參數(shù)。如：NA0.30；10×；160/0.17；16mm。其中“NA0.30”表示數(shù)值孔徑（numericalaperture，簡寫為NA），“10×”表示放大倍數(shù)，“160/0.17”分別表示鏡筒長度和所需蓋玻片厚度（mm）,“16”表示焦距。目鏡（coularlens）：裝于鏡筒上端，由兩塊透鏡組成。目鏡把物鏡造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般標(biāo)有7×、10×、15×等放大倍數(shù)，可根據(jù)需要選用。一般可按與物鏡放大倍數(shù)的乘積為物鏡數(shù)值孔徑的500-700倍，最大也不能超過1000倍的選擇。目鏡的放大倍數(shù)過大，反而影響觀察效果。第7頁/共22頁聚光器（condenser）：光源射出的光線通過聚光器匯聚成光錐照射標(biāo)本，增強明度和造成適宜的光錐角度，提高物鏡的分辨力。聚光器由聚光鏡和虹彩光圈（irisdiaphragm）組成，聚光鏡由透鏡組成。虹彩光圈由簿金屬片組成，中心形成圓孔，推動把手可隨意調(diào)整透進(jìn)光的強弱。調(diào)節(jié)聚光鏡的高度和虹彩光圈的大小，可得到適當(dāng)?shù)墓庹蘸颓逦膱D像。光源（lightsource）：較新式的顯微鏡其光源通常是安裝在顯微鏡的鏡座內(nèi)，通過按扭開關(guān)來控制；老式的顯微鏡大多是采用附著在鏡臂上的反光鏡，反光鏡是一個兩面鏡子，一面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和高倍鏡觀察時，用平面反光鏡；使用油鏡或光線弱時可用凹面反光鏡。濾光片（filter）：可見光是各種顏色的光組成的，不同顏色的光線波長不同。如只需某一波長的光線時，就要用濾光片。選用適當(dāng)?shù)臑V光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。濾光片有紫、青、藍(lán)、綠、黃、橙、紅等各種顏色的，分別透過不同波長的可見光，可根據(jù)標(biāo)本本身的顏色，在聚光器下加相應(yīng)的濾光片。第8頁/共22頁

三、基本原理

1、

細(xì)菌的個體形態(tài)是指細(xì)菌細(xì)胞的大小，形狀等特征，利用觀察個體形態(tài)對細(xì)菌進(jìn)行初步識別和鑒定。第9頁/共22頁第10頁/共22頁2、放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細(xì)菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長的叫基內(nèi)菌絲，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。第11頁/共22頁第12頁/共22頁

霉菌可產(chǎn)生復(fù)合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。第13頁/共22頁毛霉與根霉第14頁/共22頁青霉分生孢子分生孢子梗小梗?；街Φ?5頁/共22頁曲霉分生孢子次生小梗初生小梗頂囊分生孢子梗足細(xì)胞第16頁/共22頁

四、器材

顯微鏡、細(xì)菌三型涂片、霉菌和放線菌的永久玻片等。第17頁/共22頁五、操作步驟

（1）置顯微鏡于平穩(wěn)的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊沿約3-4㎝，鏡檢者姿勢要端正，一般用左眼觀察，右眼便于繪圖或記錄，兩眼必須同時睜開，以減少疲勞，亦可練習(xí)左右眼均能觀察。（2）調(diào)節(jié)光源、光線較強的天然光源宜用平面鏡；光線較弱的天然光源或人工光源宜用凹面鏡。第18頁/共22頁2．低倍鏡觀察檢查的標(biāo)本需先用低倍鏡觀察，因為低倍鏡視野較大，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)和確定檢查的位置。將三型涂片玻片標(biāo)本置鏡臺上，用標(biāo)本夾夾住，移動推動器，使觀察對象處在物鏡正下方，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，物鏡降至距標(biāo)本約0.5cm處，由目鏡觀察，此時可適當(dāng)?shù)乜s小光圈，否則視野中只見光亮一片，難見到目的物，同時用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，直至物像出現(xiàn)后再用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)到物像清楚時為止，然后移動標(biāo)本，認(rèn)真觀察標(biāo)本各部位，找到合適的目的物，并將其移至視野中心，準(zhǔn)備用高倍鏡觀察。第19頁/共22頁3．高倍鏡觀察

將高倍鏡轉(zhuǎn)至正下方，在轉(zhuǎn)換物鏡時，需用眼睛在側(cè)面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。如果高倍鏡觸及載玻片應(yīng)立即停止旋動，說明原來低倍鏡就沒有調(diào)準(zhǔn)焦距，目的物并沒找到，要用低倍鏡重調(diào)，如果調(diào)對了，換高倍鏡時基本可以看到目的物，若有點模糊，用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)就清晰可見。找到最適宜觀察的部位后，將此部位移至視野中心，準(zhǔn)備用油鏡觀察。第20頁/共22頁4．油鏡觀察

（1）用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒提起約2㎝，將油鏡轉(zhuǎn)至正下