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文檔簡介

第高二生物基因工程知識點(diǎn)梳理

篇一:高中生物基因工程核心知識點(diǎn)

高考圈-讓高考沒有難報(bào)的志愿

高中生物基因工程核心知識點(diǎn)專題1基因工程

基因工程的概念

基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?;蚬こ淌窃贒NA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做DNA重組技術(shù)。

(一)基因工程的基本工具

1.“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)

(1)來源:主要是從原核生物中分離純化出來的。

(2)功能:能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一性。

(3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式:黏性末端和平末端。

2.“分子縫合針”——DNA連接酶

(1)兩種DNA連接酶(E?coliDNA連接酶和T4-DNA連接酶)的比較:

①相同點(diǎn):都縫合磷酸二酯鍵。

②區(qū)別:E?coliDNA連接酶來源于T4噬菌體,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合兩種末端,但連接平末端的之間的效率較低。

(2)與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端,形成磷酸二酯鍵。

3.“分子運(yùn)輸車”——載體

(1)載體具備的條件:①能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。

②具有一至多個限制酶切點(diǎn),供外源DNA片段插入。

③具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。

(2)最常用的載體是質(zhì)粒,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外,并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。

(3)其它載體:噬菌體的衍生物、動植物病毒

(二)基因工程的基本操作程序

第一步:目的基因的獲取

1.目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。

2.原核基因采取直接分離獲得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。

3.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

(1)原理:DNA雙鏈復(fù)制

(2)過程:第一步:加熱至90~95℃DNA解鏈;第二步:冷卻到55~60℃,引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈;第三步:加熱至70~75℃,熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)建

1.目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代,使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

2.組成:目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因

(1)啟動子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終獲得所需的蛋白質(zhì)。

(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的尾端。

(3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素基因。

第三步:將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

1.轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。

2.常用的轉(zhuǎn)化方法:

將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,其次還有基因槍法和花粉管通道法等。

將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞:最常用的方法是顯微注射技術(shù)。此方法的受體細(xì)胞多是受精卵。

將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少,最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌,其轉(zhuǎn)化方法是:先用Ca2+處理細(xì)

胞,使其成為感受態(tài)細(xì)胞,再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程。

3.重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。

第四步:目的基因的檢測和表達(dá)

1.首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。

2.其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交。

3.最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交。

4.有時還需進(jìn)行個體生物學(xué)水平的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。

(三)基因工程的應(yīng)用

1.植物基因工程:抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。

2.動物基因工程:提高動物生長速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物。

3.基因治療:把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用。

(四)蛋白質(zhì)工程的概念

蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過基因修飾或基因合成,對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))

來源:/article/view/id/594.html

篇二:高中生物選修三專題一基因工程知識點(diǎn)

專題一基因工程

基因工程的概念

基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做DNA重組技術(shù)。

(一)基因工程的基本工具

1.“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)

(1)來源:主要是從原核生物中分離純化出來的。

(2)功能:能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位

的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一性。

(3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式:黏性末端和平末端。

黏性末端:當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線兩側(cè)切開時,被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口,帶有幾個伸出的核苷酸,他們之間正好互補(bǔ)配對,這樣的切口叫黏性末端。

平末端:當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線處切開時,切開的DNA兩條單鏈的切口,是平整的,這樣的切口叫平末端。

2.“分子縫合針”——DNA連接酶

(1)兩種DNA連接酶(E·coliDNA連接酶和T4-DNA連接酶)的比較:

①相同點(diǎn):都縫合磷酸二酯鍵。

②區(qū)別:E·coliDNA連接酶來源于大腸桿菌,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的

磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合兩種末端,但連接平末端的之間的效率較低。

(2)與DNA聚合酶作用的異同:

DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是

(1)載體具備的條件:①能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。

②具有一至多個限制酶切點(diǎn),供外源DNA片段插入。

③具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。

④對受體細(xì)胞無害。

(2)最常用的載體是質(zhì)粒,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外,并具有

自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。

(3)其它載體:λ噬菌體的衍生物、動植物病毒

(二)基因工程的基本操作程序

第一步:目的基因的獲取

1.目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。

(1)獲取方法:從基因文庫中獲取目的基因

(2)人工合成法:化學(xué)方法合成DNA片段(反轉(zhuǎn)錄法、直接合成法)

(3)PCR反應(yīng)擴(kuò)增DNA

2.基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫(如cDNA文庫)

3.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

(1)PCR的含義:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。

(2)目的:獲取大量的目的基因

(3)原理:DNA雙鏈復(fù)制

(4)過程:第一步:加熱至90~95℃DNA解鏈為單鏈;

第二步:冷卻到55~60℃,引物與兩條單鏈DNA結(jié)合;

第三步:加熱至70~75℃,熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成。

n(5)特點(diǎn):指數(shù)(2)形式擴(kuò)增

第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)建(核心)

1.目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代,使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

2.組成:目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因

(1)啟動子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終獲得所需的蛋白質(zhì)。

(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的尾端。

(3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素基因。

3.重組質(zhì)粒形成過程:

(1)用一定的限制酶切割質(zhì)粒,使其出現(xiàn)一個切口,露出黏性末端。

(2)用同一種限制酶切斷目的基因,使其產(chǎn)生相同的黏性末端。

(3)將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處,再加入適量DNA連接酶,形成了一個重組DNA分子(重組質(zhì)粒)

第三步:將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞—轉(zhuǎn)化

1.轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。

2.常用的轉(zhuǎn)化方法:

將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,其次還有基因槍法和花粉

管通道法等。

將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞:最常用的方法是顯微注射技術(shù)。方法的受體細(xì)胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少,最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌,其轉(zhuǎn)化方法是:先用Ca2+處理細(xì)胞,使其成為感受態(tài)細(xì)胞,再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程。

3.重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步:目的基因的檢測和表達(dá)

1.首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的

基因,方法是采用DNA分子雜交(DNA-DNA)技術(shù)。

2.其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,方法是采用分

子雜交(DNA-RNA)技術(shù)。

3.最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是采用抗原—

抗體雜交技術(shù)。

4.有時還需進(jìn)行個體生物學(xué)水平的鑒定。如生物抗蟲或抗病

的鑒定等。

(三)基因工程的應(yīng)用

1.植物基因工程:抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。

2.動物基因工程:提高動物生長速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物。

3.基因治療:把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用。

4.基因診斷:又稱為DNA診斷,是采用基因檢測的方法來判斷患者是否出現(xiàn)了基因異?;驍y帶病原體。

(四)蛋白質(zhì)工程的概念

蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過基因修飾或基因合成,對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))

轉(zhuǎn)錄翻譯

蛋白質(zhì)工程的基本途徑:從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā);

設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu);推測應(yīng)有的氨基酸序列;找

到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)

★蛋白質(zhì)工程與基因工程區(qū)別

一基因的結(jié)構(gòu):

基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段(注:RNA病毒為RNA),分為編碼區(qū)和非編碼區(qū)。

編碼區(qū):能轉(zhuǎn)錄出mRNA,原核生物中也就是能編碼蛋白質(zhì)的區(qū)段

非編碼區(qū):不能轉(zhuǎn)錄出mRNA,也不能編碼蛋白質(zhì)的區(qū)段

(1)原核細(xì)胞基因的結(jié)構(gòu)

非編碼區(qū)中存在調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核苷酸序列:

①編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn),即啟動子,可控制RNA聚合酶的結(jié)合。RNA聚合酶是一種蛋白質(zhì),能識別并結(jié)合調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn),能催化DNA轉(zhuǎn)錄為RNA②編碼區(qū)下游有終止子,可控制RNA聚合酶的停止、脫落。

(2)真核細(xì)胞基因的結(jié)構(gòu)

(調(diào)控序列)

篇三:人教版高中生物選修3專題一基因工程詳細(xì)知識點(diǎn)

生物選修三

易考知識點(diǎn)背誦

專題1基因工程

基因工程的概念

基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?;蚬こ淌窃贒NA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做DNA重組技術(shù)。

(一)基因工程的基本工具

1.“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)

(1)來源:

主要是從原核生物(微生物)中分離純化出來的。

(2)功能:

能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一性。

(3)結(jié)果:

經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式:黏性末端(中心軸線的兩側(cè))和平末端(中心軸線)

EcoRⅠ)能識別GAATTC序列,SmaI識別CCCGGG序列:

他們識別的核苷酸序列不同,但是切點(diǎn)都是在G↓C之間。

(4)比較有關(guān)的DNA酶

(1)DNA水解酶:能夠?qū)NA水解成四種脫氧核苷酸,徹底水解成膦酸、脫氧核糖和含氮堿基(2)DNA解旋酶:能夠?qū)NA或DNA的某一段解成兩條長鏈,作用的部位是堿基和堿基之間的氫鍵。注意:使DNA解成兩條長鏈的方法除用解旋酶以外,在適當(dāng)?shù)母邷兀ㄈ?4℃)、重金屬鹽的作用下,也可使DNA解旋。

(3)DNA聚合酶:能將單個的核苷酸通過磷酸二酯鍵連接成DNA長鏈。(4)DNA連接酶:是通過磷酸二酯鍵連接雙鏈DNA的缺口。注意比較DNA聚合酶和DNA連接酶的異同點(diǎn)。

2.“分子縫合針”——DNA連接酶

(1)兩種DNA連接酶(E·coliDNA連接酶和T4-DNA連接酶)的比較:

①相同點(diǎn):都縫合磷酸二酯鍵。

②區(qū)別:

E·coliDNA連接酶來源于大腸桿菌,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶來自T4噬菌體,能縫合兩種末端,但連接平末端的之間的效率較低。

(2)與DNA聚合酶作用的異同:

DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端,形成磷酸二酯鍵。

3.“分子運(yùn)輸車”——載體

(1)載體具備的條件:

①能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。

②具有一至多個限制酶切點(diǎn),供外源DNA片段插入。

③具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。

(2)運(yùn)載體使用的目的:①是用它做運(yùn)載工具,將目的基因轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中去。②是利用它在受體細(xì)胞內(nèi)對目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。

(3)最常用的載體是質(zhì)粒,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外,并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。它有多個限制酶切位位點(diǎn),可自我復(fù)制,也可整合到染色體DNA隨染色體同步復(fù)制。其上有標(biāo)記基因如氨芐青霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因等。被用做載體的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行人工改造的。

(4)其它載體:噬菌體的衍生物、動植物病毒。來源不同不同,結(jié)構(gòu)、大小、插入片段有很大差別。

(二)基因工程的基本操作程序

目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定

第一步:目的基因的獲取

1.目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。

2.原核基因采取直接分離(即已有物種)獲得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法_和化學(xué)合成法_。

3.獲得目的基因的方法

(一)從基因文庫中獲取目的基因:

基本概念的理解:

①將含有某種生物不同基因的許多DNA片段,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因,稱為基因文庫。

②將某種生物體內(nèi)的DNA全部提取出來,選用適當(dāng)?shù)南拗泼福瑢NA切成一定范圍大小的DNA片段,然后將這些片段分別與載體連接起來,導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,每個受體菌都含有了一段不同的DNA片段。這個群體包含了這種生物的所有基因。這種基因文庫叫基因組文庫。

③有些基因文庫比較小,只包含了一種生物的一部分基因,這種基因文庫叫做部分基因文庫,如cDNA文庫(用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA(也叫cDNA)片段,與載體連接后儲存在一個受體菌群中,這個受體菌群體叫做這種生物cDNA文庫。)

怎樣提?。?/p>

根據(jù)目的基因有關(guān)信息,例如,根據(jù)基因的核苷酸序列,基因的功能,基因在染色體的位置,基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA以及基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來獲取目的基因。

(二)PCR(即多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),1988年穆里斯發(fā)明)技術(shù)擴(kuò)增目的基因

(1)原理:DNA雙鏈復(fù)制基本原理

前提:一段已知目的基因的核苷酸序列,根據(jù)這一序列合成引物。

條件:a..四種脫氧核苷酸

b.DNA的兩條鏈為

c.熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)

d.一對引物(一小段單鏈DNA或RNA,一般20~30個堿基,能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對)e.溫度控制和緩沖液

(2)過程:

第一步:加熱至90~95℃DNA解鏈(即熱變性)

第二步:冷卻到55~60℃,引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈(復(fù)性);

第三步:加熱至70~75℃,熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)從引物起始互補(bǔ)鏈的合成(延伸)。第四步:重復(fù)循環(huán)此過程以獲得大量的目的基因。

第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)建

1.目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代,使目的基

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