膿汁和糞便標本中病原菌檢測實驗報告三

膿汁和糞便標本中病原菌檢測試驗報告三膿汁和糞便標本中病原菌檢測試驗報告三10/15微生物試驗報告一、試驗?zāi)康?、把握培育基制備的原則和一般方法。2、把握病原菌的分別與培育方法。形態(tài)。4、生疏幾種常用的細菌生化反響的名稱、原理、方法、結(jié)果分析及用途。5、把握血漿凝固酶試驗的原理、方法及用途。6、生疏藥物敏感性試驗方法的種類、原理及應(yīng)用，把握紙片集中法。7、把握玻片凝集試驗的原理、方法、結(jié)果觀看與推斷。二、試驗器材1、天平、稱量紙、干粉培育基、錐形瓶、量筒、155ml刻度吸管、平皿、洗耳球、酒精燈22234〔上次試驗平板〕2114〔菌液〕4441126441三、方法與步驟稱量干粉培培育基稱量干粉培培育基水量(ml)分裝(ml)備注養(yǎng)基(g)養(yǎng)分瓊脂11.4300錐形瓶，平養(yǎng)分瓊脂 2.9 75 3 5養(yǎng)分肉湯 1.1 50 1 1半固體瓊脂 1.7 60 3 3

板管，斜面15管，液體管，高層牛皮紙，用橡皮筋扎好→放入講臺邊的滅菌桶或滅菌筐內(nèi)→送到髙壓蒸汽滅菌室→滅菌〔用于倒平板的培育基不用加熱溶解，搖勻即可〕2、細菌的分別培育平板劃線分別法〕乙→膿汁標本→養(yǎng)分瓊脂平板(黃色〕〕丁一糞便標本一伊紅美藍平板(紫色〕1)右手拿接種環(huán)〔2~3〔2)左手握住盛有標本的試管的通過火焰三次滅菌〔3)〔或菌液〕一環(huán)，試管口火焰滅菌后塞好棉塞;(4)左手斜持平板，略開蓋，在酒精燈5~6cm〔5)燒1/4~1/5，劃畢后接種環(huán)再經(jīng)火焰滅菌，冷卻后用同樣方法在平板其余局部劃線，每次劃1-33^次〔〔6)接種完畢，將接種環(huán)燒灼滅7)將培育皿倒置，37°C343、細菌的純培育斜面接種分工→1EMB12/3〔平板底部朝下，蓋朝上放置〕→速送滅菌室→高壓蒸汽滅菌→洗刷。4、細菌的形態(tài)學檢查固定→染色(1)涂片→枯燥→固定丙→黃色，紫黑。丁→白色，粉紅。滴，水滴間距小于2cm;②取菌苔少許〔1mm小菌落半個〕與鹽水混勻，涂成大于lcm2;③涂畢→環(huán)移至涂膜中心側(cè)立，待環(huán)裂開，接種環(huán)燒灼滅菌?！菰铩潭ǎ菏殖州d玻片→端，涂膜朝上，兩個涂膜快速通過火焰外層3次，時間2 3秒鐘。(2)革蘭染色涂片→枯燥→固定→結(jié)晶紫→初染111鏡檢。—100X糊物象→細調(diào)整調(diào)焦，觀看物像→記錄結(jié)果→關(guān)閉電源→擦鏡紙拭去香柏油—擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚〔7:3)混合液擦拭→擦鏡紙擦拭油鏡。5、液體培育基接種〔肉湯接種〕1)2)〔3)標記：組號，顏色6、細菌的生化試驗等細菌的糖發(fā)酵試驗方法：①用砂輪在糖發(fā)酵管液面上方2?3cm處切割，然后，向切口外側(cè)分別掰接種。③退出接種針，燒灼滅菌。④管口朝向一樣，放置在平皿內(nèi)。紙片集中法90在平板上半部，作連續(xù)來回密集劃線，每次劃二分之一平板；⑥旋轉(zhuǎn)平板909090角，四次密集劃線；⑨設(shè)三點，呈等邊三角距離；⑩點距離平板邊緣約15mm;作標記：青、先、慶；?c.血漿凝固酶試驗方法：①取二滴兔血漿(rabbitplasma)置于干凈的玻片上。②分別用接種環(huán)取白色和黃色菌苔(約2?38?10mm薄菌膜，馬上觀看結(jié)果。③菌液消滅明顯凝塊者為陽性，否則為陰性。d.半固體穿刺接種法甲→白色乙→金黃色丙→紫黑丁→粉紅方法：①接種針斜面取菌，從半固體中心，垂直刺入，到達培育基底部54組號,顏色。7、細菌的血清學試驗、結(jié)果分析玻片凝集試驗1)15ul遠端設(shè)為試驗區(qū)，滴加福氏志賀菌診斷血清15ul;(2)用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔，約2個小菌落的菌量，研磨于鹽水或血清內(nèi)，混合均勻。四、結(jié)果與爭論〔一〕試驗結(jié)果圖1.1甲乙洗手前后 圖1.2丙丁洗手前后空氣的細菌學檢查結(jié)果〔暴露在衛(wèi)生間窗子邊：1.3空氣的細菌學檢查結(jié)果CFU/m3＝50000N÷AT=50000×3×(3.14×3.5cm2)×40/m3=258/m3細菌的分別培育結(jié)果：(1)膿汁標本在一般平板上有黃色、白色兩種菌落，菌落的色素是脂溶性的，是細菌本身的顏色。菌落直徑2mm透亮。(2)糞便標本在伊紅美藍平板上，有紫黑色、淡粉紅色兩種菌落，菌落色素是水2?3mm；1?2mm.而其他三張均有缺乏。第一二張膿汁的養(yǎng)分瓊脂平板，前面兩區(qū)涂抹太密集，而板的其他部位未充分利用，得不到格外明顯的菌落。第四張糞便的平板第一區(qū)太稀疏，未充分利用平板，故在培育后未見到數(shù)量較少的粉紅菌落，緣由是劃線時不嫻熟，不能連續(xù)劃線。2.1圖2.2丙，丁→糞便標本→伊紅美藍平板 細菌的純培育：菌落接種的斜面，菌苔的顏色，還是原來菌落的顏色，黃色或白色。落的顏色。菌苔灰白色、外表潮濕、光滑、前者不透亮，后者透亮。圖3.1四種菌落在斜面培育基上生長狀況圖4.1圖4.1膿汁菌苔〔左邊為白色菌苔，右圖為金黃色菌苔〕4.2糞便菌苔〔左圖為粉紅菌苔，右圖為紫黑色菌苔〕鏡下觀看：用一般平板，從濃汁標本中分別得到黃色、白色兩種菌落，這兩株細菌，顯微鏡素，這兩株葡萄球菌可能是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。G-桿菌，散在排列，從形態(tài)上不能鑒別是什么細菌。5、液體培育基接種5.1液體培育基接種結(jié)果細菌的生化試驗等:6.16.1半固體穿刺結(jié)果觀看及爭論： 表1.動力試驗結(jié)果菌苔 半固體試驗紫黑細菌1 +紫黑細菌2 -粉紅細菌1 -粉紅細菌2 -+：陽性-：陰性11細菌自接種部位向四周移動、集中生長，培育基呈云霧狀或根須狀混濁狀態(tài)，有鞭毛。但是試驗時覺察紫黑菌苔2無任何現(xiàn)象。經(jīng)過分析，應(yīng)當?shù)墙Y(jié)合其他組的結(jié)果，我們認為紫黑菌苔應(yīng)當是動力陽性的。2、粉紅細菌菌苔均沿著直線生長，可看出其無鞭毛。細菌的糖發(fā)酵試驗6.2〔④粉紅→乳糖③粉紅→葡萄糖②紫黑→乳糖①紫黑→葡萄糖〕編號菌苔糖發(fā)酵管反響現(xiàn)象結(jié)果描述符號甲紫黑糖發(fā)酵管變X⊕黃色有氣泡酸又產(chǎn)氣乙紫黑糖發(fā)酵管變X⊕黃色有氣泡酸又產(chǎn)氣丙粉紅糖發(fā)酵管變X+黃色無氣泡酸不產(chǎn)氣丁粉紅④糖發(fā)酵管變X-+：產(chǎn)酸或陽性⊕：產(chǎn)酸產(chǎn)氣紫色無氣泡-：陰性酸不產(chǎn)氣紫黑細菌微型發(fā)酵關(guān)內(nèi)液體變黃，產(chǎn)生氣泡，氣泡的高度分別為10mm和17mm，不產(chǎn)氣，不分解乳糖。6.36.3抗菌素敏感試驗結(jié)果3各菌抑菌圈直徑〔mm〕表菌苔青霉素頭孢曲松慶大霉素金黃色422530白色302240紫黑—3726粉紅—36284.藥敏試驗結(jié)果分析青霉素頭孢曲松慶大霉素金黃色+++白色+±+紫黑-++粉紅-++-：耐藥±：中度敏感+：敏感白色細菌對3種抗生素均敏感。金黃細菌對青霉素敏感，對先鋒霉素Ⅴ敏感，對慶大毒素敏感粉紅細菌對青霉素耐藥，對先鋒霉素Ⅴ敏感，對慶大毒素敏感〔4〕血漿凝固酶試驗結(jié)果：6.4〔左〕與金黃色〔右〕菌苔1、白色菌苔不發(fā)生凝塊，簡潔涂抹。呈均勻乳白狀態(tài)。白,附著于菌體外表,形成凝塊，涂抹不開。說明黃色細菌為致病菌。細菌的血清學試驗結(jié)果：6.5粉紅菌苔〔右〕凝集結(jié)果〔左側(cè)為比照〕菌液渾濁，少量絮狀，為陽性。說明粉紅菌為福氏志賀菌。結(jié)論：落是福氏志賀菌。1.分析：G+球菌，排列不規(guī)章，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌；結(jié)合菌落的顏色，可以初步斷定，這是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。再通過血漿凝固酶試驗，觀看到金黃色葡萄球菌能使血漿產(chǎn)生顆粒性物質(zhì)，而白色葡萄球菌則沒有任何反響，說明白金黃色葡萄球菌是致病菌。最終通過藥敏試驗，可見不同的抗生素所形成的抑菌圈不同，其中金黃色葡萄球菌對青霉素最敏感，而紫黑和粉紅細菌對青霉素耐藥。G-能使葡萄糖和乳糖的試管變色和產(chǎn)生氣體，粉紅色的細菌只能使葡萄糖的試管變色而無氣體，對乳糖無反響；經(jīng)半固體動力試驗，觀看到紫黑色的細菌使半固體培育基成渾濁狀態(tài)，粉紅色的細菌只在接種針插入的方向聚攏。綜上所述，紫黑色的細菌為大腸埃希菌，粉紅色的為福氏志賀菌。試驗的缺乏之處：〕進展斜面培育時，在斜面上亦覺察少許顏色略深呈白色的菌落，操作的重要性。平板劃線太重且接種環(huán)持握過直導致劃線過深。半固體接種穿刺有一只沒有接種到菌，試驗現(xiàn)象不明顯。留意事項：在培育基配制好后，我們需要檢查培育基是否合格。灼燒滅菌：接種環(huán)使用