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題困擾你的話，讓我們一起學(xué)下，那些似懂非懂的補(bǔ)償概念及我們實(shí)驗(yàn)中要遵循的補(bǔ)償原PMTPMT當(dāng)一個(gè)熒光經(jīng)過(guò)激光之后，激發(fā)發(fā)射光及發(fā)射波長(zhǎng)，而各個(gè)熒光發(fā)射光之間有一定的，即數(shù)值。這也是當(dāng)你僅僅做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，在其他通道看到的熒光信號(hào)就是你的熒光溢漏到這我們可以用下圖來(lái)簡(jiǎn)潔的理解：曲線分別是FITCPE的發(fā)射波長(zhǎng)，柱狀物是濾鏡檢測(cè)信號(hào)范PE通道檢測(cè)的信號(hào)，有一部分是來(lái)自的FITCPE信號(hào)TruePEtotalFL2FITCspillover及只有PE信號(hào)的值，這就是我們通常說(shuō)的單染或者單標(biāo),就是一管樣本只加一個(gè)，下面用FITC為例，來(lái)計(jì)FITC溢漏到PE的溢漏系數(shù)，左上圖為FITC單標(biāo)，可以看到有相當(dāng)一部分的信號(hào)溢漏到PE通道。通FlowJo軟件得到陽(yáng)性細(xì)胞群的FITC及PE的中位熒光值。我們的最終目的是讓陽(yáng)性群和群的PE通道中位數(shù)一致。%spilloverCoefficeincy=MFIPE/MFIFITC=補(bǔ)償系數(shù)MFIPE+MFIPE-)/(MFIFITC+-MFIFITC-)=(1650-185)/(3540-2：可替換原則，可以用其他熒光強(qiáng)的同熒光抗體來(lái)替換實(shí)驗(yàn)所用的抗體；可以用捕獲微珠來(lái)替換實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。具體來(lái)說(shuō)就是，如果你實(shí)驗(yàn)中用IFNg-FITC來(lái)檢測(cè)IFNg的表達(dá)量，因?yàn)槠浔磉_(dá)強(qiáng)度很低，熒光很弱，不是一個(gè)很好的單標(biāo)選擇，你可以用CD3-FITC來(lái)替換抗體要物種匹配(人，鼠及大鼠）及輕鍵（kapper,lamda）匹配。補(bǔ)償原則IFN-gFITC.或者使用微珠來(lái)得到信號(hào)很強(qiáng)的單標(biāo)。在這里還要澄清一點(diǎn)，我們要求的是補(bǔ)的，PMT值不同，光信號(hào)也大不同，進(jìn)而影響到溢漏值。所以我們要遵循補(bǔ)償原則4.
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