藥物熱源檢查技術(shù)

藥物的生物檢測技術(shù)——熱原檢查主講人:XXX熱原系指由微生物產(chǎn)生的能引起恒溫動物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。它包括細(xì)菌性熱原、內(nèi)源性高分子熱原、內(nèi)源性低分子熱原及化學(xué)熱原等。藥物中的“熱原”通常是指細(xì)菌性熱原，是微生物產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。一般來說內(nèi)毒素是熱原,但熱原不全是內(nèi)毒素。除另有規(guī)定外，靜脈用注射劑按各品種項下的規(guī)定，照細(xì)菌內(nèi)毒素檢査法（通則1143)或熱原檢査法(通則1142)檢查，應(yīng)符合規(guī)定。熱原的家兔檢查法由于家兔對熱原的反應(yīng)與人基本相似，家兔法為各國藥典規(guī)定的檢查熱原的法定方法。此法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性取決于試驗動物的狀況、試驗室條件和操作的規(guī)范性。供試用的家兔應(yīng)健康合格，體重1.7kg以上（用于生物制品檢査用的家兔體重為1.7?3.0kg)，雌兔應(yīng)無孕。預(yù)測體溫前7日即應(yīng)用同一飼料飼養(yǎng)，在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異?，F(xiàn)象。試驗所用家兔應(yīng)在檢查供試品前7b內(nèi)預(yù)測體溫，進(jìn)行挑選。供試用家兔每批供試品初試用3只，復(fù)試5只。在檢查前1~2日，家兔應(yīng)處于同一溫度環(huán)境中，實驗室應(yīng)為17~25℃，與飼養(yǎng)室溫度相差不大于3℃，并防止動物躁動和避免噪聲干擾。家兔在實驗前至少一小時開始停止給食，并置于寬松裝置中，直至實驗完畢。測溫裝置精密度應(yīng)為±0.1℃。試驗前的準(zhǔn)備測溫探頭或肛溫計插入肛門的深度和時間各兔應(yīng)相同，深度一般約6cm，時間不得少于一分半鐘，每隔30分鐘測量一次，一般測兩次，兩次體溫之差不超過0.2℃，以平均值作為該兔正常體溫。當(dāng)日使用的家兔，正常體溫應(yīng)在38.0~39.6℃，且同組各兔間正常體溫之差不得超過1℃。試驗用的注射器、針頭及一切和供試品接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中250℃加熱30min，或180℃加熱2h，也可用其他適宜方法除去熱原。試驗前的準(zhǔn)備測家兔正常體溫后15min內(nèi)，由耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂?8℃的供試品溶液，然后每隔30min測體溫1次，連續(xù)測6次。每只家兔正常體溫與注射供試品溶液后6次測量體溫中最高的體溫之差，即為該兔的升高溫度。如3只家兔中有1只體溫升高0.6℃或以上，或3只家兔體溫升高均低于0.6℃但升高總和達(dá)1.4℃或以上，則另取5只家兔復(fù)試，方法同上。檢查法結(jié)果判定1.判為符合規(guī)定：在初試3只家兔中，體溫升高均低于0.6℃并且升高總和低于1.3℃。在復(fù)試5只家兔中，體溫升高0.6℃或以上的家兔不超過一只，并且初試與復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總和為3.5℃或以下。2.有下列情況者，復(fù)試一次：3只家兔1只體溫升高0.6℃或以上3只家兔升溫均低于0.6℃但升溫總和達(dá)1.3℃或以上。結(jié)果判定3.有下列情況者，判為不符合規(guī)定：在初試3只家兔中，體溫升高0.6℃或以上的超過一只復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或以上的家兔超過一只在初試與復(fù)試合并的8只家兔中體溫升高總和超過3.5℃4.出現(xiàn)負(fù)值的規(guī)定如下：當(dāng)家兔升溫為負(fù)值時，均以0℃計。注意事項盡量使用熱原測溫儀測溫，因為其感溫探頭在整個測溫過程中都置于家兔肛門內(nèi)，所測體溫較正確，同時也避免了漏檢現(xiàn)象。熱原耐熱性好，但在180℃3~4h，或200℃60min，或250℃30~45min可徹底破壞熱原。因此耐熱物品如玻璃制品、注射器等均可用此法破壞熱原。熱原實驗室內(nèi)外應(yīng)保持安靜，避免日光直射。捉拿家兔時，應(yīng)一只手抓住頸部，一只手托其臀部，避免其掙扎。整個過程中要避免家兔騷動以保持體