發(fā)酵工程實驗

發(fā)酵工程實驗第1頁/共69頁實驗一、斜面培養(yǎng)基的選擇一、實驗目的學習菌種斜面培養(yǎng)基選擇的方法和原理。二、實驗原理良好的斜面培養(yǎng)基能使孢子迅速萌發(fā)和生長，菌絲生長快、產(chǎn)生孢子多、孢子產(chǎn)生時間短，從而獲得優(yōu)質(zhì)的種子液，并縮短發(fā)酵的周期。根據(jù)菌株在斜面培養(yǎng)基上菌絲生長和孢子產(chǎn)生速度、數(shù)量和質(zhì)量等情況，來選擇適當?shù)男泵媾囵B(yǎng)基。第2頁/共69頁三、實驗材料菌株：一株鏈霉菌。培養(yǎng)基成分：葡萄糖、L-天門冬酰胺、K2HPO4、微量鹽、瓊脂、酵母膏、燕麥片、復合維生素、麥芽膏、馬鈴薯。其他儀器設(shè)備和材料：試管、移量管、滅菌鍋、接種環(huán)、無菌培養(yǎng)皿、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、酒精燈、無菌水等。第3頁/共69頁四、實驗步驟1．培養(yǎng)基配制和滅菌：1#：可溶性淀粉20g，KNO31g，NaCl0.5g，K2HPO4·3H2O0.5g，MgSO4·7H2O0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O0.01g，瓊脂15~20g，水1000ml，pH7.4~7.6。2#培養(yǎng)基：酵母膏4g，葡萄糖4g，麥芽膏5g，復合維生素3.5mg，微量鹽1ml，瓊脂20g，定容至1L，pH7.2；第4頁/共69頁3#培養(yǎng)基：燕麥片20g（煮沸30分鐘，8層紗布過濾），微量鹽1ml，瓊脂20g，定容至1L，pH7.2；4#：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，瓊脂15~20g，水1000ml，pH7.4~7.6。采用濕熱滅菌，滅菌溫度為121℃，時間30min。第5頁/共69頁2．培養(yǎng)基滅菌及試管斜面制作。3．斜面接種：用接種環(huán)取配制好的鏈霉菌孢子懸液一環(huán)，在長度一樣的斜面上分別涂布接種，28°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。4．菌絲形態(tài)和孢子產(chǎn)生觀察：每24h觀察菌絲生長和孢子產(chǎn)生情況，第3d開始每天取一支斜面加入5ml無菌水，振蕩均勻，用移量管從試管中取0.1ml涂布在平板上，28°C下培養(yǎng)，3d后觀察并記錄菌落數(shù)。第6頁/共69頁五、注意事項1．試管采用同一規(guī)格，培養(yǎng)基裝量一致，斜面長度一致，以免影響結(jié)果。2．斜面接種量用同一接種環(huán)，以確保接種量一致。3．整個過程在無菌操作下完成。六、實驗結(jié)果及分析對實驗所觀察到的現(xiàn)象、實驗結(jié)果進行分析，選擇該菌株的斜面培養(yǎng)基。七、思考題斜面培養(yǎng)基必須滿足什么條件？不同菌株的斜面培養(yǎng)基是否相同？為什么？如何設(shè)計斜面培養(yǎng)基？第7頁/共69頁實驗一具體安排1、斜面接種后第三天（星期六）每組每天分配2人進行取樣，檢測斜面生長情況和孢子的產(chǎn)生情況。（大家最好把時間安排好，共用移液管）0.1ml孢子懸液涂布培養(yǎng)計數(shù)第8頁/共69頁2、記錄連續(xù)三天計數(shù)結(jié)果，確定生長好、產(chǎn)生孢子數(shù)量多的斜面培養(yǎng)基第9頁/共69頁實驗報告的寫法題目：一株鏈霉菌斜面培養(yǎng)基的選擇1材料與方法1.1材料1.2方法2結(jié)果與分析3討論第10頁/共69頁實驗二、種子培養(yǎng)基的選擇一、實驗目的學習發(fā)酵生產(chǎn)種子培養(yǎng)基選擇的方法和原理。二、實驗原理種子培養(yǎng)基主要是為菌絲的生長繁殖提供營養(yǎng)，所以應保證其營養(yǎng)成分易被菌體吸收利用，通常是以菌體生長速度和菌體濃度來選擇種子培養(yǎng)基。第11頁/共69頁在一定時間內(nèi)，菌絲體生長快則生長量大，生長量大菌體密度就大。在一定范圍內(nèi)，菌體密度越大，其吸光度就越大，根據(jù)吸光度的大小可以初步檢測其菌體密度，進一步確定種子液的生長情況。一定體積的種子液其菌體濕重或干重大，則其生長量大，根據(jù)菌絲體濕重或干重的大小就可以確定種子液的生長情況，從而確定適當?shù)姆N子培養(yǎng)基。第12頁/共69頁三、實驗材料菌種：實驗一保存的生長良好的斜面。培養(yǎng)基成分：酵母膏，葡萄糖，麥芽膏，復合維生素，微量鹽，淀粉，牛肉膏，蛋白胨，CaCO3等。其他儀器設(shè)備和材料：分光光度計，移量管，滅菌鍋，接種環(huán)，無菌培養(yǎng)皿，恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺，酒精燈，三角瓶，紗布，無菌水等。第13頁/共69頁四、實驗步驟1．培養(yǎng)基配制及滅菌：1#培養(yǎng)基：酵母膏4g，葡萄糖4g，麥芽膏10g，復合維生素3.5mg，微量鹽1ml，定容至1L，pH7.2。2#培養(yǎng)基：淀粉24g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，酵母膏5g，蛋白胨3g，CaCO34g，定容至1L，pH7.0。500ml三角瓶裝液體種子培養(yǎng)基100ml，8層紗布封口。采用濕熱滅菌，滅菌溫度為121℃，時間30min。第14頁/共69頁2．孢子懸液的制備：取2支生長良好的斜面菌種，各注入5ml無菌水，充分振蕩，將孢子從斜面上洗脫，倒入無菌三角瓶備用。3．接種及培養(yǎng)：用移量管取4ml孢子懸液，接入待選擇的種子培養(yǎng)基中，置于28℃、180rpm的搖床上進行培養(yǎng)。第15頁/共69頁4．菌絲體生長狀況觀察：1d后每12h取樣檢測。每次取樣10ml，先進行吸光度的檢測（分光光度計用未接種的種子培養(yǎng)基進行調(diào)零），再全部倒入預先干燥稱重的濾紙內(nèi)進行過濾，用無菌水洗滌菌體3次，除去水溶性雜質(zhì)，稱重，記錄菌絲體濕重，用放入60℃電熱鼓風干燥箱中進行干燥至恒重，稱重，記錄菌絲體干重。第16頁/共69頁五、注意事項1．孢子懸液制備和種子液的取樣都要進行嚴格的無菌操作，防止雜菌污染。2．注意要充分洗去水溶性的雜質(zhì)，以免影響實驗結(jié)果。3．干燥時間要適宜。六、實驗結(jié)果及分析對實驗所觀察到的現(xiàn)象、實驗結(jié)果進行分析，選擇該菌株的種子培養(yǎng)基。第17頁/共69頁七、思考題1．為什么濕重法和干重法要充分洗去水溶性成份？2．菌絲體干燥時間為什么不能太短、也不能太長？3．如何選擇種子培養(yǎng)基？第18頁/共69頁取樣離心讀取菌體體積過濾洗滌稱濕重烘干稱干重第19頁/共69頁第20頁/共69頁第21頁/共69頁實驗三、發(fā)酵培養(yǎng)基的選擇一、實驗目的初步了解不同發(fā)酵培養(yǎng)基對發(fā)酵終產(chǎn)物和目的產(chǎn)物的影響，理解發(fā)酵培養(yǎng)基成分對目的產(chǎn)物及其發(fā)酵產(chǎn)物提純的重要性。二、實驗原理在不同的發(fā)酵培養(yǎng)基條件下，微生物進行初級代謝的途徑基本一致，初級代謝產(chǎn)物也大體相同，但是其次級代謝途徑則可能有很大不同，因此產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物成分可能也大不相同，在一定溶劑系統(tǒng)下展開，不同次級代謝產(chǎn)物在TLC上的Rf值不一樣，利用TLC檢測，可以初步確定其不同發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)生的不同次級代謝產(chǎn)物。第22頁/共69頁三、實驗材料菌種：搖瓶培養(yǎng)48h一株鏈霉菌的種子液。培養(yǎng)基成分：甘露醇，大豆粉，葡萄糖，酵母膏，淀粉，蛋白胨，NaCl，K2HP4，MgSO47H2O，CaCO3。其他材料、設(shè)備儀器：滅菌鍋，恒溫振蕩培養(yǎng)箱，超凈工作臺，酒精燈，三角瓶，茴香醛顯色劑等。第23頁/共69頁四、實驗步驟1．培養(yǎng)基配制與滅菌1#：甘露醇20g，大豆粉20g，定容至1L，pH7.0；2#：大豆粉20g，葡萄糖20g，酵母膏2g，淀粉5g，蛋白胨2g，NaCl4g，K2HP40.5g，MgSO47H2O0.5g，CaCO32g，定容至1L，pH7.8（定容測pH后，再將CaCO3在加入培養(yǎng)基內(nèi)）；培養(yǎng)基配制完后，加入150ml的三角瓶中，每瓶狀液量為40ml，用濕熱滅菌，滅菌溫度為121℃，時間30min。第24頁/共69頁2．接種與培養(yǎng)：將生長良好的種子液按15%的接種量進行接種，接完種后置于28℃、180rpm的搖床上進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為6d。3．發(fā)酵產(chǎn)物初步提?。喊l(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液進行超聲破壁30min，加入乙酸乙酯30ml，100rpm搖床振蕩20min，再用濾紙濾去菌絲體，濾液用分液漏斗將乙酸乙酯相分離出來，進行減壓濃縮至4~5ml液體。第25頁/共69頁4．TLC（薄層層析）檢測：在同一塊薄層層析硅膠板上將濃縮液在進行點樣，再利用適當?shù)恼箤尤軇┻M行展層。待溶劑前沿到達硅膠板另一端時取出硅膠板，溶劑完全干后將硅膠板置于紫外儀下檢測，記錄檢測結(jié)果，取出硅膠板進行顯色反應，并記錄顯色結(jié)果。五、注意事項1．點樣時注意點不宜太大，其直徑不超過0.5cm，最好0.2~0.3cm。2．點樣量要足夠多，使展層后能夠檢測出更多的不同條帶。第26頁/共69頁六、實驗結(jié)果及分析記錄TLC檢測的結(jié)果（紫外檢測和顯色結(jié)果），說明對于一定目的產(chǎn)物來說，發(fā)酵培養(yǎng)基成分的重要性。七、思考題1．同一微生物菌株在不同培養(yǎng)基上所產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物相同嗎？請簡要分析其原因。2．用TLC檢測微生物菌株不同代謝產(chǎn)物時，這些產(chǎn)物必須滿足什么條件？第27頁/共69頁第28頁/共69頁實驗四、目的產(chǎn)物發(fā)酵效價的TLC檢測一、實驗目的初步學習發(fā)酵過程中TLC檢測目的產(chǎn)物效價的方法；了解目的產(chǎn)物產(chǎn)量隨發(fā)酵時間而變化的的關(guān)系。第29頁/共69頁二、實驗原理微生物產(chǎn)生的抗生素一般都是次級代謝產(chǎn)物，微生物生長從對數(shù)生長期進入穩(wěn)定期時才產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物。那些對一定波長的光具吸收的次級代謝產(chǎn)物，可以利用TLC展層后刮板的方法，將相應條帶刮下，用溶劑浸泡，再利用分光光度計進行檢測浸泡液的吸光度，根據(jù)吸光度的大小，即可初步確定目的產(chǎn)物的發(fā)酵效價。第30頁/共69頁三、實驗材料菌種：搖瓶培養(yǎng)48h一株鏈霉菌的種子液。培養(yǎng)基成分：大米，大豆粉，米糠。其他材料、設(shè)備儀器：乙酸乙酯等有機試劑、滅菌鍋，超凈工作臺，酒精燈，三角瓶，紫外分光光度計，層析缸等。第31頁/共69頁四、實驗步驟1．培養(yǎng)基的配制與滅菌：大米50g，大豆粉30g，米糠20g，H2O100mL，裝入500mL三角瓶；采用高壓蒸汽滅菌，溫度121℃，時間60min，滅完菌后趁熱將培養(yǎng)基振散。2．接種：將生長良好的種子液接入固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，每瓶接種量為25ml。接完種后置于28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進行靜置培養(yǎng)。第32頁/共69頁3．取樣檢測：24h后進行取樣，取樣時間間隔為24h，每次取樣2g左右，取出的樣品先進行稱重，再按一定比例加入有機溶劑提取其中目的組分，減壓濃縮至少量溶劑，進行TLC檢測，刮取目的組分的條帶，按樣品重量比例加入相應體積的溶劑，取上清液進行紫外吸收檢測。4．根據(jù)吸光度，計算目的組分的發(fā)酵效價。第33頁/共69頁五、注意事項1．取樣時注意嚴格的無菌操作，以免雜菌污染。2．刮取目的組分條帶時，不要將無關(guān)組分刮下，也不能將目的組分漏刮，否則結(jié)果誤差較大；浸泡目的組分的TLC條帶時所用溶劑的量要根據(jù)所取的樣品重量。六、實驗結(jié)果及分析記錄實驗結(jié)果，分析原因及其說明的問題。第34頁/共69頁七、思考題為什么微生物次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)量會隨著時間而發(fā)生變化？有時當目的產(chǎn)物發(fā)酵效價達到最大值以后，如果繼續(xù)發(fā)酵目的組分產(chǎn)率非但不增加，反而越來越少，甚至完全消失，試解釋其原因。第35頁/共69頁第36頁/共69頁實驗五、變溫發(fā)酵對目的產(chǎn)物產(chǎn)量的影響一、實驗目的初步了解不同溫度對菌體生長和抗生素發(fā)酵效價的影響，理解變溫發(fā)酵對提高目的產(chǎn)物的意義。第37頁/共69頁二、實驗原理微生物在發(fā)酵過程中，首先要進行菌絲體的生長，對于分批發(fā)酵或?qū)嶒炇胰瞧堪l(fā)酵來說，隨著營養(yǎng)物質(zhì)的消耗、其他有害因素的積累，其生長由對數(shù)期進入穩(wěn)定期，菌絲體生長量達到最大，此時微生物便通過次級代謝途徑，迅速將初級代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)榇渭壌x產(chǎn)物。對于許多微生物產(chǎn)生的抗生素來說，此時發(fā)酵溫度適度降低，將大大提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)量。第38頁/共69頁三、實驗材料菌種：搖瓶培養(yǎng)48h一株鏈霉菌的種子液。培養(yǎng)基成分：大米，大豆粉，米糠。其他材料、設(shè)備儀器：乙酸乙酯等有機試劑、滅菌鍋，超凈工作臺，酒精燈，三角瓶，紫外分光光度計，層析缸等。第39頁/共69頁四、實驗步驟1．培養(yǎng)基的配制與滅菌：大米20g，大豆粉5g，米糠7g，H2O30mL，裝入150mL三角瓶；采用高壓蒸汽滅菌，溫度121℃，時間60min，滅完菌后趁熱將培養(yǎng)基振散。2．接種：將生長良好的種子液接入固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，每瓶接種量為10ml。3．變溫培養(yǎng)：接完種后置于28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進行靜置培養(yǎng)，當菌絲體長滿固體培養(yǎng)基時，將溫度下調(diào)3℃繼續(xù)培養(yǎng)，對照組仍然采用28℃。在菌絲體出現(xiàn)溶菌時終止發(fā)酵。第40頁/共69頁4．目的組分提取：將發(fā)酵物加入乙酸乙酯50ml超聲破壁30min，再置于100rpm搖床上振蕩30min，用濾紙過濾，濾液用分液漏斗將乙酸乙酯相取出，進行減壓濃縮，濃縮液加乙酸乙酯進行定容。5．發(fā)酵效價檢測：取0.2ml樣品溶液，進行劃線點樣，待樣品干后進行展層，將目的組分條帶刮下，用一定體積溶劑浸泡，取上清液進行吸光度檢測。6．根據(jù)吸光度，計算兩個樣品中的目的組分的發(fā)酵效價。第41頁/共69頁五、注意事項變溫時間要選擇好，在菌絲體生長量未達到最大之前變溫可能會影響菌絲體的生長速度。選擇的制備型硅膠板制板條要一致，以免影響結(jié)果。如濃度太高，則先要進行稀釋，再檢測吸光度。六、實驗結(jié)果及分析記錄實驗結(jié)果，分析原因及其說明的問題。七、思考題為什么抗生素工業(yè)發(fā)酵采用變溫發(fā)酵？對于某些抗生素而言，變溫發(fā)酵為什么產(chǎn)量會有所提高？第42頁/共69頁第43頁/共69頁實驗六、葡萄糖濃度對目的產(chǎn)物發(fā)酵效價的影響一、實驗目的初步了解不同濃度的葡萄糖對抗生素發(fā)酵效價的影響，進一步理解優(yōu)先利用的速效碳源分解代謝產(chǎn)物的抑制作用。第44頁/共69頁二、實驗原理在有易于利用的碳源存在的條件下，細胞不會生產(chǎn)異化難利用碳源的酶。這種控制機制使細胞以更為經(jīng)濟的方式去合成蛋白質(zhì)，從而加強它在自然界生存競爭的優(yōu)勢。許多抗生素的合成過程受葡萄糖的抑制。葡萄糖引起的抑制作用并不是葡萄糖本身的直接作用，而是葡萄糖作為一種易被利用碳源，促進了抗生素產(chǎn)生菌生長的結(jié)果，而抗生素的產(chǎn)率與菌體生長速率大致成反比，因此葡萄糖等速效碳源過多的情況下，微生物產(chǎn)生的抗生素產(chǎn)量往往降低。第45頁/共69頁三、實驗材料菌種：搖瓶培養(yǎng)48h一株鏈霉菌的種子液。培養(yǎng)基成分：大豆粉，葡萄糖，酵母膏，淀粉，蛋白胨，NaCl，K2HP4，MgSO47H2O，CaCO3。其他材料、設(shè)備儀器：滅菌鍋，恒溫振蕩培養(yǎng)箱，超凈工作臺，酒精燈，三角瓶等。第46頁/共69頁四、實驗步驟1．培養(yǎng)基配制與滅菌1#：大豆粉20g，葡萄糖20g，酵母膏2g，淀粉5g，蛋白胨2g，NaCl4g，K2HP40.5g，MgSO47H2O0.5g，CaCO32g，定容至1L，pH7.8（定容測pH后，再將CaCO3在加入培養(yǎng)基內(nèi)）；2#：大豆粉20g，葡萄糖40g，酵母膏2g，淀粉5g，蛋白胨2g，NaCl4g，K2HP40.5g，MgSO47H2O0.5g，CaCO32g，定容至1L，pH7.8。培養(yǎng)基配制完后，加入150ml的三角瓶中，每瓶狀液量為40ml，用濕熱滅菌，滅菌溫度為121℃，時間30min。第47頁/共69頁2．接種與培養(yǎng)：將生長良好的種子液按15%的接種量進行接種，接完種后置于28℃、180rpm的搖床上進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為5d，另外剩下一瓶2#培養(yǎng)基發(fā)酵7d。3．發(fā)酵產(chǎn)物初步提?。喊l(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液進行超聲破壁30min，加入乙酸乙酯30ml，100rpm搖床振蕩20min，再用濾紙濾去菌絲體，濾液用分液漏斗將乙酸乙酯相分離出來，進行減壓濃縮至4~5ml液體。第48頁/共69頁4．TLC（薄層層析）檢測：三個樣品各取0.2ml，在制備型薄層層析硅膠板上進行劃線點樣，再利用適當?shù)恼箤尤軇┻M行展層。展完層后待硅膠板上的溶劑完全揮發(fā)干再進行紫外檢測，將目的條帶刮下，以同樣體積的溶劑浸泡樣品，取浸泡液上清部分進行吸光度檢測，如果濃度太高，則稀釋后再檢測。5．記錄檢測到的吸光度，計算目的組分的發(fā)酵效價。第49頁/共69頁五、注意事項選擇的制備型硅膠板制板條要一致，以免影響結(jié)果。如濃度太高，則先要進行稀釋，再檢測吸光度。六、實驗結(jié)果及分析記錄實驗結(jié)果，分析其原因及其說明的問題。七、思考題為什么工業(yè)發(fā)酵抗生素要限制速效碳源、氮源的使用？如何才能做到既要保證適量菌絲體的生長，又要不影響抗生素的產(chǎn)量？抗生素等目的發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)量與菌絲體生長之間有何關(guān)系？第50頁/共69頁實驗七、磷酸鹽濃度對發(fā)酵目的產(chǎn)物的影響一、實驗目的初步檢測不同磷酸鹽濃度對一株放線菌搖瓶發(fā)酵活性成分產(chǎn)量的影響，尋找一定發(fā)酵條件下，最佳磷酸鹽濃度。第51頁/共69頁二、實驗原理磷酸鹽是很重要的抗生素產(chǎn)生菌菌絲體生長限制養(yǎng)分，促進初級代謝作用，在很多初級代謝過程中作為一種反應因子，除控制抗生素產(chǎn)生菌的DNA、RNA和蛋白質(zhì)的合成外，也控制碳水化合物的代謝作用，細胞的呼吸作用和細胞內(nèi)的ATP水平。無機磷抑制次級代謝作用，限制次級代謝產(chǎn)物合成作用的誘導物的合成，過量的磷還抑制次級代謝產(chǎn)物前體的形成，在許多抗生素的生物合成中，只要發(fā)酵液中的磷酸鹽未耗盡，菌絲體生長就繼續(xù)進行，而不合成抗生素，一旦磷酸鹽耗竭，抗生素合成便開始。第52頁/共69頁三、實驗材料菌種：搖瓶培養(yǎng)48h一株鏈霉菌的種子液。培養(yǎng)基成分：大豆粉，葡萄糖，酵母膏，淀粉，蛋白胨，NaCl，K2HP4，MgSO47H2O，CaCO3。其他材料、設(shè)備儀器：滅菌鍋，恒溫振蕩培養(yǎng)箱，超凈工作臺，酒精燈，三角瓶等。第53頁/共69頁四、實驗步驟1．培養(yǎng)基配制與滅菌培養(yǎng)基配方：大豆粉20g，葡萄糖20g，酵母膏2g，淀粉5g，蛋白胨2g，NaCl4g，K2HP4（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0）g，MgSO47H2O0.5g，CaCO32g，定容至1L，pH7.8（定容測pH后，再將CaCO3在加入培養(yǎng)基內(nèi)）；培養(yǎng)基配制完后，加入150ml的三角瓶中，每瓶狀液量為40ml，用濕熱滅菌，滅菌溫度為121℃，時間30min。第54頁/共69頁2．接種與培養(yǎng)：將生長良好的種子液按15%的接種量進行接種，接完種后置于28℃、180rpm的搖床上進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為5d。3．發(fā)酵產(chǎn)物初步提取：發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液進行超聲破壁30min，加入乙酸乙酯30ml，100rpm搖床振蕩20min，再用濾紙濾去菌絲體，濾液用分液漏斗將乙酸乙酯相分離出來，進行減壓濃縮至4~5ml液體。第55頁/共69頁4．TLC（薄層層析）檢測：將各樣品濃縮液各取0.2ml，在制備型薄層層析硅膠板上進行劃線點樣，再利用適當?shù)恼箤尤軇┻M行展層。展完層后待硅膠板上的溶劑完全揮發(fā)干再進行紫外檢測，將目的條帶刮下，以同樣體積的溶劑浸泡樣品，取浸泡液上清部分進行吸光度檢測，如果濃度太高，則稀釋后再檢測。5．記錄檢測到的吸光度，計算目的組分的發(fā)酵效價。第56頁/共69頁五、注意事項選擇的制備型硅膠板制板條要一致，以免影響結(jié)果。如濃度太高，則先要進行稀釋，再檢測吸光度。六、實驗結(jié)果及分析記錄實驗結(jié)果，分析其原因及其說明的問題。七、思考題無機磷酸鹽對發(fā)酵產(chǎn)物有何影響？發(fā)酵過程如何控制其適當濃度？第57頁/共69頁第58頁/共69頁實驗八、正交實驗一、實驗目的掌握正交實驗的原理，學習用正交實驗來優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基組分及各組分配比的方法。對發(fā)酵培養(yǎng)基中的大米、大豆粉、葡萄糖、蛋白胨等四種成分進行配比優(yōu)化，確定菌株發(fā)酵培養(yǎng)基中它們的最佳配比。第59頁/共69頁二、實驗原理正交設(shè)計是一種研究多因素試驗的設(shè)計方法。在多因素試驗中，隨著試驗因素和水平數(shù)的增加，處理組合數(shù)將急劇增加。n個因素M個水平的試驗有Mn個處理組合，要全面實施這么龐大的試驗是相當因難的。因而，D．J．Finney倡儀了部分試驗法。而后日本學者倡導利用正交款式設(shè)計部分試驗，稱為正交試驗。第60頁/共69頁正交試驗是利用一套規(guī)格化的表格——正交表(orthogonaltable)來科學合理地安排試驗。這種設(shè)計的特點是在試驗的全部處理組合中，僅挑選部分有代表性的水平組合(處理組合)進行試驗。通過部分實施了解全面試驗情況，從中找出較優(yōu)的處理組合。這樣可以大大節(jié)省人、財、物和時間，使一些難以實施的多因素試驗得以實施。例如，要進行一個4因素3水平的多因素試驗，如果全面實施