全文03-10壓縮版脂氧素對(duì)心搏驟停后心肌缺血再灌注損傷的作用及機(jī)制研究

脂氧素對(duì)心搏驟停肌缺血再灌注損傷的作用及機(jī)制研背景和目標(biāo)以缺血再灌注為始動(dòng)因素的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)加重了心臟損傷，導(dǎo)致的心功徑來(lái)改善復(fù)蘇肌損傷。，材料和方法18Sham（n=6CPR（n=6）LX組（n=6。LX組合CPR組動(dòng)物用氣管夾閉法誘導(dǎo)心搏驟停造模，行心肺復(fù)蘇到自主（ROSC2%乙醇溶液。ShamROSC6h后取血和心肌組織檢測(cè)驗(yàn)證等指標(biāo)和觀察組織損傷。結(jié)果LXLVSP、dp/dtmax、-dp/dtmaxMAPCPR6LXCPR組明顯下降，pH降低壞死范圍明顯小于CPR組；心肌細(xì)胞及間質(zhì)結(jié)構(gòu)損傷和炎性浸潤(rùn)輕于CPR，IL-10表達(dá)較CPR結(jié)論給予外源性脂氧素A4可以顯著改善兔復(fù)蘇肌損傷，具體機(jī)制可能是促進(jìn)心搏驟停肌缺血再灌注后的炎癥消退，減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，抑制NF-κB的活化，下調(diào)引reperfusionI/R）癥反應(yīng)綜合征（SystemicinfltoryresponsesyndromeSIRS脂氧素A4對(duì)多種炎癥細(xì)胞和炎癥相關(guān)有顯著的負(fù)性調(diào)節(jié)作用，并同時(shí)上調(diào)2、IL-4IL-10等抗炎因子的表達(dá)等[3,4]，因其具有廣泛的抗炎促消退作用，被看成是炎癥反應(yīng)的“剎車信號(hào)”A4對(duì)于缺血再灌注后腦損傷及結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所造成的心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用已得到證實(shí)[5,6]，但尚無(wú)關(guān)于心搏驟停肌缺血再灌是否具有保護(hù)復(fù)蘇肌損傷及改善血流動(dòng)力學(xué)的作用，并研究其可能機(jī)制。材料與方所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大學(xué)A3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供實(shí)驗(yàn)場(chǎng)地為大學(xué)中南醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。18Sham組（n=6，CPR組（n=6）和LX組（n=6。1.9~2.kg12h1%（3.5mlkg4TYEvita2dua，，（Draeger醫(yī)療設(shè)備，中國(guó)設(shè)置呼吸頻率為50次/分鐘，潮氣量10ml/kg，吸呼比為1:2，氧源為空氣。右側(cè)股動(dòng)脈壓、中心靜脈壓和左室內(nèi)壓都使用16G心臟導(dǎo)管連接BL-420F生物信號(hào)系統(tǒng)（泰能，中國(guó)）監(jiān)測(cè)，心電圖采用Ⅱ?qū)?lián)，，持續(xù)監(jiān)測(cè)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖,穩(wěn)定并記錄基礎(chǔ)血流動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)后，LXCPR組動(dòng)物關(guān)閉呼吸機(jī)，在呼氣相夾閉氣管插管約5~9分鐘，誘導(dǎo)3分鐘的心搏驟停（自主脈搏，（MAP≤10mmHg180次/1/350次/2分鐘后觀察5秒鐘，若沒(méi)有達(dá)到ROSC（自主脈搏恢復(fù)，并且伴隨動(dòng)脈收縮壓（Systolicarterial，從心電監(jiān)護(hù)上觀察出現(xiàn)室顫則予以雙相電除顫1能量為10J，電除顫為每2分鐘1次，10ROSC，則視為復(fù)蘇失敗。持續(xù)自主循環(huán)恢復(fù)定義為ROSC持續(xù)時(shí)間大于5分鐘，并定義恢復(fù)自主循環(huán)的時(shí)相點(diǎn)為ROSC后0h。然后LX組給予脂氧素A4（1.5ug/kg）乙醇溶液，對(duì)照組給予等體積2%乙醇溶液。連續(xù)監(jiān)測(cè)復(fù)蘇死動(dòng)物取心臟，剪取心尖做病理、電鏡檢測(cè)，剪取500mg心室肌液氮保存集齊肌勻漿WesternBlot和ELISA，剩余部分心肌做壞死面積檢測(cè)。，CAROSCROSC ROSCAnesthesiaWave 5-

Drug

血流動(dòng)力學(xué)及心功能測(cè)定血壓內(nèi)壓等數(shù)據(jù)由系統(tǒng)BL-420F生物機(jī)能取血檢測(cè)：Sham組及各LX組復(fù)蘇后6h后股動(dòng)脈穿刺取血快速送檢查血常規(guī)和血?dú)?，靠近心尖切?××4mm的心肌組織，加入1:0體積的4﹪的多聚，℃冰箱保存。（1部分組織行快速E（部分組織用TUEL（3）部分組織用免疫組化觀察L1β、L6、L10、TN-α、B在心肌組織的分布，并用H2000晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)值進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。各切片的制作均嚴(yán)格按照指定程序及試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。冰上剪取300mg到500mg的左室心肌液氮凍存（1）ELISA方法測(cè)定兔心肌組織勻IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TnI的含量（2）WesternBlot檢測(cè)NF-κBp65的含量。NF-κBp65的測(cè)定程序嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行?！?00％取ROSC6h后各組心尖組織檢測(cè)在冰上切取各組心尖部1×1×1mm的心肌組織，2.5%鉛，在H-600型透射電鏡（日立公司，）下觀察并照相。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s，多個(gè)樣本均數(shù)之間的比較采用單ANOAmeasurement （HP（MAP（VSP3.1可知，CPR組和LXMAP、LVSP、dp/dtmax、-（P<0.05CPR組（P<0.05；VSP0.5h、2h、4h、6hCPR組（P<0.05；dp/dtmax（P<0.05，-復(fù)蘇后2h、6h兩個(gè)時(shí)相點(diǎn)高于CPR組（P<0.05。CPR組和LX組的心率與復(fù)蘇前比較無(wú)（P>0.05（P>0.053.2各組心肌炎性和凋亡壞死表達(dá)水平比較（x項(xiàng) CPR組 TNF-α(pg/ml)IL-1β(pg/ml)IL-6(pg/ml)IL-10(pg/ml)NF-κBp65(IOD值

β-actin(IOD值)IOD比值

3.57±0.28Sham組比較，＊P＜0.05CPR組比較，P＜0.05Sham組比較，0.013.23.2.1可知，各組間左室切片總面積基本一致，無(wú)顯著性差異＞0.05（P＜0.05（P＜0.053.2.1TTC由表3.23.2.2可知，左室心肌凋亡CPRLX組高于Sham組（P<0.05，同LXCPR組，有顯著性差異（P<0.05（P<0.05（P<0.053.23.2.3.13.2.3.2Sham組在心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性、肌纖維腫脹、中心粒細(xì)胞浸潤(rùn)等方面優(yōu)于PCRLXLX組優(yōu)于PCR組。LX組較Sham組表達(dá)（P＜0.05（P＜0.05（P<0.05（P<0.053.2.3.1各組心肌光鏡結(jié)構(gòu)比較（HEA.Sham組；B.CPR組；C.LX3.2.3.2各組心肌光鏡結(jié)構(gòu)比較（HEA.Sham組；B.CPR組；C.LXA.Sham組；B.CPR組；C.LX NF-κBp65?-action1、2、3Sham組4、5、6CPRNF-κBp657、8、9LXNF-κBp65CPR組減少3.2.4WesternBlotNF-κBp65蛋白的表達(dá)ROSC6h血常規(guī)LX組中性粒細(xì)胞、左室心肌壞死面積、TnI、凋亡指數(shù)、HE染A4能顯著減少中性粒細(xì)胞的活化和浸潤(rùn)，減輕心博驟停肌細(xì)胞的壞死和凋亡。至于其引起的血小板減少，目前尚無(wú)表明是其副作NF-κBA4促進(jìn)心搏驟停后炎癥消退的機(jī)制涉及下NF-κB在心肌細(xì)胞和炎性細(xì)胞的核位移，具體機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。實(shí)驗(yàn)組6pH較對(duì)照組下降，BE較對(duì)照組下降，余指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，推測(cè)可能表明是脂氧素A4的副作用，亦可能是心搏驟停后未對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物糾正酸，具體機(jī)制有待進(jìn)心搏驟停肺復(fù)蘇實(shí)際是機(jī)體經(jīng)歷缺血損傷后再灌注的一個(gè)過(guò)程，不僅沒(méi)有使缺血損傷的組織結(jié)構(gòu)得以修復(fù)，甚至加重了心臟的結(jié)構(gòu)損傷和功能。其涉及到的因素有：鈣超載、氧自由基、中性粒細(xì)胞的激活、心肌能量代謝、血管內(nèi)皮損傷、心肌凋亡等脂氧素A4（Lipoxins，LXA4）是二十烷類中一類花生四烯酸的代謝產(chǎn)物，對(duì)多種TNF-α、IL-1TNF-β1，IL-10的表達(dá)[5,11,12]NF-κBNF-κB的負(fù)性調(diào)節(jié)不僅可以抑制炎性刺激引起的包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和血小板活化因子（PAF）等在