檢驗中級考試復(fù)習(xí)要點

臨床免疫學(xué)：

—:免疫球蛋白

免疫球蛋白的酶解片段

在一定條件下，免疫球蛋白分子肽鏈的某些部分易被蛋白酶水解為不同片

段。木瓜蛋白酶水解IgG的部位是在較鏈區(qū)二硫鍵連接的2條重鏈的近N端，可

將Ig裂解為兩個完全相同的Fab段和一個Fc段.一個Fab片段為單價，可與抗

原結(jié)合但不形成凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)，F(xiàn)c段無抗原結(jié)合活性，是Ig與效應(yīng)分子

或細胞相互作用的部位。胃蛋白酶作用于較鏈區(qū)二硫鍵所連接的兩條重鏈的近C

端，水解Ig后可獲得一個F(ab')2片段和一些小片段pFc'。F(ab')2

是可同時結(jié)合兩個抗原表位，故與抗原結(jié)合可發(fā)生凝集反應(yīng)和沉淀反應(yīng)。pFc'

最終可被降解，無生物學(xué)作用。

免疫球蛋白的類型

類：Ig重鏈C區(qū)所含抗原表位不同，據(jù)此可將重鏈分為Y、a、口、6、

e鏈5種,與此對應(yīng)的Ig分為5類,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。

亞類：同一類免疫球蛋白其重鏈的抗原性及二硫鍵數(shù)目和位置不同，據(jù)此可

將Ig又可分為亞類。IgG有IgGl?IgG4四個亞類;IgA有IgAl和IgA2

兩個亞類；IgM有IgMl和IgM2兩個亞類；IgD和IgE尚未發(fā)現(xiàn)亞類。

型：根據(jù)Ig輕鏈C區(qū)所含抗原表位的不同，可將Ig輕鏈分為2種：X和

K,與此對應(yīng)的免疫球蛋白分為X和K兩型。

亞型：同一型免疫球蛋白中，根據(jù)其輕鏈C區(qū)N端氨基酸排列的差異，又可

分為不同的亞型。

一、IgG

血清含量最高，半衰期最長；功能最多：結(jié)合抗原、激活補體、調(diào)理吞噬

并介導(dǎo)ADCC、通過胎盤、結(jié)合SPA0為再次免疫應(yīng)答的主要抗體：抗感染

的主要抗體(抗菌、抗病毒，抗毒素抗體)，并介導(dǎo)II、III型超敏反應(yīng)

二、IgM

分子量最大，不能通過血管壁，主要存在于血液和粘膜表面。是血管內(nèi)抗感

染的主要抗體。在個體發(fā)育過程和體液免疫應(yīng)答中均是最早合成和分泌的

抗體。臍帶血IgM增高提示胎兒有宮內(nèi)感染；感染過程中血清IgM水平升

高，說明有近期感染。天然的血型抗體和類風(fēng)濕因子亦屬IgMo其激活補

體的能力比IgG強。膜表面IgM是B細胞抗原受體(BCR)的主要成分。只表

達mlgM是未成熟B細胞的標志，記憶B細胞表面的mlgM逐漸消失。

三、IgA

血清型IgA：以單體形式存在。分泌型IgA(sIgA)：由J鏈連接的二聚體

和分泌片組成。合成和分泌的部位在腸道、呼吸道、乳腺、唾液腺和淚腺，

主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中。是參與粘膜局部

免疫的主要抗體。嬰兒可從母親初乳中獲得分泌型IgA,是一種重要的自然

被動免疫。

四、IgD

正常人血清IgD濃度很低，平均約0。03mg/mlo半壽期很短(僅3天)。

血清IgD的確切功能仍不清楚。B細胞表面的mlgD可作為B細胞分化發(fā)育

成熟的標志，未成熟B細胞僅表達mlgM,成熟B細胞可同時表達mlgM和mlg

五、IgE

血清濃度極低，約為5X10-5mg/mloIgE為親細胞抗體，與肥大細胞、嗜

堿性粒細胞上的高親和力FceRI結(jié)合，引起I型超敏反應(yīng)。

含量由高到低:IgGIgMIgAIgDIgE

—：補體

補體結(jié)合試驗中有5種成分參與反應(yīng)，分屬3個系統(tǒng)：

1.反應(yīng)系統(tǒng)；

2.補體系統(tǒng)；

3.指示系統(tǒng)。

其中反應(yīng)系統(tǒng)（抗原與抗體）與指示系統(tǒng)（綿羊紅細胞與溶血素）爭奪補體

系統(tǒng)。

如先加入反應(yīng)系統(tǒng)和補體，給其以優(yōu)先結(jié)合補體的機會，如果反應(yīng)系統(tǒng)中存

在待測的抗體（或抗原），則抗原、抗體發(fā)生反應(yīng)后可結(jié)合補體，再加入指

示系統(tǒng)（SRBL與相應(yīng)溶血素），由于反應(yīng)中無游離的補體而不出現(xiàn)溶血，

為補體結(jié)合試驗陽性。如待測系統(tǒng)中不存在待檢的抗體或（抗原），則在液

體中仍有游離的補體存在，當(dāng)加入指示劑時會出現(xiàn)溶血，為補體結(jié)合試驗陰

性。因此補體結(jié)合試驗可用已知抗原來檢測相應(yīng)抗體，或用已知抗體來檢測

相應(yīng)抗原補體激活過程依據(jù)其起始順序不同，可分為三條途徑：①從

Clq-Clr2-Cls2開始的經(jīng)典途徑，抗原-抗體復(fù)合物為主要激活物；②由病

原微生物等提供接觸表面，從C3開始的旁路途徑，其不依賴于抗體；③通

過甘露聚糖結(jié)合凝集素MBL醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理糖基識別的凝集素激活

途。

補體經(jīng)典激活途徑的活化順序為C142356789

三：免疫的概念

1.免疫防御（immunologicaldefence）指機體排斥外源性抗原異物的能力。

這是動物藉以自凈、不受外來物質(zhì)干擾和保持物種純潔的生理機制。這種

功能一是抗感染，即傳統(tǒng)的免疫概念；二是排斥異種或同種異體的細胞和

器官，這是器官移植需要克服的主要障礙。這種能力低下時機體易出現(xiàn)免

疫缺陷病，而過高時易出現(xiàn)超敏反應(yīng)性組織損傷。

2.免疫自穩(wěn)（immunololgicalhomeostasis）指機體識別和清除自身衰老殘

損的組織、細胞的能力，這是機體藉以維持正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要機制。

這種自身穩(wěn)定功能失調(diào)時易導(dǎo)致某些生理平衡的紊亂或者自身免疫病。

3.免疫監(jiān)視（immunologicalsurveillance）指機體殺傷和清除異常突變細胞

的能力，機體藉以監(jiān)視和抑制惡性促瘤在體內(nèi)生長。一旦功能低下，宿主

易患惡性腫瘤。

四：超敏反應(yīng)

n（溶細胞型或細III（免疫復(fù)合物型或

I（速發(fā)型）IV（遲發(fā)型）

胞毒型）血管炎型）

抗體IgEIgG、IgMIgG、IgM無

補體無來源:考試大網(wǎng)有有無

中性粒、肥大、嗜堿、Thl、CTL、單

細胞肥大、嗜堿（嗜酸）單核細胞

血小板核

過敏性休克（藥物、血清）；輸血反應(yīng)、新生兒Arthus反應(yīng)、血清

代表疾病接觸性皮炎等

皮膚過敏反應(yīng)（尊麻疹、濕溶血癥、自身免疫病、免疫復(fù)合物型腎

疹、血管神經(jīng)性水腫）；呼性溶貧、藥物過敏炎、系統(tǒng)性紅斑狼

吸道過敏反應(yīng)、消化道過敏性血細胞減少癥瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

反應(yīng)

五：MHC與HLA

主要組織相容性復(fù)合體（MHC）是一組存在于各種脊椎動物某對染色體特定

區(qū)域的基因。MHC編碼的基因產(chǎn)物為主要組織相容性抗原（MHA）。

人類的MHC即HLA基因復(fù)合體位于人的第6對染色體的短臂上，是目前已知

最復(fù)雜的人類基因系統(tǒng)。I、II、III三類基因。HLA由400萬堿基組成，傳

統(tǒng)上分為I、II、III三類基因。I類：包括經(jīng)典的HLA-A、B、C,非經(jīng)典的

HLA-E、F、G、H、X等；H類:包括經(jīng)典的HLA-DP、DQ、DR,非典型的HLA-DN、

DO、DM等；HI類：位于HLA-I、II類之間，由一些與補體和某些炎癥因子

編碼相關(guān)的基因組成。截止到1999年，已知的HLA等位基因數(shù)已超過1000

個，目數(shù)量仍在繼續(xù)增加

HLA基因復(fù)合體所表達的基因產(chǎn)物，除直接構(gòu)成同種異體移植排斥反應(yīng)的靶

抗原外，在免疫應(yīng)答的過程中發(fā)揮著重要調(diào)控作用，也反映著自身免疫性疾

病的基因易感性。

MHCI類分子可廣泛地表達于各種組織的有核細胞上，其表達受到多種因素

的調(diào)節(jié)，如IFN-a、8、丫等細胞因子可促進其表達；

MHCIII類分子不是表達于細胞表面的膜分子，而是分布于血清及其他體液中

的可溶性分子

六：移植免疫

排斥反應(yīng)有兩種基本類型：宿主抗移植物反應(yīng)（HVGR）和移植物抗宿主反應(yīng)

（GVHR）,臨床上多見是前者；根據(jù)發(fā)生的機制、時間、速度和臨床表現(xiàn)，

HVGR又可分為3種類型：超急排斥反應(yīng)；急性排斥反應(yīng)；慢性排斥反應(yīng)。

超急性排斥反應(yīng)

超急排斥反應(yīng)發(fā)生在移植物與受者血管接通的數(shù)分鐘到數(shù)小時內(nèi)，出現(xiàn)壞死

性血管炎表現(xiàn)，移植物功能喪失，患者有全身癥狀。發(fā)生的基本原因是受者體內(nèi)

存有抗供者移植物的預(yù)存抗體，與抗原結(jié)合，激活補體和凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致血管內(nèi)

凝血。常見于下列情況：①ABO血型不符；②由于多次妊娠或反復(fù)輸血等使受者

體內(nèi)存在抗HLA抗體;③移植物保存或處理不當(dāng)?shù)绕渌颉３迸懦獍l(fā)生迅速，

反應(yīng)強烈，不可逆轉(zhuǎn)；需立即切除移植物，否則會導(dǎo)致受者死亡。如果事先認真

進行ABO基至Rh血型檢查和交叉配合試驗，多可避免這種現(xiàn)象的發(fā)生。

急性排斥反應(yīng)

急性排斥反應(yīng)是排斥反應(yīng)最常見的一種類型，多發(fā)生在移植后數(shù)周到1年

內(nèi)，發(fā)生迅速，臨床表現(xiàn)多有發(fā)熱、移植部位脹痛和移植器官功能減退等；病理

特點是移植物實質(zhì)和小血管壁上有以單個核細胞為主的細胞浸潤、間質(zhì)水腫與血

管損害，后期在大動脈壁上有急性纖維素樣炎癥。急性排斥出現(xiàn)得早晚和反應(yīng)的

輕重與供——受者HLA相容程度有直接的關(guān)系，相容性高則反應(yīng)發(fā)生晚、癥狀輕、

有些可遲至移植后2年才出現(xiàn)。急性排斥反應(yīng)經(jīng)過及時恰當(dāng)?shù)拿庖咭种浦委煻嗫?/p>

緩解。

急性排斥反應(yīng)又分為兩種。急性體液排斥反應(yīng)：抗體激活補體，并有CD4+T

細胞參與，導(dǎo)致急性血管炎。急性細胞排斥反應(yīng)：CD8'CTL細胞的細胞毒作用、

CD4T和巨噬細胞的作用，導(dǎo)致急性間質(zhì)炎。

慢性排斥反應(yīng)

慢性排斥反應(yīng)屬于遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，發(fā)生于移植后數(shù)月甚至數(shù)年之后，表現(xiàn)

為進行性移植器官的功能減退直至喪失；病理特點是血管壁細胞浸潤、間質(zhì)纖維

化和瘢痕形成，有時伴有血管硬化性改變。其機制可能為急性排斥細胞壞死的延

續(xù)；炎性細胞相關(guān)的慢性炎癥；抗體和細胞介導(dǎo)的內(nèi)皮損傷；管壁增厚和間質(zhì)纖

維化。本型反應(yīng)雖然進展緩慢，但用免疫抑制治療無明顯的臨床效果。

以上屬宿主抗移植物反應(yīng)(HVGR)o移植物抗宿主反應(yīng)(GVHR)多發(fā)生于同

種骨髓移植者，也可見于脾、胸腺和小腸移植中；此時患者的免疫狀態(tài)極度低下，

而移植物中豐富的免疫活性細胞則將受者細胞視為非己抗原，對其發(fā)生免疫應(yīng)

答；移植物的T細胞在受者淋巴組織中增殖并產(chǎn)生一系列損傷性效應(yīng)。GVHR分

為急性與慢性兩型。急性型多見，多發(fā)生于移植后3個月以內(nèi)，患者出現(xiàn)肝脾腫

大、高熱、皮疹和腹瀉等癥狀；雖是可逆性變化，但死亡率較高；慢性型由急性

型轉(zhuǎn)來，患者呈現(xiàn)嚴重的免疫失調(diào)，表現(xiàn)為全身消瘦，多個器官損害，以皮膚和

黏膜變化最突出，病人往往因嚴重感染或惡病質(zhì)而死亡。

移植排斥反應(yīng)的機制和過程與一般免疫應(yīng)答相似，只是參與細胞是一種特殊

類型的Tc細胞，稱為同種反應(yīng)型Tc細胞。這種Tc細胞能識別并殺傷遺傳學(xué)上

無關(guān)供體表達外來抗原分子的移植物中的靶細胞，從而導(dǎo)致組織不相容移植物的

排斥反應(yīng)。造成排斥反應(yīng)損傷效應(yīng)的機制除Tc細胞介導(dǎo)的細胞毒作用外，尚有

NK細胞介導(dǎo)的直接細胞毒作用和ADCC、抗體介導(dǎo)的補體依賴性細胞毒作用和炎

癥效應(yīng)以及細胞因子介導(dǎo)的系列炎癥效應(yīng)等。在不同情況下，各種機制分別參與

的程度有所側(cè)重，所以不同類型排斥反應(yīng)的表現(xiàn)也不盡相同。

七：自身抗體的檢測

常見ANA熒光圖形及臨床意義如下：

1.均質(zhì)型：多是由抗DNP抗體所引起。也可由核小體抗體和抗雙鏈DNA抗體

引起。主要見于SLE,藥物性狼瘡。

2.斑點型：是由抗ENA抗體所引起。主要見于SLE、MCTD、PSS、SS等。高

滴度的斑點型常見于MCTDo

3.周邊型(又稱核膜型)：主要由抗dsDNA的抗體所引起。主要見于SLE。

特別是活動期患者。

4.核仁型：主要見于硬皮病。相關(guān)抗體是抗核仁特異的低分子量RNA等。

5.著絲點型：主要見于局限性硬皮病及CREST綜合征。主要的靶抗原是著絲

點B抗原。

抗ENA抗體譜的臨床意義

1.抗Sm抗體

抗Sm抗體僅發(fā)現(xiàn)于SLE患者中，是SLE的血清標志抗體，已列入SLE的診

斷標

準。約30%?40%的SLE患者抗Sm抗體陽性，此抗體陰性不能排除SLE的診

斷。相對抗dsDNA抗體而言，抗Sm抗體水平不與SLE疾病的活動性相關(guān)，

亦不與SLE的任何臨床表現(xiàn)相關(guān)，治療后的SLE患者也可存在抗Sm抗體陽

性?？筍m抗體的檢測對早期、不典型的SLE或治療后的回顧性診斷具有很

大幫助。

2.抗核RNP抗體

抗核RNP（nuclearRNP,nRNP）抗體是診斷MCTD的重要血清學(xué)依據(jù)，列入

MCTD的診斷標準。因其抗原為含有U1RNA的核蛋白復(fù)合物，故而稱為U1RNP.

其在MCTD患者的陽性檢出率可高達95%o無論在疾病的活動期或是緩解期，

高滴度的抗RNP抗體均可持續(xù)存在。

抗nRNP抗體無疾病特異性，在其他自身免疫性疾病中陽性檢出率如下：

SLE30%?40%,SS20%,進行性系統(tǒng)性硬化（PSS）10%?15%,皮肌炎（PM）

/多發(fā)性肌炎（DM）10%,偶爾也可見于RA和藥物誘發(fā)的狼瘡，不過滴度

均較MCTD患者低。

由于Sm和RNP是同一分子復(fù)合物（RNA一蛋白質(zhì)顆粒）中的不同抗原位點，

兩種抗原具有相關(guān)性，故抗Sm抗體陽性常伴有抗RNP抗體陽性，單一的抗

Sm抗體或抗RNP抗體陽性較少見。

3.抗SSA/Ro抗體和抗SSB/La抗體

抗SSA/Bo抗體和抗SSB/La抗體是SS患者最常見的自身抗體。其陽性檢

出率分別是70%?8096和40%,而抗SSB/La抗體的特異性高于抗SSA/Ro

抗體，可達50%X60%。該兩個抗體的同時檢測可提高對SS的診斷率。

部分SLE患者也有抗SSA/Ro抗體和抗SSB/La抗體的檢出，其陽性率分別

為35%和15%左右。約60%的亞急性紅斑狼瘡（SCLE）患者，補體缺陷的SLE

患者和新生兒狼瘡患者可出現(xiàn)抗SSA/Ro抗體陽性。抗SSA抗體可通過胎盤

進入胎兒，引起新生兒狼瘡綜合征，出現(xiàn)典型的SLE皮損和不完全性心臟傳

導(dǎo)阻滯。另外，單獨出現(xiàn)抗SSA/Ro抗體陽性的SLE患者，其腎炎或血管炎

的發(fā)生率較單獨出現(xiàn)抗SSB/La抗體陽性的SLE患者高。因抗SSA/Ro抗體

與SSA/Ro抗原形成的免疫復(fù)合物，更易沉積于腎臟和血管壁，造成腎臟損

傷及血管炎。

4.抗Jo—1抗體

該抗體最常見于多發(fā)性肌炎（polymyositis,PM）,故又稱為PM—1抗體。

具有抗Jo—1抗體特性的是分子量110kD和戴）80kD的多肽（核仁蛋白）。

抗Jo—l抗體在PM的陽性檢出率可達40%~50%,在PM/DM患者的陽性檢

出率為25%,單獨皮肌炎中的檢出率不足10%,在其他自身免疫性疾病中抗

Jo—1抗體為陰性，因而抗Jo—l抗體對診斷PM具有特異性。PM與硬皮病

重疊的患者，抗Jo-1抗體的陽性率可高達85%,PSS/PM中為25%,PM

伴肺間質(zhì)纖維化者抗Jo-l抗體陽性率可達60%?

5.抗Scl—70抗體

抗Scl—70抗體幾乎僅在進行性系統(tǒng)性硬皮病（PSS）患者中檢出，抗體相

對應(yīng)的抗原分子量為70kD.故該抗體是PSS的特征抗體。在系統(tǒng)性硬化癥的

陽性檢出率為20%?40%,在PSS的陽性檢出率為40%?60%。在其他自身免

疫性疾病患者中極少有陽性檢出，正常人均為陰性。

八：酶免疫技術(shù)

酷免疫技術(shù)的分類

酶免疫測定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標記物而

分為均相和異相兩種類型，實際上所有的標記免疫測定均可分成這兩類。以

標記抗體檢測標本中的抗原為例，按照簡單的形式是在試劑抗體過量的情況

下進行，其反應(yīng)式如下：

Ab*+Ag---Ab*Ag+Ab*

Ab*Ag代表結(jié)合的標記物，Ab*為游離的標記物。如在抗原反應(yīng)后，先把

Ab*Ag與Ab*分離；然后測定Ab*Ag或Ab*中的標記物的量，從而推算出標

本中的抗原量，這種方法稱為異相法。如在抗原抗體反應(yīng)后Ab*Ag中的標記

物*失去其特性，例如酶失去其活力，熒光物質(zhì)不顯熒光，則不需要進行

Ab*Ag與Ab*的分離，可以直接測定游離的Ab*量，從而推算出標本中的

Ag含量，這種方法稱為均相法。

在異相法中，抗原和抗體如在液體中反應(yīng)，分離游離和結(jié)合的標記物的方法

有許多種。與放射免疫測定相類似的液相異相酶免疫技測定，在某些激素等

定量測定中也有應(yīng)用。但常用的酶免疫測定法為固相酶免疫測定。其特點是

將抗原或抗體制成固相制劑，這樣在與標本中抗體或抗原反應(yīng)后，只需經(jīng)過

固相的洗滌，就可以達到抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)的分離，大大簡化了操

作步驟。這種被稱為EL1SA的檢測技術(shù)成為目前臨床檢驗中應(yīng)用較廣的免

疫測定方法。

方法類型和操作步驟

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要

的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標記的抗原或抗體，③酶作用的底

物，根據(jù)試劑的來源和標本的性狀以及檢測的條件，可設(shè)計出各種不同類型

的檢測方法。

（一）雙抗體夾心法：

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：

（1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗

體及雜質(zhì)。

（2）加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標本中的抗原與

同相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合

的物質(zhì)。

（3）加酶標抗體：使同相免疫復(fù)合物上的抗原與腋標抗體結(jié)合。徹底洗滌

未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的

LF相關(guān)o

（4）加晟物：酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行該抗原

的定性或定量。

根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結(jié)合物，

即可雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

（二）雙位點一步法：

在雙抗體夾心法測定抗原時，如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的

單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶

標抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點一步法不但簡化了操作，縮短了反

應(yīng)時間，如果使用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提

高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

在…步法測定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后滯現(xiàn)象。

當(dāng)標本中待測抗原濃度相當(dāng)高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)

合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實際含量。鉤狀效應(yīng)嚴重時甚

至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

（三）間接法測抗體：

間接法是檢測抗體時最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗-抗體檢測已

與固相結(jié)合的受檢抗體。故稱為間接法。操作步驟如下：

（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗

原及雜質(zhì)。

（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體

復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及

血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。

（3）加酶標抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標

記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如：欲

測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。

（4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。本法只要更換不同

的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。

（四）競爭法：

競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原

和醐標抗原競爭與同相抗體結(jié)合，因此結(jié)合于固相的酶標抗原量與受檢抗

原的量呈反比。操作步驟如下：

（1）將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌。

（2）待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體

反應(yīng)。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如

受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合，競

爭性地占去了酶標抗原與固相載體結(jié)合的機會，使酶標抗原與固相載體

的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫后，酶標抗原與同相抗體

的結(jié)合可達最充分的量。洗滌。

（3）加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標抗原最多，故顏色最深，參考

管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管

顏色越淡，表于標本中抗原含量越多。

（五）捕獲法測IgM抗體

血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG伺時存在，后者會干擾

IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法。先將所有血清IgM（包括

異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在除去IgG后再測定特異性IgMo

操作步驟如下：

（1）將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgMo

（2）加入稀釋的血清標本：保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。

洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分。

（3）加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。

（4）加入針對特異性的酶標抗體，使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合。

（5）加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存

在，為陽性反應(yīng)。

（六）親和素和生物素的EL1SA：親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。

分子量60kD,每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結(jié)合。

現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素（strepavidin）。生物素

（biotin）又稱維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制

成的衍生物，生物素一羥基玻璃亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide,

BNHS）可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。

親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特異性強，親和力大，兩者

一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結(jié)合位置，

可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親

和素和生物素與ELIS偶聯(lián)起來，就可大大提高檢測的靈敏度。

早早孕膠體金標試條檢測測HCG原理

本檢測試條以雙抗體夾心法為基礎(chǔ)，采用免疫層析金標記技術(shù)，快速檢測尿

液中的HCG。兩個抗人B-hCG單克隆抗體，?個抗體吸附于硝酸纖維素薄

膜(NC)上，另一個抗體結(jié)合于金溶膠顆粒表面。尿液中hCG先與NC膜上

的抗體結(jié)合，然后再與金標單抗溶液反應(yīng)，于是形成抗體-hCG-金標抗體的

夾心式復(fù)合物，顯現(xiàn)出紅色的沉淀線。多余的金標記抗HCG移行至C區(qū)時被

抗小鼠IgG抗體捕獲，而顯示出紅色對照線條

I-：生物素-親和素系統(tǒng)基本類型及原理：

基本類型有兩種，一類以游離親和素為中間物，分別連接包含生物素大分子

的待檢反應(yīng)體系和標記生物素，稱為BAB法；后來又在此基礎(chǔ)上發(fā)展了親和

素-生物素化酶復(fù)合物技術(shù)(ABC)。另一類是直接用標記親和素連接生物素

化大分子反應(yīng)體系進行檢測的BA法，或稱標記親和素-生物素法(LAB)。

此外，依據(jù)待檢反應(yīng)體系中所用的是生物素化第一抗體或生物素化第二抗

體，又分為醫(yī)I學(xué)教育網(wǎng)搜集整理直接法BAS和間接法BASo

臨床生物化學(xué)檢驗：

一：血漿脂蛋白：

1：分類：電泳法a,pre-B,B,CM(幾乎停留在原點)

正極____________?負極(原點)

超速離心法：CM,VLDL(pre-P),LDLIDL(P),HDL(a)

2：人血漿脂蛋白的特征

VariablCMVLDLIDLLDLHDLLp(a)

e

密度<0.950.95?1.0061.019?1.063?1.040?

(g/ml)1.0061.0191.0631.2101.130

原點前P廠和前B之a(chǎn)-前廠

電泳位置

間

分子量0.4—305-10X3.9~4.82.75X1.8~3.62.9~3.7

(daitons)X109106X106106X103X106

顆粒直徑>7025?7022-2419-234~1025?30

(nm)

脂質(zhì)：蛋白99:199:1085:1580:2050:5075:25?

質(zhì)比64:36

外源性內(nèi)源性內(nèi)源性TG、C'l:PLCE、PL

主要脂質(zhì)

TGTGCE

主要栽脂AIB100B100B100AI(a)

蛋白B48CIEAllB100

CICIID

CIIcm

cmE

小腸粘肝細胞血漿血漿肝、腸、肝細胞

合成部位

膜細胞血漿

轉(zhuǎn)運外轉(zhuǎn)運內(nèi)轉(zhuǎn)運內(nèi)源轉(zhuǎn)運內(nèi)源逆向轉(zhuǎn)運未知

功能

源性TG源性TG性TG、CE性CECE

3：

人高脂蛋白血癥分型及其特征

n型

I型HI型W型V型

Ila11b

增加的CMftLDLtLDLtIDLtVLDLtCMt

脂蛋白VLDLtVLDLt

血漿脂質(zhì)TC正?；騎CtttTCttTCttTC正?；騎C正常或t

tTG正常TGtfTGftTGttt

Ch/TGTGttt>1.6>1.0TGtt<0.6

<0.2>0.6~1.6

病因LPL缺失LDL受體不明ApoE異不明（內(nèi)因LPL缺失（雜

ApoCII缺失異常常性高脂血合子，部

（外因性高(E2/2)癥）分）（外因性和

脂血癥）內(nèi)因性混合型

高脂血癥）

臨床所見

發(fā)病時期兒童期兒童期?成人成人成人兒童期?成人

癥狀肝、脾大、肝、脾大、角膜環(huán)肝、脾大肥胖、腹痛、肥胖、肝、脾

腹痛、胰腺（少見）、脾大大、腹痛、胰

炎、網(wǎng)膜止角膜環(huán)腺炎、網(wǎng)膜止

血癥血癥

冠狀動脈發(fā)病率最高發(fā)病率中等發(fā)病率

疾患稀少高比較稀少

合并黃色瘤黃色斑塊、結(jié)節(jié)狀、

丘疹腱黃色瘤手掌條發(fā)疹

狀、結(jié)節(jié)

糖耐量正常狀發(fā)疹異常（多見）

正常異常異常（多見）

高尿酸血癥無（多見）多見

無少見多見

遺傳隱性遺傳顯性遺傳隱性遺顯性遺傳不明

傳

出現(xiàn)頻率稀少多見少見最多見稀少

混E

血清靜置試驗上層混濁透明少有混濁混濁上層乳濁

偶

下層透明下層混濁

濁

4：人血漿主要載脂蛋白的結(jié)構(gòu)、功能、及含量

分子量

載脂蛋氨基酸血漿濃度

(dalton脂蛋白載體功能合成部位

白殘基數(shù)

s)(g/D

AI28300243HDL,CM穩(wěn)定HDL結(jié)構(gòu)，LCAT輔因

1.00^1.6

子，肝、腸

0

識別HDL受體

All17500*77X2HDL激活HTGL,抑制LCAT,

0.30~0.4

參與識肝、腸

0

別HDL受體

AIV46000371CM,HDL參與脂肪吸收，膽固醇酯

0.10~0.1

逆向轉(zhuǎn)腸

8

運，活化LCAT

B1005127234536VLDL,IDL,轉(zhuǎn)運TG、TC,識別LDL受0.60^1.1

肝

LDL體2

B482640002152CM促進腸CM形成，轉(zhuǎn)運外

腸

源TG

CI650057CM,VLDL,HDL0.03~0.0

激活LCAT(?)肝

7

CII880079CM,VLDL,HDL0.03~0.0

LPL輔因子肝

5

cnio~2890079CM,VLDL,HDL0.08~0.1

抑制ApoCiI激活LPL肝

2

D22000169HDL0.02~0.0

轉(zhuǎn)運膽固醇酯肝

4

E34145299CM,VLDL,HDL促進CM殘粒和IDL的攝0.03~0.0

肝

取6

H36281326CM,VLDL,IDL激活LPL,抑制內(nèi)源凝血

旁路激活?

HDL

J70000127IIDL,VHDL溶解和轉(zhuǎn)運脂質(zhì)肝

(a)1870004529Lp(a)抑制纖維蛋白溶解酶活UI-0~0.3

性

662000

-：糖代謝：

1：血糖的來源和去路

人體血糖的水平受到什么因素的影響呢？從上游的來源到下游的去路，我們

分析一下。

血液中的葡萄糖稱為血糖?？崭箷r血糖濃度為3.61~6.llmmol/Lo

血糖恒定的主要意義是保證中樞神經(jīng)的供能。腦細胞所需的能量幾乎完全直

接來自血糖。

血糖濃度之所以能維持相對恒定，是由于其來源與去路能保持動態(tài)平衡的結(jié)

果。

1.血糖來源

(1)糖類消化吸收：食物中的糖類消化吸收入血，這是血糖最主要的來源。

(2)肝糖原分解：短期饑餓后，肝中儲存的糖原分解成葡萄糖進入血液，

(3)糖異生作用：在較長時間饑餓后，氨基酸、甘油等非糖物質(zhì)在肝內(nèi)合

成葡萄糖。

(4)其他單糖的轉(zhuǎn)化。

2.血糖去路

(1)氧化分解：葡萄糖在組織細胞中通過有氧氧化和無氧酵解產(chǎn)生ATP,

為細胞代謝供給能量，此為血糖的主要去路。

(2)合成糖原：進食后，肝和肌肉等組織將葡萄糖合成糖原以儲存。

(3)轉(zhuǎn)化成非糖物質(zhì)：轉(zhuǎn)化為甘油、脂肪酸以合成脂肪；轉(zhuǎn)化為氨基酸以

合成蛋白質(zhì)。

(4)轉(zhuǎn)變成其他糖或糖衍生物，如核糖、脫氧核糖、氨基多糖等。

(5)血糖濃度高于腎閾(8.9~9.9mmol/L,160~180mg/dl)時可隨尿排

出一部分。

2：糖尿病的分型

糖尿病分1型糖尿病和2型糖尿病。在糖尿病患者中，2型糖尿病所占的

比例約為95%。

其中1型糖尿病多發(fā)生于青少年，因胰島素分泌缺乏，必須依賴外源性胰島

素補充以維持生命；

2型糖尿病多見于中、老年人，其胰島素的分泌量并不低，甚至還偏高，臨

床表現(xiàn)為機體對胰島素不夠敏感，即胰島素抵抗。

I型特點：常見于青少年；起病較急；血漿胰島素及C肽含量低，糖耐量曲線呈

低平狀態(tài)；8細胞的自身免疫性損傷是重要的發(fā)病機制，多可檢出自身抗體;

治療依賴胰島素為主；易發(fā)生酮癥酸中毒；遺傳因素在發(fā)病中起重要作用，與

HLA相關(guān)

H型特點：典型病例常見于肥胖的中老年成人；起病較慢；血漿中胰島素含量絕

對值并不降低，但在糖刺激后呈延遲釋放；ICA等自身抗體呈陰性；單用口服

降糖藥一般可以控制血糖；發(fā)生酮癥酸中毒的比例不如I型；有遺傳傾向，但

與HLA基因型無關(guān)

尿拄出

尿中極融

3：OGTT試驗

葡萄糖耐量試驗的方法

1.做OGTT試驗前3天,停止胰島素治療，可正常飲食，每天飲食中碳水化

合物含量不應(yīng)低于150克（但要控制在250-300克范圍），并且維持正

?；顒印?/p>

2.次日晨空腹抽取血液2ml,抗凝，測定血漿葡萄糖，此為空腹血糖。

3.在5分鐘之內(nèi)飲入300毫升含75克葡萄糖的糖水（對于兒童則中按每

千克體重給L75克葡萄糖，計算口服葡萄糖用量，直至達到75克葡萄糖

時止），喝糖水后30分鐘、1小時、2小時分別靜脈取血一次，并留取尿

液做尿糖定性試驗。整個試驗中不可吸煙、喝咖啡、喝茶或進食，應(yīng)安靜

地坐在椅子上。

4.測定血糖濃度，并繪制耐糖曲線：將各次所測得的血糖濃度與對應(yīng)的時

間作圖，繪制糖耐量曲線。

正常參考值：見下表。

不同年齡段糖耐量結(jié)果的血糖值上限（mmol/L）

年齡

時限（分）

40歲以下40?49歲50?59歲60?69歲70歲以上

空腹6.96.96.96.96.9

3011.111.111.411.5511.9

6010.5410.5411.111.5512.2

1208.338.338.68.889.16

1806.96.96.96.96.9

結(jié)果判斷

服葡萄糖后各時限血糖或空腹血糖、高峰值與2小時血糖值大于相應(yīng)年齡的

正常上限者可診斷為糖尿病。如一點或一點以上血糖值超過正常上限，而未達到

糖尿病標準，則為糖耐量異常。各時限血糖均在正常上限內(nèi)，屬正常。

臨床意義

1.OGTT對隱性糖尿病診斷有幫助，在實際應(yīng)用中亦可簡化OGTT,即只取空

腹和服糖后2小時標本測定血糖值，一般認為2小時值是關(guān)鍵性的。

2.內(nèi)分泌疾病，如腎上腺皮質(zhì)機能亢進疾?。ㄈ缈屡d綜合征），有70獷80%

病人有糖耐量降低；反之腎上腺皮質(zhì)功能減退，垂體前葉功能不全等，

都可呈現(xiàn)低平糖耐量曲線。

3.慢性胰腺炎患者常呈現(xiàn)糖尿病曲線。

4.肝臟疾病，慢性肝炎患者可出現(xiàn)糖耐量降低。

5.心肌梗塞的急性期可能出現(xiàn)糖耐量降低，這可能與病人處于應(yīng)激狀態(tài)有

關(guān)。

6.肥胖癥可出現(xiàn)糖耐量曲線異常，由于醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)脂肪細胞對胰島

素不敏感，糖耐量?？山档汀渭冃苑逝痔悄土恳嗫烧；虺实推角€。

7.腎性糖尿：由于腎小管重吸收機能減低，腎糖閾下降，以致腎小球濾液

中正常濃度的葡萄糖也不能完全重吸收，此時出現(xiàn)的糖尿，稱為腎性糖

尿。

8.急性肝炎患者服用葡萄糖后在0.5?1.5小時之間血糖急劇增高，可超過

正常。

四：三竣酸循環(huán)

三竣酸循環(huán)-基本介紹

真核生物的線粒體和原核生物的

細胞質(zhì)是三竣酸循環(huán)的場所。它

是呼吸作用過程中的一步，但在

需氧型生物中，它先于呼吸鏈發(fā)

生。厭氧型生物則首先遵循同樣

的途徑分解高能有機化合物，例

如糖酵解，但之后并不進行三竣

酸循環(huán)，而是進行不需要氧氣參

與的發(fā)酵過程。

三殘酸循環(huán)-生理意義

1、三竣酸循環(huán)是機體獲取能量的

主要方式。1個分子葡萄糖經(jīng)無氧

三較酸循環(huán)

酵解僅凈生成2個分子ATP,崎

氧氧化可凈生成38個ATP,其中

三竣酸循環(huán)生成24個