薄層色譜法分析（分析化學課件）

定性分析0102定量分析薄層色譜法的操作步驟薄層色譜法是如何進行分離的嗎？點樣展開劑薄層色譜薄層色譜法的操作步驟吸附系數(shù)大的移動慢，吸附系數(shù)小的移動快，從而達到分離的目的。薄層色譜法的操作步驟在薄層板上的位置比移值（Rf）相對比移值（Rr）你們還記得如何計算比移植和相對比嗎？薄層色譜法的操作步驟比移值（Rf）相對比移值（Rr）是指在一定條件下，被測組分的移動距離與流動相遷移的距離之比。指在一定條件下，被測組分的移動距離與參考物遷移的距離之比。薄層色譜法的操作步驟在一定的條件下，不同組分的吸附能力是不同的，因此不同組分的比移植或相對比移植也是不同的定值，因此可利用組分的Rf或Rr值進行定性分析。薄層色譜法的操作步驟定性分析01薄層色譜法中，在一定的條件下，由于組分的Rf或Rr值是一定值，因此可利用組分的Rf或Rr值進行定性分析。薄層色譜法的操作步驟吸附劑種類活度顆粒大小展開劑純度和極性薄層厚度展開方式點樣量展開槽中的預飽和狀態(tài)溫濕度不同的條件下，同一組分的Rf或Rr值是不同。影響Rf值的因素薄層色譜法的操作步驟1、利用Rf值分析：試樣對照品同一薄層色譜板上展開試樣與對照品的Rf值及其斑點顏色比較進行定性薄層色譜法的操作步驟對照品Rf值試樣與對照品為同一物質(zhì)2、利用Rr值分析：利用Rr值進行定性更為可靠實際工作中與文獻收載的Rr值比較進行定性與對照品的Rr值比較進行定性。薄層色譜法的操作步驟肼是一種誘變劑和致癌物質(zhì)，中國藥典對異煙肼原料和注射用異煙肼中游離肼的檢查均采用薄層色譜法。此注射液樣品中含有游離肼致癌物質(zhì)例一、異煙肼中游離肼的檢查：游離肼對照物純異煙肼對照物某異煙肼注射液樣品薄層色譜法的操作步驟1是丹皮酚2～5是不同廠家的六味地黃丸例二、六味地黃丸主要成分丹皮酚的檢測薄層色譜法的操作步驟能否通過薄層色譜來檢測各廠商生產(chǎn)的六味地黃丸中丹皮酚的含量呢？02定量分析1、目視比較法系列溶液試樣溶液同一薄層板上注：本法適用于近似含量的測定，準確度不高。誤差在±10%展開后觀察斑點顏色深淺和大小薄層色譜法的操作步驟1是樣品，2-5是純組分對照品，從圖中我們可以觀察到樣品產(chǎn)生的斑點大小在對照品4和5產(chǎn)生的斑點大小之間，因此樣品中主要成分的含量介于對照品4和5之間。薄層色譜法的操作步驟2、斑點洗脫法：對照品制成溶液點于薄板兩側(cè)樣品制成一定濃度溶液點于薄板中間展開用適當?shù)娜軇⒃嚇咏M分完全洗脫下來，再用分光光度法或其它分析方法進行定量。對對照品顯色，以此為依據(jù)刮下樣品中待測組分所在斑點位置薄層色譜法的操作步驟3、薄層掃描法：用一束長寬可以調(diào)節(jié)的一定波長、一定強度的光照射到薄層斑點上進行整個斑點的掃描，用儀器測量通過斑點或被斑點反射的光束強度的變化，由于光束強度的變化與斑點的大小和顏色深淺有關從而達到定量的目的。

靈敏度和準確度都很高薄層色譜法的操作步驟薄層色譜定性與定量分析方法根據(jù)被分離組分的極性選擇吸附劑：一、固定相（吸附劑）的選擇1.選擇原則被分離組分的極性強——弱極性吸附劑；被分離組分的極性弱——強極性吸附劑；薄層色譜固定相和流動相選擇一、吸附劑的選擇2.吸附劑顆粒的大小與分離效能的關系顆粒大，展開速度快，分離效果差，斑點較寬；顆粒小，展開速度慢，分離效果好但產(chǎn)生拖尾。薄層色譜固定相和流動相選擇常用的固定相吸附劑主要有：硅膠、氧化鋁、聚酰胺、硅藻土及纖維素等。3.對吸附劑顆粒的要求：大小適宜，顆粒均勻。4.常用的固定相吸附劑薄層色譜固定相和流動相選擇流動相洗脫的過程實質(zhì)：就是流動相分子與被分離的組分分子競爭占據(jù)吸附劑表面吸附活性中心的過程。流動相的要求純度高穩(wěn)定對樣品溶解度大粘度小二、流動相（展開劑）的選擇薄層色譜固定相和流動相選擇1.流動相展開劑的選擇原則與柱色譜中的洗脫劑的選擇一樣，根據(jù)被分離組分的極性，遵循“相似相溶”原則選擇展開劑。被分離組分的極性強——極性大的展開劑；

被分離組分的極性弱——極性小的展開劑；薄層色譜固定相和流動相選擇常用溶劑的極性順序為：常用吸附劑的極性順序為：增大增大流動相展開劑的選擇必須充分考慮試樣的極性。薄層色譜固定相和流動相選擇＜二甲胺＜酯類＜酮類＜醛類＜硫醇＜胺類＜醚＜硝基化合物烷烴＜烯烴＜酰胺類＜醇類＜酚類＜羧酸類小極性大多糖、蛋白質(zhì)等大分子、生物堿鹽苷類（皂苷、黃酮苷、蒽醌苷）黃酮、蒽醌等苷元、有機酸香豆素、萜類、揮發(fā)油等親脂性成分極性漸小薄層色譜固定相和流動相選擇2.流動相展開劑的選擇要求薄層色譜分離中一般要求各斑點的Rf值在0.2～0.8之間，Rf值之間應相差0.05以上.3.流動相展開劑的選擇方法如果單一展開劑分離效果不好，可用兩種或兩種以上的單一溶劑按照一定比例混合而成的溶劑展開,可以達到較好的分離效果.薄層色譜固定相和流動相選擇被測組分、吸附劑和展開劑的選擇原則組分極性吸附劑活度流動相極性大小大小大小薄層色譜固定相和流動相選擇

01薄層色譜法概述02分離原理03固定相和流動相的選擇01章節(jié)PART薄層色譜法概述吸附薄層色譜分離原理固定相涂鋪或結(jié)合在平面載體上，組分的分離在平面上進行，這樣的液相色譜法被稱為平面色譜法。那么薄層色譜法是一種怎樣的分離方法呢？和紙色譜法（PC）薄層色譜法（TLC）吸附薄層色譜分離原理快速展開一次只需幾分鐘到十幾分鐘。靈敏只需幾微克至幾十微克的物質(zhì)就能檢出。高選擇性能分離結(jié)構(gòu)相似的同系物、異構(gòu)體。操作簡便所用儀器簡單，一般實驗室均能開展工作。顯色簡便展開后可選用不同的顯色劑噴霧顯色，有助于定性鑒別。02章節(jié)PART分離原理吸附薄層色譜分離原理分離過程：制板→點樣→展開→顯色→定性定量分析固定相--吸附劑薄層色譜的固定相所用的吸附劑流動相---展開劑薄板的底端浸入到適當?shù)牧鲃酉嗳軇┱归_（分離）點樣展開劑薄層色譜吸附薄層色譜分離原理吸附薄層色譜分離原理分離原理：展開劑在毛細管的浸潤作用下，帶著各組分沿著薄板向前移動。當各組分通過吸附劑時，被測組分在吸附劑和展開劑之間不斷發(fā)生吸附——解吸附，不同組分的吸附能力和解吸附能力不同，因此產(chǎn)生差速遷移。吸附系數(shù)大的移動慢，吸附系數(shù)小的移動快，從而達到分離的目的。吸附薄層色譜分離原理比移值（Rf）原點到斑點中心的距離原點到溶劑前沿的距離Rfl0l1Rfl0l20≤Rf≤1Rf可用范圍：0.2-0.8Rf最佳范圍：0.3-0.5在色譜條件確定的情況下，K大Rf小，K小Rf大吸附薄層色譜分離原理0102030405分離物質(zhì)性質(zhì)Rf影響因素薄層板性質(zhì)展開劑極性溫度展開劑蒸氣飽和程度吸附薄層色譜分離原理相對比移值Rr參考物與被測組分在完全相同條件下展開，可以消除系統(tǒng)誤差，大大提高重現(xiàn)性和可靠性；原點到斑點中心的距離原點到溶劑前沿的距離RrRf（參）Rf（組）參考物可以是后加入純物質(zhì)，也可是樣品中已知組分；相對比移值Rr可以大于或小于1；Rr的重現(xiàn)性和可比性比Rf好。03章節(jié)PART固定相和流動相的選擇吸附薄層色譜分離原理但薄層色譜所用的固定相顆粒更細，粒度更均勻，所以分離效能更高。吸附薄層色譜法的固定相又稱為吸附劑，薄層色譜的固定相與吸附柱色譜的固定相類似分離極性較強的化合物時，選用活性較小的吸附劑。分離弱極性化合物，選擇吸附活性較大的吸附劑；吸附薄層色譜分離原理硅膠G硅膠+煅石膏硅膠H硅膠（不含黏合劑）硅膠HF254硅膠H+熒光物質(zhì)硅膠GF254硅膠G+熒光物質(zhì)薄層色譜法常用的吸附劑有：硅膠、氧化鋁、聚酰胺等硅膠：40μm,200目左右吸附薄層色譜分