病原生物與免疫學(xué)實驗教材 實驗五教學(xué)課件

實驗五

腸道桿菌實驗內(nèi)容操作肥達試驗示教糞便腸道致病菌的分離和鑒定實驗?zāi)康氖煜し蔬_試驗的操作方法、結(jié)果觀察及分析熟悉腸道桿菌在選擇鑒別培養(yǎng)基上的生長特點了解糞便標本腸道桿菌的分離鑒定肥達試驗(WidalTest)原理：用已知傷寒沙門菌O、H抗原，以及甲型副傷寒、肖氏沙門菌、希氏沙門菌H抗原的診斷菌液與受檢血清作定量凝集試驗，測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價的試驗。用途：輔助診斷傷寒，副傷寒方法：取小試管32支，分成4排，每排8支，依次標號。于小試管內(nèi)各加入0.5ml生理鹽水。在每一排第1管中各加患者血清0.5ml，吸打混勻，吸取0.5ml加入第2管作對倍稀釋……依次稀釋至第7管棄去0.5ml，第8管為對照。2~3排按同法稀釋。按8.7.…1列的順序，分別對第1排各管加入傷寒H抗原0.5ml；第2排各管加入O抗原0.5ml；同樣對第3排各管加甲型副傷寒（PA）H抗原0.5ml；第4排各管加乙型副傷寒（PB）H抗原0.5ml。將各管混勻，置37℃水浴箱中16~18小時后觀察結(jié)果。肥達試驗結(jié)果觀察根據(jù)凝集反應(yīng)的強弱，分別以“++++、+++、++、+”記錄：++++：液體清澈透明，菌體全部被凝成塊，沉于管底。+++：液體較透明，大部分菌體被凝集而沉于管底。++：液體稍透明，管底有少量凝集沉淀物。+：液體較混濁，可見極少量凝集物。-：液體混濁，細菌因重力下降于管底呈邊緣光滑圓點（與對照管相似）。血清效價（或滴度）：能與一定量的抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集（即“++”凝集）的血清最高稀釋倍數(shù)，稱為血清的效價。血清的效價代表著血清中抗體的含量，其效價愈高，所含抗體的量愈多。如血清最低稀釋倍數(shù)（1∶40）仍無凝集，則視為陰性或效價低于1∶40；如血清的最高稀釋倍數(shù)（1∶1280）仍完全凝集，則示血清效價高于1∶1280。糞便標本腸道桿菌的分離鑒定克氏雙糖鐵培養(yǎng)基尿、靛、動培養(yǎng)基分析結(jié)果SS平板EMB平板挑取可疑菌落玻片凝集試驗糞便SS平板－分離腸道病原菌的強選擇培養(yǎng)基成分和作用：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：提供氮源和碳源膽鹽、枸櫞酸鈉、煌綠：可抑制腸道非致病菌的生長，而對腸道致病菌抑制作用弱。乳糖，中性紅（pH6.8-8.0，紅→橙黃）：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨產(chǎn)生堿性物質(zhì)→菌落淡黃色；大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，菌落呈紅色病原菌:小,無色,半透明非致病菌:大,紅色EMB（EosinMethylBlue)平板－分離腸道病原菌的弱選擇培養(yǎng)基成分和作用：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：提供氮源和碳源伊紅、美藍：可抑制腸道非致病菌的生長，而對腸道致病菌抑制作用弱。乳糖，伊紅、美藍：致病菌不分解乳糖→菌落無色半透明；大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸，菌落呈紫黑色病原菌:半透明,無色非致病菌:紫黑色克氏雙糖鐵培養(yǎng)基接種方法如何觀察上層含乳糖部分乳糖發(fā)酵：致病菌紅色，非致病菌黃色H2S然后觀察下層發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）動力乳糖硫酸亞鐵固體葡萄糖半固體指示劑:酚紅

乳糖葡萄糖硫化氫尿素靛基質(zhì)動力大腸桿菌黃色

+

--++痢疾桿菌紅色

+

--+/--傷寒桿菌紅色

+

+/---+副傷寒桿菌紅色+