微生物實驗培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌農(nóng)學

微生物實驗培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌農(nóng)學第一頁，共十八頁，2022年，8月28日（二）原理：培養(yǎng)基是按照微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的一種基質(zhì)。它包括碳源、氮源、生長因子、無機鹽和水等營養(yǎng)要素。由于不同微生物細胞組成不同，因而所需營養(yǎng)基質(zhì)不同，為了分離、培養(yǎng)和鑒定不同的微生物，必須根據(jù)其需要，配制合適的培養(yǎng)基。第二頁，共十八頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的制備原則：1.根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需要配置不同的培養(yǎng)基。2.調(diào)配好培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的濃度和比例。3.控制微生物的培養(yǎng)條件（滲透壓、pH、氧化還原電位等）細菌牛肉膏蛋白胨放線菌高氏1號真菌查氏、馬丁氏各類M土豆葡萄糖第三頁，共十八頁，2022年，8月28日（三）器材：1.藥品和試劑：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、NaCl、1MNaOH溶液。2.器材：試管、燒杯、量筒、玻璃棒、鐵架臺、漏斗、天平、牛角匙、高壓鍋、微波爐、pH試紙（）、棉花、紗布、線繩、聚丙烯袋等。第四頁，共十八頁，2022年，8月28日（四）步驟：以固體斜面培養(yǎng)基制作為例：計算稱量加熱融化調(diào)pH過濾（可省略）分裝加塞（附棉塞制作）包扎滅菌擺斜面無菌檢查第五頁，共十八頁，2022年，8月28日

1.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準確稱量各成份放于燒杯中。對于不是粉狀藥品（如牛肉膏），應用燒杯和玻璃棒稱量。第六頁，共十八頁，2022年，8月28日2.配制

向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。如果配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂熔化時，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。一般要求瓊脂沸騰3次，完全熔化后，補足所失水分。

第七頁，共十八頁，2022年，8月28日

3.調(diào)節(jié)pH值

培養(yǎng)基溶解均勻后用pH試紙測pH，然后根據(jù)要求加酸或堿（一般用1MHCl和1MNaOH），要緩慢少量且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然pH時，不用調(diào)節(jié)。

4.過濾

用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。第八頁，共十八頁，2022年，8月28日

5.分裝

將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)，管（瓶）口塞上棉塞。固體培養(yǎng)基要趁熱裝。分裝時要避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分裝量如下：

（1）固體斜面培養(yǎng)基：裝量為管長的1/5。

（2）液體培養(yǎng)基：裝量為管長的1/4。（3）半固體培養(yǎng)基：裝載量為管長的1/3。

第九頁，共十八頁，2022年，8月28日6.滅菌

塞棉塞，包扎，滅菌。培養(yǎng)基做完后，要求在2-4小時內(nèi)滅菌，否則會被污染。7.擺斜面滅菌完畢，冷卻到60℃左右再擺斜面，以免產(chǎn)生過多冷凝水。第十頁，共十八頁，2022年，8月28日（五）注意事項：1.稱量要準確，取藥品的角匙不能混用。2.加熱融化時要不斷攪拌，以免糊底和溢出。（每加熱30s看一次）3.蛋白胨極易吸濕，稱取時動作要迅速。4.培養(yǎng)基中如有微量成分，先配成濃縮溶液后再加入。5.節(jié)約藥品。第十一頁，共十八頁，2022年，8月28日牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(g/L)牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂固體培養(yǎng)基為18g；半固體為10g；液體不加。水1000ml121℃滅菌20min第十二頁，共十八頁，2022年，8月28日棉塞制作第十三頁，共十八頁，2022年，8月28日二、消毒滅菌：物理法：加熱、過濾、照射化學法：化學藥品灼燒干熱濕熱加熱高壓間歇煮沸第十四頁，共十八頁，2022年，8月28日原理：加熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)變性達到滅菌的目的。干熱：160-170°C1.5-2h濕熱：121.3°C15-30min紫外線滅菌是誘導胸腺嘧啶二聚體的形成，而抑制了DNA的復制。另外，電離過程中生成的O3和H2O2均有殺菌作用。適用范圍濕熱主要用于各類培養(yǎng)基及液體物質(zhì)干熱主要用于玻璃、金屬等器皿、工具紫外線主要用于接種箱、無菌室內(nèi)空氣及物體表面滅菌第十五頁，共十八頁，2022年，8月28日操作步驟：1.濕熱滅菌（高壓蒸汽）向鍋內(nèi)加入適量的水裝待滅菌物品加蓋

加熱排冷空氣升壓、升溫維持所需溫度20-30min降壓、降溫開蓋取物趁熱擺斜面第十六頁，共十八頁，2022年，8月28日2.干熱滅菌（干燥箱）將待滅菌物品包好裝入待滅菌物品升溫

恒溫降溫（70℃以下）開箱取物

3.紫外線滅菌（接種箱或無菌室內(nèi)）放入待滅菌物品甲醛（酒精）熏蒸開紫外線燈（30min）關燈工作第十七頁，共十八頁，2022年，8月28日注意事項：1.高壓滅菌：切勿脫水工作，排凈冷空氣，工作人員不能遠離，當壓力降到“0”時再開