TCRHA 007-2022 健康獻血者的單個核細(xì)胞資源儲存規(guī)范 第4部分：單個核細(xì)胞的分離、處理與儲存

ICS11.020CCSC05團 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/CRHA007—20224SpecificationformononuclearcellresourcestorageinhealthyblooddonorsPart4：Isolation,processingandcryopreservationofmononuclearcells??2022-06-15發(fā)布 2022-07-01實施中國研究型醫(yī)院學(xué)會??發(fā)布T/CRHA007-2022T/CRHA007-2022II目 次前 言 II引 言 III范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語和定義 1基本原則 1血液分離前準(zhǔn)備工作 1分離與處理 2記錄 4參 考 文 獻 5T/CRHA007-2022T/CRHA007-2022鏈鏈鏈鏈前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是《健康獻血者的單個核細(xì)胞資源儲存規(guī)范》的第4部分?？紤]到本文件中的某些條款可能涉及專利，中國研究型醫(yī)院學(xué)會不負(fù)責(zé)對任何該類專利的鑒別。本文件由中國研究型醫(yī)院學(xué)會臨床數(shù)據(jù)與樣本資源庫專業(yè)委員會提出。本文件由中國研究型醫(yī)院學(xué)會歸口。（深圳（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所、（深圳本文件主要起草人：徐紹坤、曹毓琳、李國喜、王魁星、萬樺、田亞平、趙秀梅、賀媛、程世翔、馬士卉、孫曉艷、林俊堂、周紅梅、徐馳、梁文濤、江婧婧、李霞云。II引 言——第1部分：知情同意與供者篩查?！?部分：采集與運輸?！?部分：供者血液樣本檢測?！?部分：單個核細(xì)胞的分離、處理與儲存?！?部分：單個核細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量評價與放行?！?部分：細(xì)胞資源儲存設(shè)施的設(shè)計與建設(shè)。——第7部分：細(xì)胞資源儲存設(shè)施設(shè)備的運行維護?！?部分：數(shù)據(jù)電子信息化的管理。通過對健康獻血者的單個核細(xì)胞資源儲存過程中的知情同意與供者篩查、采集、運輸、樣本檢測、III4范圍本文件適用于公共庫健康供者單個核細(xì)胞的分離、處理與儲存。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB50457醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設(shè)計規(guī)范T/CMBA011—2020人外周血單個核細(xì)胞的采集、分離和保存術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。單個核細(xì)胞peripheralbloodmononuclearcell,PBMC（造血干細(xì)胞等）。[來源：T/CMBA011—2020，3.1]基本原則采用開放式分離操作時，外周血單個核細(xì)胞的分離和處理應(yīng)至少在GB50457CAGB50457D外周血采集抗凝劑宜優(yōu)先采用肝素類抗凝劑。12h。外周血的分離宜采用密度梯度離心法，可采用開放式分離或密閉分離系統(tǒng)。血液分離前準(zhǔn)備工作30min，并啟動凈化風(fēng)機和空調(diào)系20min75%的乙醇對采血袋外表面自下而上進行清15min11%10%二甲亞砜（DMSO），需經(jīng)驗證符合外周血72h分離與處理開放式操作模式下的血漿及血細(xì)胞分離與處理在潔凈工作臺或生物安全柜內(nèi)將全血血袋中的外周血轉(zhuǎn)移到一次性無菌離心管中，將用完的血2～870.5mL1.5mL第一步離心：在室溫條件（18℃～25℃）下、800g10min。PBS0.91:11:1層的整個過程都應(yīng)注意不能打破淋巴分離液與血液樣本的分界面。第二次離心：在室溫條件（18℃～25℃）下、800g20min，離心速度緩升緩降。單個核細(xì)胞提?。弘x心完畢后，離心管內(nèi)出現(xiàn)明顯分層，由下到上分別為紅細(xì)胞層、淋巴細(xì)胞PBS0.9PBS1:3，混勻。第三次離心：洗滌離心，在室溫條件（18℃～25℃）下、800g10min。PBS0.9%的生理鹽水定容，重懸并混勻。取樣并進行細(xì)胞活率及數(shù)量的計算。6.1.9多聯(lián)袋的全密閉分離系統(tǒng)下的血漿及血細(xì)胞分離與處理采血袋稱重：取含有外周血的采血袋，熱合去除采血針頭后，用電子天平稱量外周血的重量，計算外周血采血量。預(yù)灌裝分離液：通過無菌接管機將淋巴細(xì)胞分離液袋子與多連袋主管連接，轉(zhuǎn)移淋巴細(xì)胞分離液至分離袋中。血液鋪層：采用含有濾網(wǎng)的輸血器，通過無菌接管機將采血袋同多連袋主管連接，打開調(diào)節(jié)閥離心分離：將分離袋及多聯(lián)袋輕柔裝載于離心機適配器中，保持血袋豎立狀態(tài)，設(shè)置離心參數(shù)780g20min74，室溫條件下（18℃～25℃）離心。離心完畢后，動作緩慢輕柔地將分離袋豎直向上提起，放置分解層面被破壞，肉眼可見自上而（白膜層2去血漿、收集細(xì)胞：使用分漿夾分離血漿。將分離袋緩慢放置于分漿夾上，打開多聯(lián)袋中的血（白膜層300.9100mL0.9%氯化鈉注射液，關(guān)閉細(xì)胞收集袋調(diào)速閥門，0.9%的氯化鈉注射液袋子的輸血器高頻熱合去除。輕柔混勻細(xì)胞收集袋。細(xì)胞首次洗滌：將細(xì)胞收集袋及多聯(lián)袋豎立放置于離心機適配器中，設(shè)置離心參數(shù)為，離心力1500g6min97，室溫條件下（18℃～25℃）離心。離心后，放置于血漿夾上，將洗滌液轉(zhuǎn)移至洗滌液收集袋中，關(guān)閉調(diào)速閥門。.8單個核細(xì)胞凍存與儲存3514420min.108×16～2107/mL分裝：按計算凍存數(shù)量準(zhǔn)備一次性無菌凍存管或凍存袋，粘貼細(xì)胞編碼標(biāo)簽并復(fù)核確認(rèn)。將細(xì)程序化冷凍降溫：可采用經(jīng)驗證的全自動程序性降溫儀或程序降溫盒進行單個核細(xì)胞的程序化8012h。程序冷凍降溫完成后，可在深低溫操作平臺上將細(xì)胞轉(zhuǎn)入相應(yīng)的凍存架或凍存盒中，登記細(xì)胞入庫信息并雙人復(fù)核，轉(zhuǎn)入暫存氣相液氮罐中。依據(jù)單個核細(xì)胞入庫相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，完成質(zhì)量評價與放行審核后，將暫存氣相液氮罐中的細(xì)胞產(chǎn)品單個核細(xì)胞應(yīng)儲存于氣相液氮罐中，長期儲存溫度應(yīng)不高于-135℃。穩(wěn)定性考察穩(wěn)定性考察的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)包括但限于以下內(nèi)容：凍存容器完整性和密閉性；3細(xì)胞活率；微生物培養(yǎng)；細(xì)胞凍存復(fù)蘇回收率；細(xì)胞表面標(biāo)記物表達；細(xì)胞生物學(xué)效力。180%，175%。常規(guī)每年至少執(zhí)行一次穩(wěn)定性考察計劃，如遇特殊情況（例如氣相液氮罐故障）可臨時性增加穩(wěn)定性考察計劃。應(yīng)對年度性的穩(wěn)定性考察結(jié)果進行趨勢分析，便于監(jiān)測細(xì)胞儲存的連續(xù)穩(wěn)定性并改進細(xì)胞儲存工藝。記錄原始記錄應(yīng)確保其可追溯單個核細(xì)胞分離、處理和儲存操作所有環(huán)節(jié)，記錄內(nèi)容應(yīng)包含但不限于以下信息：供者身份號碼；產(chǎn)品描述碼、采集類型和分類碼；產(chǎn)品名稱和組分；供者唯一身份辨識符，如適用；采集日期和時間；生產(chǎn)制備機構(gòu)的名稱和地址；制備、保存、凍存中關(guān)鍵步驟的所有細(xì)節(jié)及結(jié)果；關(guān)鍵步驟的日期和時間，如果適用；每一步驟的操作人員姓名；在分離、處理、凍存及儲存過程中使用的所有關(guān)鍵物料的名稱、生產(chǎn)商、批號、有效期限；使用試劑的數(shù)量；使用設(shè)備編碼。記錄的審核：應(yīng)對記錄的準(zhǔn)確性和完整性與法律法規(guī)和規(guī)范的符合性進行審核。記錄的保存：記錄應(yīng)歸檔于受控區(qū)域進行保存，確保整個保存期間記錄的清晰和完整性，并應(yīng)避免意外或非授權(quán)的調(diào)閱、丟失、損壞、破壞、混淆或篡改。記錄的修改：機構(gòu)應(yīng)建立并保持合適的記錄修改程序。記錄修改人的簽名及日期應(yīng)記錄下來；修改前的記錄內(nèi)容應(yīng)清晰可辨認(rèn)。隱私保護：應(yīng)建立保密機制，確保供者、患者、員工信息的保密性。204參 考 文 獻[1]血站技術(shù)操作規(guī)程（2019版）[EB/OL]，（2019-04-28）[2019-05-08]，HYPERLINK