《中藥材中單蒽核類蒽醌含量的測定 離子液體分散液-液微萃取-高效液相色譜法》（征求意見稿）

ICS67.05CCSX04GDFCA廣東省食品流通協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/GDFCA080—XXXX中藥材中單蒽核類蒽醌含量的測定離子液體分散液-液微萃取-高效液相色譜法DeterminationofmononuclearanthraquinonecontentinChineseherbalmedicinebyIL-DLLME-HPLCmethod（征求意見稿）在提交反饋意見時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。2022-XX-XX發(fā)布 2022-XX-XX實(shí)施廣東省食品流通協(xié)會(huì)??發(fā)布T/GDFCA080—XXXXT/GDFCA080—XXXXPAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語和定義 1原理 1試劑和材料 1儀器和設(shè)備 2測定步驟 2結(jié)果計(jì)算 3精密度 3其他 3附錄A（資料性） 高效相色譜測定單蒽醌的典型色譜圖 4前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)起草。本文件由廣東省食品流通協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：本文件主要起草人：本文件為首次發(fā)布。PAGEPAGE1中藥材中單蒽核類蒽醌含量的測定離子液體分散液-液微萃取-高效液相色譜法范圍本文件描述了離子液體分散液-液微萃取中藥材(包括中藥飲片)中的單蒽核類蒽醌，高效液相色譜法測定其含量的要求和方法。本文件適用于中藥材、中藥飲片中單蒽核類蒽醌含量測定，其他植物性食品可參照?qǐng)?zhí)行。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理試樣經(jīng)純水保沸提取，提取液加入1-芐基-3檢測器進(jìn)行檢測，用保留時(shí)間進(jìn)行定性，外標(biāo)法定量。試劑和材料GB/T6682甲醇(CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1)：色譜純。1-芐基-3-甲基咪唑雙(三氟甲烷磺酰)亞胺鹽(BeMimTf2N，CAS號(hào)：433337-24-7)，純度≥98%。磷酸H3PO4,CAS號(hào)：7664-38-2,GR：ρ=1.84g/mL。。氫氧化鈉（NaOH,CAS號(hào)：1310?73?2）φ=50%：用甲醇（5.1）11的體積比混合。BeMimTf2N溶液：50μLBeMimTf2N（5.2）0.7mL甲醇，現(xiàn)配現(xiàn)用。磷酸溶液（110）:10mL磷酸（5.3）100mL水中。氫氧化鈉溶液（2mol/L）80g(5.4)1L。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：大黃素(EmodinC15H10O5，CAS號(hào)：518-82-1≥98%；蘆薈大黃素（Aloe-emodinC15H10O5，CAS號(hào)：481-72-1≥98%(RheinC15H8O6，S號(hào)：8-3≥98%（ChysophnoC5H0O4，S號(hào)：143≥8%。50%甲醇（5.5）溶解稀釋定容配制成大黃素、蘆薈280μg/mL250μg/mL320μg/mL320μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-18℃冷凍避光保存，有效期6個(gè)月。儀器和設(shè)備0.1g0.0001g；渦旋混合器；4000r/min；微孔濾膜：0.22??m微量注射器：50??L；其它實(shí)驗(yàn)室常用器皿：如錐形尖底試管等。測定步驟試樣制備取植物性樣品200g，粉碎后使其全部可通過3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，放入聚乙烯瓶或袋中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于常溫下保存。前處理10g（0.1g）500mL1h，待提取液冷卻后，加入磷酸溶液（5.7）或氫氧化鈉溶液（5.8）pH4.0±0.2，定容至500mL。準(zhǔn)確量取.mL..1放入mL（或移液槍將0LBeMimTf2N溶液（5.6）3min206min。10min3500r/min10minIL（通150μL），供測定。測定液相色譜條件色譜柱：C18色譜柱，250mm×4.6mm，5??m，或性能相當(dāng)者。柱溫：35℃。流動(dòng)相：0.1%磷酸水+甲醇=（20+80，體積比），等梯度洗脫。檢測波長：260nm。進(jìn)樣量：10??L。流速：1.0mL/min。液相色譜測定分別準(zhǔn)確移取經(jīng)超聲、渦旋溶解的大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸和大黃酚各單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100mL棕色容量瓶中，用甲醇（5.1）1.09μg/mL、2.19μg/mL、.8/m.5/m.50μ/mL.00/mL.8μ/m.5μ/mL、3.90μg/mL、7.81μg/mL、15.63μg/mL、31.35μg/mL、大黃酸和大黃酚濃度分別為1.25μg/mL、2.50μg/mL5.00μg/mL10.00μg/mL20.00μg/mL40.00μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液供高效液的高效液相色譜圖見附錄AA.1。空白試驗(yàn)不稱取試樣，按7.2-7.3的步驟做空白實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)不含有干擾待測組分的物質(zhì)。結(jié)果計(jì)算試樣中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚或大黃素的含量按式（1）計(jì)算：??=??×??2························································(1)??×??1式中：??——試樣中待測組分含量（mg/kg）；??——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或單點(diǎn)校準(zhǔn)得到的待測組分溶液濃度（ng/mL）；??1——提取液定容體積（[BeMim][Tf2N]的體積），300μL；??2——試樣溶液定容體積，500mL；??——試樣稱樣量（g）。注：計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算數(shù)平均值的10%；其他本方法蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃酚在1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L的5個(gè)水平添加濃度的范圍內(nèi)的線性范圍、重現(xiàn)性、檢測限及定量限等參數(shù)見表1。表1 方法性范圍、重現(xiàn)性、檢出限、定量限分析物線性回歸方程R2RSD(%)檢測限(μg/L)定量限(μg/L）回收率(%)蘆薈大黃素Y=79053X-500.99933.4073.485.2大黃酸0